徐 玲，張鴨關(guān)，陳自宏*，陳 凱，楊曉娜

4種蟲生真菌對儲糧害蟲黃粉蟲不同蟲態(tài)的生防研究

徐 玲1，張鴨關(guān)2，陳自宏1*，陳 凱1，楊曉娜1

(1.保山學(xué)院高黎貢山生物資源研究所，云南保山 678000;2.曲靖師范學(xué)院化學(xué)化工學(xué)院，云南曲靖 655011)

【目的】通過研究蟲生真菌對黃粉蟲不同蟲態(tài)的生防效果，以期為儲糧害蟲的生物防治提供參考?！痉椒ā吭趯嶒炇夷M干燥的儲糧環(huán)境，測定了4種蟲生真菌菌株(金龜子綠僵菌MAX-2、玫煙色棒束抱IFK-20、球抱白僵菌BBL-3、蟬棒束抱ICG-1)對黃粉蟲3種不同蟲態(tài)(8齡幼蟲、蛹、剛羽化的成蟲)的生防效果。【結(jié)果】在模擬儲糧環(huán)境中，BBL-3對3種蟲態(tài)的毒力都較低，說明該菌株不適宜在干燥條件下發(fā)揮作用;MAX-2對幼蟲和成蟲的毒力都最高，IFK-20其次;抱子懸液處理蛹，ICG-1致死速度最快，其次為MAX-2與IFK-20;ICG-1在模擬儲糧環(huán)境中對幼蟲和成蟲無毒力，但用其抱子懸液處理蛹，毒力卻達(dá)到最高，說明蟲生真菌有的對不同蟲態(tài)的毒力較穩(wěn)定，而有的可能只在昆蟲某些發(fā)育階段或在特定環(huán)境中發(fā)揮有效作用。對MAX-2侵染黃粉蟲不同蟲態(tài)的特征進(jìn)行了描述，發(fā)現(xiàn)其防治害蟲的效果具有持續(xù)性，部分被感染的幼蟲和蛹可以帶菌生存，但生活力下降，有的發(fā)育畸形，最終都會死亡?！窘Y(jié)論】不同蟲生真菌菌株對不同蟲態(tài)的毒力差異顯著，同一菌株對不同蟲態(tài)的毒力也不同。除ICG-1外其它3株菌在黃粉蟲不同發(fā)育階段都具有較好防效，MAX-2對3種蟲態(tài)的持續(xù)防效最好，有望應(yīng)用于儲糧害蟲的生物防治。

蟲生真菌;儲糧害蟲;黃粉蟲;毒力;生物防治

糧食安全直接關(guān)系到國家安全和社會穩(wěn)定，儲糧害蟲是直接影響糧食產(chǎn)量和品質(zhì)的重要因素之一?；瘜W(xué)農(nóng)藥雖然見效快，但往往毒性高、用量大、用藥次數(shù)頻繁，安全危害性極大[1]?！狙芯恳饬x】蟲生真菌是一種重要的環(huán)境友好型生防資源，但其活性在干燥的儲糧環(huán)境中會受到限制。真菌發(fā)揮活性需要較高濕度條件，在相對干燥的儲糧環(huán)境中其作用容易受到限制[2]，改良菌株的耐旱性或篩選耐旱的病原真菌有望提高對儲糧害蟲的防治，減少農(nóng)藥對人畜和環(huán)境的危害?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】儲糧害蟲又稱倉庫害蟲，其種類多、分布廣、繁殖力高、適應(yīng)性強，使許多儲糧、中藥材、食品、干果等受到巨大損失。近年來，隨著社會經(jīng)濟(jì)文明的發(fā)展，尋找綠色的儲糧害蟲防治方法來替代化學(xué)保護(hù)劑和熏蒸劑的研究越來越受到人們的重視[3]。生物防治是害蟲綜合治理的重要組成部分，具有環(huán)境友好、安全無毒、費用較低等優(yōu)點，目前在防治儲糧害蟲方面主要應(yīng)用的方法包括利用昆蟲激素、天敵昆蟲、病原微生物等。用病原微生物防治儲糧害蟲已有成功范例，如蘇云金芽孢桿菌、冰核細(xì)菌等[4]，但用蟲生真菌防治儲糧害蟲的研究較有限。蟲生真菌可穿透害蟲表皮進(jìn)行侵染，具有較強流行性和持續(xù)控制的優(yōu)勢，加強對防治儲糧害蟲的真菌資源研究具有重要意義?！颈狙芯康那腥朦c】儲糧害蟲的發(fā)育過程需經(jīng)歷卵、幼蟲、蛹、成蟲4個階段，不同蟲態(tài)具有不同的生命活動狀態(tài)，對蟲生真菌的敏感性也不同[5]。許多儲糧害蟲都具有耐干旱的特性，黃粉蟲是一種較普遍的儲糧害蟲，在含水量很低的干燥環(huán)境中能健康完成整個生活史?！緮M解決的關(guān)鍵問題】本研究以黃粉蟲生活史不同階段的蟲態(tài)為對象，用干燥麩皮培養(yǎng)基模擬儲藏糧食，分析應(yīng)用較廣泛的蟲生真菌金龜子綠僵菌(Metarhizium anisopliae)、球孢白僵菌(Beauveria bassiana)、玫煙色棒束孢(Isaria fumosorosea)、蟬棒束孢(Isaria cicadae)在干燥環(huán)境中感染黃粉蟲不同蟲態(tài)的效果，為儲糧害蟲的生物防治研究奠定基礎(chǔ)。

