李宜樺，邰艷妮，吳獻(xiàn)，林青青，戴成球，謝瑞華，徐偉，褚克丹

（1.福建中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，福建福州350122；2.福建承天藥業(yè)有限公司，福建南平353000）

閩產(chǎn)澤瀉收獲期不同部位萜類成分含量比較

李宜樺1，邰艷妮1，吳獻(xiàn)1，林青青1，戴成球1，謝瑞華2，徐偉1，褚克丹1

（1.福建中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，福建福州350122；2.福建承天藥業(yè)有限公司，福建南平353000）

目的考察收獲期澤瀉不同部位萜類成分含量并進(jìn)行含量比較。方法以23-乙酰澤瀉醇B和澤瀉醇B為指標(biāo)，采用高效液相色譜法Agilent Technologies 1260系統(tǒng)，Ultimate XB-C18色譜柱（4.6 mm×150 mm，5 μm），流動相乙腈∶水（75∶25），檢測波長208 nm，流速1.0 mL·min-1，柱溫30℃。結(jié)果收獲期澤瀉23-乙酰澤瀉醇B的含量為芽＞塊莖＞莖＞塊莖莖皮＞須根＞葉，而澤瀉醇B的含量為塊莖＞芽＞塊莖莖皮＞莖，須根和葉中未檢出。結(jié)論收獲期澤瀉不同部位在兩種萜類成分含量存有差異，其中塊莖和芽中23-乙酰澤瀉醇B和澤瀉醇B含量最高，其含量顯著高于其它部位，收獲期枯萎丟棄的莖和莖皮中也分布有23-乙酰澤瀉醇B和澤瀉醇B，說明其可能也具有一定的藥用價值，具有開發(fā)利用的潛在價值。

澤瀉；23-乙酰澤瀉醇B；澤瀉醇B；含量測定

澤瀉（Alismatis Rhizoma）來源于澤瀉科澤瀉屬植物東方澤瀉Alisma orientale（Sam.）Juzep.，其性甘、淡、寒，具有泄熱、利水滲濕等功效。臨床上經(jīng)過組方，常用于小便不利、痰飲眩暈、高脂血癥等［1］，現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明澤瀉有降血脂、降糖、抗脂肪肝、抗動脈粥樣硬化、抗腫瘤等作用［2-4］?，F(xiàn)代化學(xué)研究表明澤瀉化學(xué)成分以三萜類為主［5］，藥理活性研究表明三萜類成分是澤瀉最主要的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)［6］，而活性報道比較多的為23-乙酰澤瀉醇B、澤瀉醇B、24-乙酰澤瀉醇A、澤瀉醇A。另據(jù)文獻(xiàn)Zhao［7］、趙萬里等［8］澤瀉三萜多成分的定性定量研究表明澤瀉中23-乙酰澤瀉醇B和澤瀉醇B是澤瀉的最主要有效成分，并且23-乙酰澤瀉醇B也是中國藥典中澤瀉的指標(biāo)性成分，因此23-乙酰澤瀉醇B和澤瀉醇B是常常作為評價澤瀉質(zhì)量的主要指標(biāo)［9-11］。

澤瀉自古以來藥用部位均為塊莖。冬季莖葉開始枯萎時采挖地下塊莖部分，洗凈，干燥，以除去須根和莖皮后的塊莖入藥。收獲期采收時，澤瀉地上部分沒有利用，除去的須根和莖皮中是否有澤瀉的有效成分，鮮有研究。因此為了評價收獲期建澤瀉不同部位的活性成分含量，本文采用HPLC法對采收期建澤瀉須根、塊莖莖皮、莖、葉、芽及塊莖6個部位中的23-乙酰澤瀉醇B及澤瀉醇B含量進(jìn)行測定研究，為綜合利用澤瀉資源提供實驗依據(jù)。

1 儀器與試藥

Agilent Technologies 1260型高效液相色譜儀（美國Agilent公司）；Agilent Chem Station工作站；CPA225D型十萬分之一分析天平（德國Sartorius公司）；KQ－500E臺式超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；Milli-Q超純水儀（美國Milli-pore公司）；乙腈為色譜純（德國Merck公司）；水為超純水，其它試劑為分析純。23-乙酰澤瀉醇B對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：111846-201504）；澤瀉醇B對照品（上海源葉生物科技有限公司，批號：18649-93-9）。

