陳洪才

(臨沂市第四人民醫(yī)院,山東臨沂2760005)

酒依賴(lài)患者Lp-PLA2、OX-LDL水平及動(dòng)脈粥樣硬化性心血管病的關(guān)系

陳洪才

(臨沂市第四人民醫(yī)院,山東臨沂2760005)

目的探討血清脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2、氧化低密度脂蛋白在酒依賴(lài)患者預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化性心血管疾病中的臨床應(yīng)用價(jià)值。方法酒依賴(lài)患者80例和體檢健康者92例，酒依賴(lài)患者入院次日清晨抽空腹靜脈血,健康者常規(guī)采血。測(cè)定血清脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2、氧化低密度脂蛋白和總膽固醇、甘油三酯、低密度膽固醇、高密度脂蛋白。應(yīng)用SPSS17.0軟件t檢驗(yàn)和Person相關(guān)分析。結(jié)果兩組血脂及Lp-PLA2水平比較，P＜0.0005；ox-LDL水平比較，P＜0.005。實(shí)驗(yàn)組的血清脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2（r=0.411,P＜0.05）、氧化低密度脂蛋白（r=0.325,P＜0.05）水平與TC、TG、LDL-C水平呈正相關(guān)性，與HDL-C水平呈負(fù)相關(guān)；且脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2于氧化低密度脂蛋白之間以呈顯著正相關(guān)。結(jié)論血清脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2和氧化低密度脂蛋白水平測(cè)定對(duì)酒依賴(lài)患者預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化性心血管疾病具有十分重要的意義。

酒依賴(lài)；脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2；氧化低密度脂蛋白;動(dòng)脈粥樣硬化

中度飲酒是動(dòng)脈粥樣硬化（AS）和其臨床后果（冠心病、中風(fēng)和外周血管疾?。┑奈ｋU(xiǎn)因素，長(zhǎng)期酒精濫用增加心血管疾病的發(fā)病，發(fā)病率和死亡率都會(huì)增加[1]。脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2(Lp-PLA2)參與了動(dòng)脈粥樣硬化斑塊破裂及血栓形成的多個(gè)過(guò)程[2]。氧化低密度脂蛋白（OX-LDL）有多種影響動(dòng)脈粥樣硬化進(jìn)程的作用，包括加快血管內(nèi)皮細(xì)胞的死亡從而導(dǎo)致血管舒張缺陷[3]。為此，我們自2016年7月—2016年12月間對(duì)酒依賴(lài)患者的血清LP-PLA2、OXLDL含量進(jìn)行檢測(cè)?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 臨床資料

1.1 一般資料酒依賴(lài)患者80例，均為男性，年齡（21～72）歲；婚姻狀況：已婚69例，未婚4例，離婚5例，喪偶2例；文化程度：大專(zhuān)及以上5例，高中13例，初中44例，小學(xué)14例，文盲4例；飲酒狀況：?jiǎn)未物嬀屏?00～650 ml，平均日飲酒量400 ml以上。入組患者持續(xù)大量飲酒史在6年以上，均符合《中國(guó)精神疾病分類(lèi)與診斷標(biāo)準(zhǔn)（第3版）》（CCMD-3）診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]。另選同期我院健康男性體檢者92例做對(duì)照組，年齡19～68歲。兩組性別、年齡、文化程度等一般資料比較，P＞0.05，無(wú)顯著性差異，具有可比性。

1.2 標(biāo)本采集所有入組者均于入院次日清晨空腹坐位取肘正中靜脈血5 ml，采血前一天晚餐避免高脂飲食，不能飲酒，置于含分離膠的采血管中，標(biāo)本采集后室溫靜置30 min，以3000轉(zhuǎn)/分鐘離心10 min分離血清，當(dāng)日完成檢測(cè)或置于-70℃冰箱密封保存。

1.3 常規(guī)血脂指標(biāo)的測(cè)定采用日立7180全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)TC、TG、HDL-C、LDL-C。試劑購(gòu)自浙江寧波美康生物科技股份有限公司。嚴(yán)格室內(nèi)質(zhì)量控制措施，每次實(shí)驗(yàn)開(kāi)始時(shí)定標(biāo)，同時(shí)檢測(cè)已知濃度的室內(nèi)質(zhì)控品，進(jìn)行校準(zhǔn)。