表1 蟲生真菌菌株的來源Table 1 Origin of entomogenous fungus strains

1 材料與方法

1.1 試驗材料

菌株:從云南省內(nèi)不同地區(qū)分離純化得到4種蟲生真菌菌株(表1)。

昆蟲材料:由保山學(xué)院高黎貢山生物多樣性資源開發(fā)利用研究室通過無菌培養(yǎng)形成的黃粉蟲(發(fā)明專利號ZL201110360999.7)[6]生活史不同階段蟲態(tài)。

原菌劑培養(yǎng)基M1:麩皮400 g、玉米粉100 g、米糠100 g、自來水600 mL，拌勻后分裝入培養(yǎng)瓶，100克/瓶，常規(guī)滅菌30 min備用。

干燥麩皮培養(yǎng)基M2:麩皮500 g、玉米粉100 g、黃豆粉50 g，混勻分裝入150 mL罐頭瓶，20 g/瓶，常規(guī)滅菌30 min備用。

1.2 研究方法

1.2.1 蟲生真菌原菌劑制備 在PPDA培養(yǎng)基平皿上活化4種蟲生真菌菌株，用直徑5 mm的打孔器分別取3個菌塊接種到原菌劑培養(yǎng)基M1上，攪拌均勻，于25℃恒溫培養(yǎng)20 d，得到富含不同蟲生真菌分生孢子的培養(yǎng)物。將各培養(yǎng)物自然陰干，粉碎，過60目篩，制成蟲生真菌原菌劑，測得其含水率為8%。采用平板稀釋涂布法檢測每克培養(yǎng)基中蟲生真菌分生孢子含量。

1.2.2 蟲生真菌接種黃粉蟲幼蟲和成蟲 用干燥麩皮培養(yǎng)基M2模擬黃粉蟲生長的儲糧環(huán)境。分別取各蟲生真菌原菌劑適量，接入裝有100 g培養(yǎng)基M2的罐頭瓶中，攪拌均勻。根據(jù)原菌劑的孢子含量調(diào)整不同菌株的接種量，使終濃度約為5×108孢子/g。

分別選個體大小相近的8齡幼蟲、剛羽化的成蟲和羽化1周后成熟的成蟲作為寄主進(jìn)行接種。每瓶加入10只寄主，重復(fù)4瓶。以空白培養(yǎng)基M2(不加蟲生真菌分生孢子)中培養(yǎng)黃粉蟲幼蟲(或成蟲)為對照。在室溫下(20～25℃)進(jìn)行培養(yǎng)，每天觀察計數(shù)寄主感染及死亡數(shù)量。