按照GAP生產(chǎn)規(guī)范，收獲期澤瀉采自福建建甌吉陽澤瀉GAP基地（2017年1月16日，北緯27° 7′，東經(jīng)118°7′，福建承天藥業(yè)有限公司），在種植基地內(nèi)隨機(jī)采集6個位置點，每個點不少于6株。所有樣品匯總后，地上部分分為莖和葉，地下部位收集最外層塊莖莖皮、塊莖須根、干凈塊莖及塊莖的頂芽，經(jīng)福建中醫(yī)藥大學(xué)藥用植物實驗室范世明高級實驗師鑒定為澤瀉科澤瀉屬植物東方澤瀉（Alisma orientale（Sam.）Juzep.），樣本存放于福建中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院藥用植物學(xué)標(biāo)本室。收獲期澤瀉各個部位經(jīng)過干燥，粉碎，過65目篩，備用。

2 方法與結(jié)果

2.1 對照品溶液制備取澤瀉醇B和23-乙酰澤瀉醇B對照品適量，精密稱定，加入乙腈分別制備含60 μg·mL-1、79.6 μg·mL-1的單一對照品溶液。

2.2 供試品溶液制備精密稱取收獲期澤瀉不同部位（莖、葉、塊莖莖皮、須根、塊莖及芽）粉末各0.5 g，置具塞錐形瓶中，精密加入乙腈25 mL，密塞，超聲處理30 min（功率250 W，頻率50 kHz），放冷，稱定超聲處理前后兩次的重量，用乙腈補(bǔ)足超聲提取減失的重量；搖勻，0.45 μm濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得測試樣品。

2.3 色譜條件采用Ultimate XB-C18（4.6 mm× 150 mm，5 μm）色譜柱；以乙腈-水（75∶25）為流動相，柱溫：30℃，流速：1.0 mL·min-1，進(jìn)樣量：10 μL。該色譜條件下色譜峰分離良好，見圖1～圖3。

圖1 澤瀉醇B對照品HPLC色譜圖

圖2 23-乙酰澤瀉醇B對照品HPLC色譜圖

圖3 澤瀉樣品HPLC色譜圖

2.4 方法學(xué)考察

2.4.1 線性與范圍分別精密吸取澤瀉醇B和 23-乙酰澤瀉醇B對照品溶液，用乙腈稀釋制備澤瀉醇B質(zhì)量濃度為0.60、3、6、15、30、60 μg·mL-1，23-乙酰澤瀉醇B質(zhì)量濃度為0.796、3.98、7.96、19.9、39.8、79.6 μg·mL-1的6種不同質(zhì)量濃度對照品溶液，按“2.3”色譜條件下進(jìn)行分析，分別記錄檢測峰面積，以峰面積（Y）對待測成分質(zhì)量濃度（X，μg·mL-1）進(jìn)行線性回歸，得澤瀉醇B的線性方程為：Y＝78.43X＋19.75（r＝0.999 4），23-乙酰澤瀉醇B的線性方程為：Y＝78.29X＋15.45（r＝0.999 7）。結(jié)果表明在考察的線性范圍內(nèi)，待測成分峰面積和質(zhì)量濃度線性關(guān)系良好。

2.4.2 精密度實驗精密吸取澤瀉醇B和23-乙酰澤瀉醇B對照品溶液，在“2.3項”色譜條件下進(jìn)行分析，連續(xù)檢測6次，記錄澤瀉醇B和23-乙酰澤瀉醇B的峰面積，計算兩者RSD分別為0.72%和0.47%，表明實驗精密度良好。

2.4.3 穩(wěn)定性實驗取澤瀉塊莖供試品0.5 g，按照“2.2”項下制備供試品溶液，分別于1、2、4、8、12、24 h在“2.3項”色譜條件下對樣品進(jìn)行分析，記錄澤瀉醇B和23-乙酰澤瀉醇B的峰面積，計算兩者RSD分別為1.02%和1.38%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.4.4 重復(fù)性實驗取同批次澤瀉塊莖供試品0.5 g，按照“2.2”項下制備供試品溶液，平行操作6份，分別于“2.3項”色譜條件下對樣品進(jìn)行分析，記錄澤瀉醇B和23-乙酰澤瀉醇B的峰面積，計算兩者含量，兩者含量的RSD分別為2.14%和2.05%，表明實驗重復(fù)性良好。

2.4.5 回收率實驗精密稱取重復(fù)性實驗批次澤瀉樣品0.25 g，6份，根據(jù)含量加入近似1∶1的澤瀉醇B和23-乙酰澤瀉醇B對照品，按照“2.2”項下制備供試品溶液，分別于“2.3項”色譜條件下對樣品進(jìn)行分析，記錄澤瀉醇B和23-乙酰澤瀉醇B的峰面積，計算回收率及RSD，結(jié)果見表1。表1表明檢測方法回收率實驗符合分析要求。