1.4 OX-LDL的測(cè)定利用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)ox-LDL。遵照SOP文件標(biāo)準(zhǔn)操作步驟進(jìn)行：（1）首先棄掉生長(zhǎng)在96孔板上不同處理組的培養(yǎng)液，用4℃的PBS清洗5次，然后用4%多聚甲醛室溫固定15 min。（2）用25℃的PBS清洗5次，用含1%BSA的PBS室溫封閉1 h。（3）加入1∶100小鼠抗人OX-LDL多克隆抗體置37℃孵育2 h，TPBS清洗細(xì)胞3次，吸水紙上拍干。（4）加入HRP-羊apo B抗體37℃孵育1 h。（5）TMB顯色10分鐘，終止反應(yīng)后置于酶標(biāo)儀上，在450 nm處讀取各孔吸光度A值,測(cè)算出各樣本ox-LDL值。每批實(shí)驗(yàn)以純化的標(biāo)準(zhǔn)OX-LDL作為標(biāo)準(zhǔn)值，每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)設(shè)3個(gè)孔，同時(shí)測(cè)2次。本方法中抗OX-LDL抗體只能特異性識(shí)別OX-LDL，所以該實(shí)驗(yàn)有較高的靈敏性、特異性。

1.5 LP-PLA2的檢測(cè)利用酶聯(lián)免疫法測(cè)定LPPLA2。操作嚴(yán)格按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，首先，在含有預(yù)包被的LP-PLA2抗體酶標(biāo)板上，每孔內(nèi)加入含有LP-PLA2的待測(cè)血清樣品或LP-PLA2校準(zhǔn)品50μl，置37℃水浴30 min，LP-PLA2可與微孔板中吸附的LPPLA2抗體結(jié)合，經(jīng)洗滌液充分洗滌5遍；其次，再加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的LP-PLA2單克隆抗體，其可與微孔板中的LP-PLA2競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合，37℃水浴箱孵育30 min，經(jīng)洗滌液充分洗滌5遍后；最后，再加入酶聯(lián)免疫反應(yīng)TMB底物，與酶結(jié)合物作用15 min，顯色10 min，加入酸性終止液以終止反應(yīng)，測(cè)定吸光度值，計(jì)算各樣本的LP-PLA2值。該實(shí)驗(yàn)最終顯色強(qiáng)度與樣品中LP-PLA2的含量多少成正比，同時(shí)用上海朗頓生物科技有限公司校準(zhǔn)品進(jìn)行室內(nèi)校正。本實(shí)驗(yàn)線性檢測(cè)范圍為(15～1200)ng/L，最低檢測(cè)限≥10 ng/L，批內(nèi)變異系數(shù)(CV)≤10%，批間變異系數(shù)(CV)≤15%。LP-PLA2檢測(cè)結(jié)果不受脂血、溶血、黃疸等因素影響，且樣本需求量較小。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理應(yīng)用SPSS17.0軟件，所獲數(shù)據(jù)采用t檢驗(yàn)和Person相關(guān)分析。