1.2.3 蟲生真菌接種黃粉蟲蛹 分別取適量蟲生真菌原菌劑，加入到含20 mL無菌水的小燒杯中，滴加2滴吐溫80，攪拌均勻制成孢子懸液，調(diào)整孢子懸液濃度為5×108孢子/mL。選剛化蛹的黃粉蟲蛹作為寄主進(jìn)行接種，將蛹在孢子懸液中蘸1 s，在無菌濾紙片上吸干表面水分后放置在含無菌濾紙片的平皿內(nèi)，每皿放5只，每個菌株重復(fù)4皿。以黃粉蟲蛹在無菌水中蘸1 s，吸干表面水分后放置在含無菌濾紙片的平皿內(nèi)為對照。在室內(nèi)溫濕度下進(jìn)行靜置(不進(jìn)行保濕處理)，每天觀察計數(shù)蛹感染及死亡數(shù)量。

圖1 接種蟲生真菌后黃粉蟲逐日累計死亡率Fig.1 Cumulativemortality rates of T.molitor every day after inoculated by entomogenous fungi

2 結(jié)果與分析

2.1 蟲生真菌菌株對黃粉蟲的毒力檢測

分別用4種蟲生真菌菌株處理黃粉蟲幼蟲、蛹和剛羽化的成蟲，結(jié)果顯示，對照幼蟲、蛹和成蟲都正常生長，沒有出現(xiàn)死亡現(xiàn)象，而接種了蟲生真菌的黃粉蟲不同蟲態(tài)都出現(xiàn)了不同程度的死亡情況。

黃粉蟲幼蟲和成蟲在干燥麩皮培養(yǎng)基中爬行能力較強，并大量進(jìn)食含孢子的基質(zhì)，易接觸孢子導(dǎo)致被感染。從昆蟲的逐日累計死亡率和半致死時間(LT50)來看，4個蟲生真菌菌株對黃粉蟲幼蟲和剛羽化的成蟲的毒力都為金龜子綠僵菌MAX-2最強，玫煙色棒束孢IFK-20其次，球孢白僵菌BBL-3較弱，而蟬棒束孢ICG-1無毒力(圖1，表2)。蟲生真菌接種幼蟲，MAX-2和IFK-20都在接種第7天幼蟲開始出現(xiàn)死亡。MAX-2的LT50最短，平均為8.375 d(201 h)，與其它菌株差異顯著，第11天死亡率達(dá)到最高為80%。IFK-20的LT50平均為10 d(240 h)，顯著短于BBL-3，第12天死亡率達(dá)到最高為65 %。BBL-3接種第8天幼蟲開始出現(xiàn)死亡，LT50平均為11.5 d(276 h)，第12天死亡率達(dá)到最高為50 %。蟲生真菌接種剛羽化的成蟲，MAX-2、IFK-20和BBL-3都在接種第4天成蟲開始出現(xiàn)死亡，MAX-2的致死速度最快，LT50平均為5.167 d(124 h)，與其它菌株差異顯著，第7天死亡率達(dá)到最高為100%。IFK-20的LT50平均為5.979 d(143.5 h)，BBL-3的LT50平均為6.063 d(145.5 h)，二者差異不顯著;但I(xiàn)FK-20殺蟲效果持續(xù)時間較長，第9天死亡率達(dá)到最高為97.5%，BBL-3接種第8天死亡率達(dá)到最高為90%，說明IFK-20對成蟲的生防效果也具有一定優(yōu)勢。用ICG-1接種后，黃粉蟲幼蟲和成蟲都沒有出現(xiàn)感染和死亡現(xiàn)象，說明在干燥的儲糧環(huán)境中ICG-1對黃粉蟲幼蟲和成蟲均無毒力。

黃粉蟲蛹在分生孢子懸液中蘸1 s使孢子附著到蛹上，然后吸干表面水分并進(jìn)行靜置處理(不保濕)。通過此方法處理，4個蟲生真菌菌株都能高效侵染蛹，且致死率都能達(dá)到100%。從蛹的逐日累計死亡率和LT50來看，ICG-1的致死速度最快，接種第2天開始出現(xiàn)死亡，LT50平均為3.083 d(74 h)，與其它菌株差異顯著，完全致死時間為5 d。MAX-2、IFK-20和BBL-3都為接種第3天開始出現(xiàn)死亡。MAX-2的LT50平均為4.917 d(118 h)，略短于IFK-20，但差異不顯著，其完全致死時間較短為7 d。IFK-20的LT50平均為5.083 d(122.5 h)，完全致死時間為8 d。BBL-3的致死速度最慢，LT50平均為7. 417 d(178 h)，完全致死時間為10 d。