表1 加樣回收實驗結(jié)果（n＝6）

2.5 樣品含量測定精密稱取收獲期澤瀉塊莖莖皮、須根、莖、葉、芽及塊莖各0.5 g，按“2.2項”下方法制備供試品溶液，每個部位制備3份供試品液，分別于“2.3項”色譜條件下對樣品進(jìn)行分析，記錄澤瀉醇B和23-乙酰澤瀉醇B的峰面積，計算其含量，見表2。

表2 各樣品中2種成分的平均含量（n＝3，mg／g）

3 討論

本研究通過對澤瀉萜類成分文獻(xiàn)分析，最終選擇活性明顯、含量較高的澤瀉醇B和23-乙酰澤瀉醇B作為檢測指標(biāo)；色譜條件經(jīng)過考察，發(fā)現(xiàn)Ultimate色譜柱分離效果最佳，乙腈-水作為流動相優(yōu)于甲醇-水的分離效果；采用光電二極管陣列檢測器，對澤瀉醇B和23-乙酰澤瀉醇B對照品溶液進(jìn)行全波長掃描（190～400 nm），表明澤瀉醇B、23-乙酰澤瀉醇B在掃描波長范圍內(nèi)為末端吸收，故采用208 nm波長作為檢測波長。

本次的測定結(jié)果顯示：收獲期澤瀉不同部位中澤瀉醇B含量在0.065～0.531 mg／g（其中須根和葉中含量最低且須根和葉中的澤瀉醇B含量無法檢出），而23-乙酰澤瀉醇B含量則在0.089～2.781 mg／g，不同部位23-乙酰澤瀉醇B和澤瀉醇B的含量存在顯著性差異，澤瀉醇B和23-乙酰澤瀉醇B含量在塊莖和芽中高，分別達(dá)到0.531、1.578 mg／g與0.459、2.781 mg／g，遠(yuǎn)高于須根、莖皮、莖和葉。收獲期澤瀉23-乙酰澤瀉醇B的含量高低依次為芽＞塊莖＞莖＞塊莖莖皮＞須根＞葉，而澤瀉醇B的含量為塊莖＞芽＞塊莖莖皮＞莖，須根和葉中未檢出。

查閱文獻(xiàn)，目前對于收獲期澤瀉的不同部位萜類成分含量比較鮮有研究報道，但是對于澤瀉采收期塊莖的萜類活性成分的積累已有研究：1998年文紅梅等［12］研究川澤瀉最佳采收期后認(rèn)為：萜類成分在1-3月基本一致，而4月以后含量升高；2007年劉紅昌等［13-14］對不同育苗期、移栽期和采收期川澤瀉萜類成分積累、質(zhì)量變化進(jìn)行細(xì)致研究后認(rèn)為：澤瀉最佳采收期為12月下旬；而蔣軼倫等［15］采用指紋圖譜和萜類成分含量測定相結(jié)合的方法，考察了閩產(chǎn)GAP基地建澤瀉移栽之后80～144 d共計10個采樣點的動態(tài)變化，結(jié)果表明指紋圖譜在澤瀉移栽122～144 d，即1月初到1月末的時候，指紋圖譜趨于穩(wěn)定，從兩種萜類成分含量積累來看，同樣也是122～144 d，即1月初到1月末的時候含量積累達(dá)到最高值。因此，根據(jù)文獻(xiàn)的調(diào)研結(jié)果及GAP基地的生產(chǎn)規(guī)范，本研究取地上部分及不同部位研究的時間選擇吉陽GAP采收規(guī)范的采收期時間（1月中旬），采樣時間滿足收獲期樣品的實驗要求，同時為了使研究樣品的具有足夠代表性，本實驗樣品取自種植基地示范田的6個隨機(jī)位置，每個位置不少于6株，所有收集的樣品進(jìn)行匯總?cè)訙y定，能夠反映本年度基地收獲期澤瀉的不同部位萜類成分分布情況。

根據(jù)實驗測定結(jié)果，對于收獲期澤瀉的莖皮和莖，雖然兩者澤瀉醇B和23-乙酰澤瀉醇B的含量偏少，但是這兩部分的生物量均較多，因此也可能具有一定的藥用價值，可以作為澤瀉萜類開發(fā)利用或棄物再利用的潛在部位。

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R284.2

A

1000-338X（2017）04-0057-03

2017-07-05

國家中醫(yī)藥管理局項目（ZYBZH-Y-FJ-09）；福建省大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練項目（2017）

李宜樺（1993—），女，2015級中藥學(xué)專業(yè)碩士研究生，主要從事中藥質(zhì)量控制研究。

褚克丹（1963—），女，教授。E-mail：chukd5917@163.com