2 結(jié)果

2.1 兩組血清Lp-PLA2、OX-LDL及血脂水平比較見(jiàn)表1。

2.2 酒依賴(lài)患者血脂及Lp-PLA2、OX-LDL指標(biāo)的相關(guān)性分析見(jiàn)表2。

表1 兩組血脂及Lp-PLA2、OX-LDL水平比較（x-±s）

表2 酒依賴(lài)患者Lp-PLA2、OX-LDL及血脂指標(biāo)的相關(guān)性分析

3 討論

近年來(lái)，發(fā)現(xiàn)血清LP-PLA2和OX-LDL濃度的升高與冠狀動(dòng)脈粥樣硬化、中風(fēng)及周?chē)懿∠嚓P(guān)，是一種獨(dú)立的危險(xiǎn)因素，是預(yù)測(cè)急性冠脈綜合征（ASC）、穩(wěn)定性和不穩(wěn)定性心絞痛的重要指標(biāo)。LPPLA2和OX-LDL作為動(dòng)脈粥樣硬化、血栓形成疾病的標(biāo)志物在動(dòng)脈粥樣硬化性血管疾病診治中的應(yīng)用越來(lái)越受到臨床醫(yī)生的廣泛重視。調(diào)查資料表明[5]，我國(guó)酒依賴(lài)的城市平均患病率37.27%，患者中精神障礙發(fā)生率為27.9%、軀體疾病發(fā)勝率為27.3%。酒依賴(lài)又稱(chēng)酒精依賴(lài)綜合征，是一種精神疾病，常伴有精神、神經(jīng)系統(tǒng)癥狀和軀體合并癥。由于長(zhǎng)期大量飲酒，機(jī)體調(diào)節(jié)能力失衡，酒依賴(lài)患者不僅會(huì)產(chǎn)生幻覺(jué)、妄想、人格改變、情感障礙等精神疾病，還會(huì)產(chǎn)生水電解質(zhì)紊亂、酸堿平衡失調(diào)、脂肪肝、高血壓、動(dòng)脈粥樣硬化、心肌梗塞、心腦血管系統(tǒng)疾病、消化系統(tǒng)疾病等各種軀體性疾病。

OX-LDL是一個(gè)全身炎癥性反應(yīng)的標(biāo)志物。OX-LDL在動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用[6]。酒精既能通過(guò)兒茶酚胺的作用誘導(dǎo)動(dòng)員儲(chǔ)存脂肪，使血液中TC、TG濃度升高，又能直接作用于脂肪組織使其釋放大量脂肪酸，使肝臟合成TG加快，體內(nèi)血脂的清除減緩。持續(xù)大量飲酒，又可刺激血清谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、天門(mén)東氨基轉(zhuǎn)移酶、肌酸激酶等多種血清酶類(lèi)活性增高，引起肝臟和心臟功能受損，肝臟脂類(lèi)代謝功能受損，導(dǎo)致HDL-C下降，LDL-C、OX-LDL升高。OX-LDL是動(dòng)脈粥樣硬化啟動(dòng)的關(guān)鍵過(guò)程[7]。一方面，酒依賴(lài)患者體內(nèi)HDL-C的下降，使得HDL-C的逆轉(zhuǎn)運(yùn)作用減弱，HDL-C不能及時(shí)利用肝臟分解功能把血液和組織中多余的膽固醇逆向排除體外，繼而增加了該類(lèi)患者動(dòng)脈粥樣硬化性心血管疾病的發(fā)病機(jī)率；另一方面，酒依賴(lài)患者體內(nèi)LDL-C持續(xù)升高,尤其OXLDL增加是引起動(dòng)脈粥樣硬化等心血管疾病的關(guān)鍵因子,可增加其患冠狀動(dòng)脈心臟病的危險(xiǎn)性。因此，OX-LDL水平檢測(cè)是預(yù)測(cè)動(dòng)脈粥樣硬化性心血管疾病（ASCVD）發(fā)生的重要指標(biāo)，檢測(cè)酒依賴(lài)患者OXLDL水平對(duì)幫助該類(lèi)患者預(yù)防ASCVD的發(fā)生有著非常重要的臨床應(yīng)用價(jià)值。

Lp-PLA2又稱(chēng)血小板活化因子乙酰水解酶,是由T淋巴細(xì)胞、肥大細(xì)胞、泡沫細(xì)胞和成熟的巨噬細(xì)胞等合成和分泌的一種絲氨酸酯酶，其分泌受多種炎癥介質(zhì)的調(diào)節(jié)作用。血清Lp-PLA2作為一個(gè)新型的炎性標(biāo)志物,參與了粥樣硬化斑塊形成的起始、發(fā)展、穩(wěn)定性喪失及最終破裂的各個(gè)階段[8]。臨床研究表明，Lp-PLA2有致動(dòng)脈粥樣硬化的作用,在動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生、發(fā)展中起著關(guān)鍵性的作用,其含量多少與動(dòng)脈粥樣硬化中所形成的斑塊大小、穩(wěn)定性和炎癥反應(yīng)程度成正相關(guān)，抑制其生物學(xué)活性可遲緩動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)展進(jìn)程。血小板的活化、聚集、粘附及動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的破裂會(huì)在血管內(nèi)皮受損部位形成的血栓，引起動(dòng)脈官腔狹窄或堵塞，最終可發(fā)生肺動(dòng)脈栓塞、腦梗塞、冠狀動(dòng)脈栓塞、心肌梗死等血栓性疾病和急性心血管疾病。高Lp-PLA2水平與高心血管事件風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)，而且多數(shù)研究都支持Lp-PLA2對(duì)心血管事件有預(yù)測(cè)作用[9]。