表2 蟲生真菌菌株對黃粉蟲不同蟲態(tài)的毒力Table 2 The efficacy of entomogenous fungus strains against T.molitor at different stages

圖2 MAX-2對黃粉蟲不同蟲態(tài)的侵染特征Fig.2 Infective characteristics of MAX-2 against T.molitor at different stages

2.2 金龜子綠僵菌MAX-2對黃粉蟲不同蟲態(tài)的侵染特征

黃粉蟲幼蟲在接種了金龜子綠僵菌原菌劑的麩皮培養(yǎng)基上(圖2a)培養(yǎng)。幼蟲和成蟲會鉆到培養(yǎng)基中或在培養(yǎng)基表面爬行，體表接觸分生孢子，取食過程中也會促進(jìn)分生孢子進(jìn)入腸道，為分生孢子附著于黃粉蟲提供了機(jī)會。黃粉蟲蛹一般在麩皮培養(yǎng)基中靜止不動，有時可以擺動腹部進(jìn)行短距離移動，由于運動能力較差，附著在蛹表面的分生孢子不易清除，易被蟲生真菌分生孢子感染。

幼蟲被感染初期，蟲體行動變得緩慢，3～4 d后蟲體體壁局部出現(xiàn)黑褐色斑點，黑斑逐漸蔓延至1～2個體節(jié)(圖2b)。幼蟲在死亡之前都會爬到麩皮培養(yǎng)基表面靜止不動，死亡蟲體逐漸變干(圖2d)。如果在培養(yǎng)基表面噴灑無菌水，培養(yǎng)基和蟲體體表很快形成綠僵菌菌絲和孢子(圖2e)。少數(shù)幼蟲可以通過脫皮而暫時逃脫和幸存下來(圖2c)，將其挑到新的未接菌培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)，可以生長至化蛹或成蟲階段，但生長較緩慢，生活力低，最終逃脫不了死亡，有的在蛹的階段死亡，有的能繼續(xù)羽化為畸形成蟲，即使個別能形成正常成蟲也會在羽化完后很快死亡。

被感染的蛹有的迅速死亡，有的體壁局部也形成黑褐色斑點或斑塊后死亡(圖2f-g)。死亡的蛹如果保持在此干燥培養(yǎng)基上則會逐漸變干(圖2j)，如果轉(zhuǎn)移到濕潤環(huán)境或在培養(yǎng)基表面噴灑水分則綠僵菌菌絲和孢子會迅速布滿培養(yǎng)基和蛹的表面(圖2k-l)。少數(shù)被感染的蛹能夠進(jìn)行羽化，發(fā)育形成畸形成蟲后死亡(圖2h-i)，即使能發(fā)育為正常成蟲也會在成蟲早期死亡。

被感染的成蟲會多數(shù)在剛發(fā)育為體表淺黃褐色(圖2m-n)或深黃褐色(圖2o-p)階段時即死亡，少數(shù)可能發(fā)育到體表顏色變?yōu)楹诤稚?圖2q-r)時才死亡。成蟲被感染后會爬到麩皮培養(yǎng)基表面靜止不動直至死亡，并變干。有的成蟲腹部也會出現(xiàn)黑褐色斑點，在保持濕潤的環(huán)境中，蟲體表面會形成菌絲和孢子層(圖2s)。

3 討 論

自然界中蟲生真菌資源非常豐富，利用蟲生真菌來防治儲糧害蟲的研究還需加強。本研究為尋找實驗室分析蟲生真菌防治儲糧害蟲簡便易行可靠的方法，根據(jù)黃粉蟲生活史不同階段蟲態(tài)的活動能力不同，采用了不同的施菌方式以促進(jìn)其感染。在實驗室處理或飼養(yǎng)的昆蟲大都處于受脅迫、免疫機(jī)制受抑制的狀況，所以實驗室生測環(huán)境要盡量接近正常的飼養(yǎng)環(huán)境[7]。Kavallieratos等[8]用真菌孢子懸浮液分別處理儲糧害蟲玉米象及其食物來評價幾種蟲生真菌的生防效果，發(fā)現(xiàn)食物缺乏時害蟲更易被致死。儲糧倉庫通常封閉，環(huán)境穩(wěn)定，儲藏糧食堆積，害蟲的食物充足，危害期長，病原真菌的自然發(fā)生率較低[9]。本研究采用蟲生真菌的原菌劑與干燥麩皮培養(yǎng)基混合后處理黃粉蟲幼蟲和成蟲，幼蟲和成蟲階段活動能力強，需要大量進(jìn)食，用干燥麩皮培養(yǎng)基模擬儲藏糧食以為其提供充足的食物。糧食儲藏期間要求較低的含水量，如小麥粉[10]和玉米粒[11]通常應(yīng)控制水分低于14%方能安全收儲。干燥麩皮培養(yǎng)基配置不加水分，滅菌后含水量為8%，低于多數(shù)儲糧要求的含水量。以不接種真菌的干燥麩皮培養(yǎng)基飼養(yǎng)昆蟲為對照，對照生命力旺盛，可以順利完成其生活史。蟲生真菌生防制劑包括原菌劑、粉劑、懸乳劑、顆粒劑、無紡紗布條等[12]，儲糧在存放過程中需要干燥防霉變，故儲糧害蟲的防治選擇原菌劑或粉劑更具實用性。原菌劑的制備仿照柴新義[13]和黃寶靈[14]生產(chǎn)蟲生真菌粉劑的方法，并進(jìn)行了簡化。Miolan等將蠶白僵菌分生孢子和高嶺土均勻混合后施于儲藏的玉米棒上，分別放入2種倉蟲，分析蠶白僵菌對儲藏玉米棒中大谷長蠢和玉米象的防治效果[15]。本研究處理儲糧害蟲的方法與其類似，都是給害蟲提供模擬的儲糧環(huán)境，再接種蟲生真菌。黃粉蟲蛹運動能力差，如果也接入干燥麩皮培養(yǎng)基中，通常在基質(zhì)表面靜止不動，而培養(yǎng)基基質(zhì)較干燥、顆粒較大(圖2a)，蛹體表接觸孢子的機(jī)會較少，不易感染，且蛹不需要進(jìn)食，不必提供基質(zhì)作為食物，故改用在分生孢子懸液中蘸1 s使孢子附著到蛹上后吸干表面水分，并進(jìn)行不保濕靜置處理。此處理中，蛹通常靜止不動，偶爾會擺動腹部進(jìn)行短距離移動，運動幅度很小，不易將分生孢子脫落，感染的幾率較大，死亡率較高。