Lp-PLA2及OX-LDL可能直接參與了AS不穩(wěn)定斑塊的形成、發(fā)展及最終破裂的全過(guò)程，并與動(dòng)脈粥樣硬化性心血管疾病的發(fā)生、斑塊的穩(wěn)定型密切相關(guān)[10]。Lp-PLA2與OX-LDL是AS起始和血栓形成的關(guān)鍵步驟所在，Lp-PLA2具有促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化的作用，而OX-LDL是動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生、發(fā)展的起動(dòng)因子。在人體中，Lp-PLA2主要通過(guò)載脂蛋白B與LDL形成脂蛋白顆粒結(jié)合體，伴隨LDL被運(yùn)送到易損傷的動(dòng)脈血管內(nèi)皮細(xì)胞貯留，其中部分LDL被氧化修飾形成OX-LDL。本研究顯示，酒依賴(lài)患者是動(dòng)脈粥樣硬化性心血管疾病的易發(fā)人群，酒依賴(lài)患者血清Lp-PLA2、OX-LDL和TC、TG、LDL-C濃度均顯著升高，HDL-C濃度顯著降低；Lp-PLA2、OX-LDL水平變化與AS性心血管疾病發(fā)生的有高度相關(guān)性，其水平越高，ASCVD發(fā)病機(jī)率就越高。

綜上所述，LP-PLA2和OX-LDL在心血管損傷中扮演了重要角色，其水平的高低與動(dòng)脈粥樣硬化性心血管疾病發(fā)生有密切關(guān)系;酒依賴(lài)患者體內(nèi)LP-PLA2和OX-LDL水平較正常人顯著升高，快速準(zhǔn)確地檢測(cè)LP-PLA2和OX-LDL，對(duì)于酒依賴(lài)患者預(yù)防AS等心血管系統(tǒng)疾病的炎癥損傷具有良好的醫(yī)學(xué)價(jià)值和社會(huì)價(jià)值。對(duì)酒依賴(lài)患者應(yīng)早診斷早治療，引導(dǎo)人們少飲酒或不飲酒，提倡健康飲食，加強(qiáng)體育鍛煉，從而降低酒依賴(lài)患者的發(fā)病率和減少該類(lèi)患者動(dòng)脈粥樣硬化性心血管疾病的發(fā)病率和死亡率，對(duì)提高人們的健康水平和生活質(zhì)量發(fā)揮著重要作用。

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Alcohol Depends on the Relationship between the Patient Lp-PLA2,ox-LDL and Atherosclerotic Cardiovascular Disease

Chen Hongcai
(The Fourth People's Hospital of Linyi City,Linyi 276005,Shandong)

ObjectiveTo study the serum lipoprotein associated phospholipase A2,oxidized low density lipopro?tein in patients with alcohol dependence prevent atherosclerotic cardiovascular disease in the clinical application value. Methods The alcohol relied on 80 patients and 92 cases of health check-up,and the alcohol relied on the patient to be admitted to the patient in the early morning of the day.Serum lipoprotein related phospholipase A2,low density lipopro?tein and total cholesterol,triglyceride,low density cholesterol,high density lipoprotein.Apply SPSS17.0 software t test and Person correlation analysis.ResultsTwo groups of blood lipids and Lp-PLA2levels were compared,P＜0.0005. OX-LDL level comparison,P＜0.005.Group of serum lipoprotein associated phospholipase A2r=0.411,P＜0.411,oxi?dized low density lipoprotein r=0.325,P＜0.05 and TC,TG,LDL-C level was a positive correlation,negative correlation with the level of HDL-C.There is a significant positive correlation between lipoprotein related phospholipase A2,which is based on low density lipoprotein.ConclusionThe serum lipoprotein associated phospholipase A2and oxidized low density lipoprotein level determination of prevention of atherosclerosis in patients with alcohol dependence cardiovascu?lar disease have very important significance.

Alcohol dependence;Lipoprotein related phospholipid enzyme A2;LDL;Atherosclerosis of atheroscle?rosis

R543;R446.1

A

1008-4118（2017）03-0020-04

2017-05-22

10.3969/j.issn.1008-4118.2017.03.006

臨沂市科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目。課題編號(hào)：201616060。