蟲生真菌不同菌株間的毒力、產(chǎn)孢能力和環(huán)境適應(yīng)能力差異都很大，篩選毒力高、環(huán)境適應(yīng)能力強的菌株可以提高蟲生真菌的生防應(yīng)用潛力[16-17]。本研究在干燥的模擬儲糧環(huán)境中檢測4個蟲生真菌菌株對黃粉蟲不同蟲態(tài)的毒力，結(jié)果顯示不同菌種或菌株的毒力差異較大，同一蟲生真菌對昆蟲不同蟲態(tài)的毒力也存在差異。有的菌株對黃粉蟲不同蟲態(tài)毒力都較高，如綠僵菌MAX-2對幼蟲和成蟲的毒力都最高，對蛹的毒力也較高;玫煙色棒束孢IFK-20對幼蟲、蛹和成蟲的毒力都僅次于金龜子綠僵菌MAX-2。有的菌株對黃粉蟲不同蟲態(tài)的毒力都較低，如球孢白僵菌BBL-3。而有的菌株只在黃粉蟲某些發(fā)育階段具有毒力，如蟬棒束孢ICG-1對幼蟲和成蟲都沒有出現(xiàn)感染和致死的情況，但其對蛹的毒力卻超過金龜子綠僵菌MAX-2，達(dá)到最高，這可能與不同蟲態(tài)的結(jié)構(gòu)及接種方式、接種環(huán)境不同有關(guān)，其侵染機(jī)制還有待研究。較多的研究發(fā)現(xiàn)綠僵菌和白僵菌對儲糧害蟲生防效果較好[7-9，18]，但同一種真菌不同菌株間的活性存在著很大的差異，如Adane等[19]分離的1個白僵菌菌株對玉米象有很強抑制作用，而Moino[20]等用61個白僵菌菌株控制玉米象卻只有微弱的活性。本研究中球孢白僵菌BBL-3對幼蟲、蛹和成蟲的毒力都較低，而金龜子綠僵菌MAX-2對黃粉蟲幼蟲、成蟲的毒力最高，對蛹的毒力也較高，這可能與菌株的毒力和環(huán)境適應(yīng)能力有關(guān)。Searle等[21]研究白僵菌抑制鋸谷盜的作用，發(fā)現(xiàn)環(huán)境濕度是一個關(guān)鍵因素，在糧食安全水分的儲藏條件下，白僵菌難于控制鋸谷盜的數(shù)量。綠僵菌菌株MAX-2具有較強的耐旱侵染能力[22]，與其它蟲生真菌菌株相比具有毒殺速度較快、累計致死率較高的優(yōu)勢，說明該菌株在儲糧害蟲的生物防治中具有較大的應(yīng)用潛力。玫煙色棒束孢IFK-20對不同蟲態(tài)的毒力都僅次于MAX-2，蟬棒束孢ICG-1對黃粉蟲蛹的毒力甚至高于MAX-2，這些菌株在儲糧害蟲不同階段的生防應(yīng)用潛力值得研究。

在干燥的模擬儲糧環(huán)境中接種蟲生真菌，剛羽化的成蟲被致死的速度更快，分析原因一方面可能是實驗的幼蟲蟲齡(8齡)較高，而成蟲為剛羽化，其抗侵染的能力存在差異;另一方面可能是由于黃粉蟲幼蟲較耐干旱脅迫[23]，故在干燥的模擬儲糧環(huán)境中對病原菌侵染的抗性較強。李世廣[23]發(fā)現(xiàn)同一菌株對不同生理狀態(tài)的棉鈴蟲毒力差異顯著，低齡幼蟲較為敏感，剛脫皮幼蟲極易受感染。閆鵬飛[24]等報道不同蟲態(tài)的扶桑綿粉蚧對蠟蚧輪枝菌的敏感性由高到低為2齡若蟲、成蟲、3齡若蟲、1齡若蟲。試驗中還發(fā)現(xiàn)，部分被感染的幼蟲可以通過脫皮而暫時逃脫幸存下來，部分被感染的蛹也可以帶菌生存并羽化為成蟲，但它們最終都逃脫不了死亡的命運，且在帶菌生存的過程中生活力下降，可能出現(xiàn)發(fā)育畸形，說明蟲生真菌防治害蟲的效果具有持續(xù)性。李世廣等[25]報道，白僵菌處理煙青蟲幼蟲，有的體內(nèi)帶菌而不立即死亡，但生活力和繁殖力降低;白僵菌處理棉鈴蟲幼蟲，致死效應(yīng)可持續(xù)到成蟲期。用球孢白僵菌處理玉米可以至少持續(xù)保護(hù)玉米6個月免遭玉米象危害。

4 結(jié) 論

在模擬的干燥儲糧環(huán)境中，不同蟲生真菌菌株對黃粉蟲不同蟲態(tài)的毒力差異顯著，同一菌株對不同蟲態(tài)的毒力也不同。MAX-2對幼蟲和成蟲的毒力都最高，IFK-20其次，這2株菌對蛹也具有較高的致病力。綜合來看，MAX-2對3種蟲態(tài)的持續(xù)防效最好，在儲糧害蟲的生物防治上具有較大的應(yīng)用潛力。BBL-3在干燥條件下對3種蟲態(tài)都具有毒力，但毒力都較低;ICG-1用孢子懸液處理蛹時具有最高的毒力，但在干燥條件下對幼蟲和成蟲無毒力，這2株菌株不適宜應(yīng)用于儲糧害蟲防治。

[1]楊育峰，賈連東，李君霞，等.4種藥劑對甘薯地下害蟲的防治效果研究[J].西南農(nóng)業(yè)學(xué)報，2015，28(5):2075-2078.

[2]Liu Z L，Goh SH，Ho SH.Screening of Chinesemedicinal herbs for bioactivity against Sitophilus zeamais Motschulsky and Tribolium castaneum(Herbst)[J].JStored Prod Res.，2007，43:290-296.

[3]de Carvalho Barbosa Negrisoli CR，Negrisoli Júnior AS，BernardiD. Activity of eight strains of entomopathogenic nematodes(Rhabditida: Steinernematidae，Heterorhabditidae)against five stored product pests[J].Exp Parasitol，2013，134(3):384-288.

[4]Subramanyam B H，Hagstrum D W.Alternatives to pesticides in stored-product IPM[M].Boston/Dordrecht/Londonl:Kluwer Academic Publishers，2000:105-146.

[5]Sharififard M，Mossadegh M S，Vazirianzadeh B，et al.Laboratory evaluation of pathogenicity of entomopathogenic fungi，Beauveria bassiana(Bals.)vuill.and Metarhizium anisopliae(Metch.)Sorok to larvae and adults of the house fly，Musca domestica L.(Diptera: Muscidae)[J].Asian JBiol Sci，2011，4(2):128-137.

[6]徐 玲，陳自宏.無菌培養(yǎng)黃粉蟲的方法[P].專利號ZL201110360999.7，授權(quán)日:20150211.

[7]黃 翠，王 品，陳 雪，等.球孢白僵菌松毛蟲分離株對家蠶的致病力[J].中國生物防治學(xué)報，2014，30(2):199-209.

[8]Kavallieratos NG，Athanassiou CG，AountalaM M，etal.Evaluation of the entomopathogenic fungi Beauveria bassiana，Metarhizium anisopliae，and Isaria fumosorosea for control of Sitophilus oryzae[J].J Food Prot.，2014，77(1):87-93.

[9]Oduor G I，Smith SM，Chandi E A，etal.Occurrence of Beauveria bassiana on insect pests of stored maize in Kenya[J].JStored Prod Res，2000，36:177-185.

[10]袁 建，宋 佳，鞠興榮.小麥粉儲藏期間水分變化規(guī)律的探討[J].糧食儲藏，2009，38(6):39-42.

[11]石天玉，趙會義，張洪清，等.組掛式糧食干燥倉處理高水分玉米工藝試驗[J].糧食食品科技，2014，22(2):107-111.

[12]王 濱，樊美珍，李增智.真菌殺蟲劑劑型的研究與應(yīng)用[J].安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2003，30(2):206-209.

[13]柴新義.球孢白僵菌半固體發(fā)酵生產(chǎn)工藝及應(yīng)用蟲生真菌防治松墨天牛的研究[D].安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)，2004.

[14]黃寶靈，方麗英，呂成群.一種防治松突圓蚧的蟲生真菌粉劑及其生產(chǎn)方法和用途[P].專利號CN200810073988，授權(quán)日: 20110914.

[15]唐為民，劉玉玲.國外儲糧害蟲防治研究進(jìn)展[J].糧食食品科技，2004，12(6):24-26.

[16]Ment D，Gindin G，Glazer I，et al.The effect of temperature and relative humidity on the formation of Metarhizium anisopliae chlamdospores in tick eggs[J].Fungal Biol，2010，114:49-56.

[17]譚 清，高 熹，龐仁乙，等.家蠅不同蟲態(tài)附著蠟蚧輪枝菌分生孢子能力及與其體表結(jié)構(gòu)的關(guān)系[J].南方農(nóng)業(yè)學(xué)報，2015，46 (1):241-249.

[18]WakilW，Usman Ghazanfar M，Yasin M.Naturally occurring entomopathogenic fungi infecting stored grain insect species in Punjab，Pakistan[J].J Insect Sci.，2014，14:182.

[19]Adane K，Moore D，Archer SA.Preliminary studies on the use of Beauveria bassiana to control Sitophilus zeamais(Coleoptera:Curcul ionidae)in the laboratory[J].JStored Prod Res，1996，32:105-113.

[20]Moino A，Alves SB，Pereira R M.Efficacy of Beauveria bassiana (Balsamo)Vuillemin isolates for control stored-grain pests[J].J Appl Entomol.，1998，122:301-305.

[21]Searle T，Doberski J.An investigation of the entomogenous fungus Beauveria bassiana(Bals.)Vuill.as a potential biological control agent for Oryzaephilus surinamensis[J].JStored Prod Res.，1984，20:17-23.

[22]Chen Z H，Xu L，Yang F L，et al.Efficacy of Metarhizium anisopliae isolate MAX-2 from Shangri-la，China under desiccation stress [J].BMCMicrobiol，2010，114:49-56.

[23]Clopton R E，Janovy J Jr.Developmental niche structure in the gregarine assemblage parasitizing tenebrio molito r[J].J Parasitol，1993，79(5):701-709.

[23]李世廣，林華峰.不同條件下幾種蟲生真菌對棉鈴蟲的侵染致病效應(yīng)[J].華東昆蟲學(xué)報，2003，12(1):29-34.

[24]閆鵬飛，孫躍先，鄧裕亮，等.蠟蚧輪枝菌KMZW-1菌株對扶桑綿粉蚧的毒力測定[J].華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2013，32(4):38-42.

[25]李世廣，林華峰，徐慶豐.幾種蟲生真菌對煙青蟲的致病性研究[J].安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2001，28(4):376-379.

(責(zé)任編輯 王家銀)

Biocontrol of 4 Entomogenous Fungi on Different Stages of Tenebrio molitor

XU Ling1，ZHANG Ya-guan2，CHEN Zi-hong1*，CHEN Kai1，YANG Xiao-na1
(1.Institute of Biological Resources of Gaoligong Mountains，Baoshan University，Yunnan Baoshan 678000，China;2.College of Chemistry and Environmental Science，Qujing Normal University，Yunnan Qujing 655011，China)

【Objective】The biocontrol effects of different entomogenous fungus on different stages of Tenebriomolitor were tested so as to provide a reference for biological control of stored grain insects.【Method】In dry environment with simulated grain storage，the effects of 4 strains(Metarhizium anisopliae MAX-2，Isaria fumosorosea IFK-20，Beauveria bassiana BBL-3，Isaria cicadae ICG-1)on 3 stages of T. molitor(larvae of8 instars，pupa，newly emerged adults)were tested.【Result】In the environmentwith simulated grain storage，BBL-3 had relatively low virulence to 3 stages of insects，showing that itwas not appropriate to effect in desiccation.The virulence of MAX-2 was the highest both to the larvae and the adults，IFK-20 was the second.For the pupae treated by spore suspension，the lethal speed of ICG-1 was the fastest，then MAX-2 and IFK-20.ICG-1 showed no virulence to the larvae and the adults in the environmentwith simulated grain storage，but its virulence could reach the highest，suggesting that some of the entomogenous fungi could keep stable virulence at different stages of insects，while somemight only play an effective role at certain developmental stage of insects or in specific environment.The infective characteristics of MAX-2 against T.molitor at different stageswere described，showing that its control efficacy was sustainable.Some of the infected larvae and pupa could survive as carriers，while their viability declined and some turned developmentalmalformation，eventually leading to death.【Conclusion】The virulence for strains of different specieswas significantly differentand the virulence for the same strain to different stages of insectswas also different.These strains except ICG-1 had good effect at different stages of T.molitor and MAX-2 showed the best sustainable efficacy to 3 stages of T.molitor，indicating hopeful application for biological control of stored grain insects.

Entomogenous fungus;Stored grain insects;Tenebriomolitor;Virulence;Biological control

S379

A

1001-4829(2017)8-1784-06

10.16213/j.cnki.scjas.2017.8.015

2015-09-17

國家自然科學(xué)地區(qū)科學(xué)基金項目(31460153);保山市科技計劃項目(2014KJ033);保山市第六批中青年學(xué)術(shù)和技術(shù)帶頭人(bszqnxshjsdtr2017);云南省科技廳青年項目(2014FD057);保山學(xué)院校級項目(BZ15006)

徐 玲(1978-)，女，云南陸良人，博士，副教授，主要從事生物防治研究，E-mail:xuling09083@163.com，*為通訊作者:陳自宏，E-mail:zhchen78@163.com。