吳 翠，馬玉翠，巢志茂(中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院中藥研究所，北京 100700)

【方藥研究】

龍眼肉理化指標(biāo)與兩類貯藏庫(kù)溫度積的動(dòng)態(tài)分析?

吳 翠，馬玉翠，巢志茂△
(中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院中藥研究所，北京 100700)

目的: 探究簡(jiǎn)易庫(kù)與冷藏庫(kù)中龍眼肉理化指標(biāo)的變化及其與溫度積的相關(guān)性。方法: 日光下觀察龍眼肉的外觀，烘干法測(cè)定水分，高效液相色譜(HPLC)法測(cè)定5-羥甲基糠醛(5-HMF)的含量。采用溫度積分析其對(duì)5-HMF含量的影響。結(jié)果: 簡(jiǎn)易庫(kù)的溫度積呈緩急交替上升趨勢(shì)，冷藏庫(kù)的溫度積直線上升。簡(jiǎn)易庫(kù)中的龍眼肉從3個(gè)月開(kāi)始析出糖分并質(zhì)地變硬，冷藏庫(kù)中的龍眼肉出現(xiàn)輕度的黏軟現(xiàn)象，兩庫(kù)中龍眼肉的水分含量呈下降趨勢(shì)。龍眼肉在0月時(shí)5-HMF的含量為0.001031 mg·g-1，在之后的27個(gè)月內(nèi)，5-HMF含量均逐漸升高，且簡(jiǎn)易庫(kù)中的含量值是冷藏庫(kù)對(duì)應(yīng)值的2.7～4.6倍。結(jié)論: 龍眼肉中5-HMF含量的升高與貯藏庫(kù)的溫度積變化趨勢(shì)具有一致性，首次提出溫度積的概念，用于分析中藥在貯藏環(huán)節(jié)中化學(xué)成分的變化規(guī)律。

龍眼；5-羥甲基糠醛；龍眼肉；貯藏；溫度積

龍眼肉為無(wú)患子科植物龍眼DimocarpuslonganLour.的假種皮，具有補(bǔ)益心脾、養(yǎng)血安神的功效，用于氣血不足、心悸怔忡、健忘失眠、血虛萎黃等癥[1]?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，龍眼肉具有抗腫瘤[2]、抗焦慮[3]、免疫調(diào)節(jié)[4]、抗自由基[5]等藥理活性。龍眼肉的主要化學(xué)成分有糖類[6]、黃酮類[7]、揮發(fā)性成分[8]、脂類[9]等。龍眼肉具有藥食同源的性質(zhì)，使用廣泛，但目前藥典只從性狀、鑒別等方面作了規(guī)定，缺少內(nèi)在質(zhì)量控制指標(biāo)。研究表明，新鮮龍眼肉中腐胺的含量在室溫貯藏中下降，但在低溫貯藏時(shí)先迅速下降后趨于穩(wěn)定；精胺及亞精胺的含量，室溫和低溫貯藏變化均不明顯[10]。目前對(duì)作為中藥使用干燥的龍眼肉研究報(bào)道較少。

本文將藥用龍眼肉置于簡(jiǎn)易庫(kù)與冷藏庫(kù)中，觀察外觀、測(cè)定水分和5-羥甲基糠醛(5-HMF)含量，提出倉(cāng)庫(kù)溫度積的概念，并分析溫度積與5-HMF的動(dòng)態(tài)變化規(guī)律，為中藥龍眼肉的質(zhì)量評(píng)價(jià)提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試劑和儀器

Shimadzu LC-20AT型高效液相色譜儀(DGU-20A5型自動(dòng)脫氣機(jī)，LC-20AT型泵，SPD-M20A型二極管陣列檢測(cè)器，SIL-20A型自動(dòng)進(jìn)樣器，CTO-10ASvp柱溫箱，LC-solution色譜工作站)(日本島津公司)，XS105 Dual Range型電子分析天平(感量0.00 001 g，Mettler Toledo儀器系統(tǒng)有限公司)，OHAUS CP224C型電子天平(感量0.0 001 g，奧豪斯(上海)儀器有限公司)，單道可調(diào)量程移液器(艾本德(上海)國(guó)際貿(mào)易有限公司)，KQ-100E超聲波清洗器(100 W，40 kHz，昆山市超聲儀器有限公司)，JWS-A5溫濕度表(北京市亞光儀器有限責(zé)任公司)，高翔DL60冷風(fēng)機(jī)(浙江高翔工貿(mào)有限公司)，比澤爾5P系統(tǒng)壓縮機(jī)(比澤爾制冷技術(shù)(中國(guó))有限公司)。5-HMF對(duì)照品(批號(hào)BCBF6127V，純度≥99%)購(gòu)自美國(guó)Sigma-Aldrich公司，甲醇(色譜純)購(gòu)自賽默飛世爾科技(中國(guó))有限公司，水為娃哈哈純凈水，其他試劑均為分析純。

1.2 藥材

龍眼肉2013年秋天產(chǎn)于廣西，經(jīng)中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院中藥研究所巢志茂研究員鑒定為無(wú)患子科植物龍眼DimocarpuslonganLour.的干燥假種皮，樣本放置于該所的1016實(shí)驗(yàn)室。

1.3 貯藏庫(kù)

簡(jiǎn)易庫(kù)為中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院中藥研究所1016室隔出來(lái)的一部分，未做溫度和濕度的調(diào)節(jié)。冷藏庫(kù)為具有冷風(fēng)機(jī)控制系統(tǒng)的恒溫倉(cāng)庫(kù)。

2014年7月11日將龍眼肉藥材置于白色塑料袋中，分別貯藏于簡(jiǎn)易庫(kù)和冷藏庫(kù)中，作為0月的樣品。2014年10月31日、2015年4月30日、2015年10月31日、2016年4月30日、2016年10月31日從庫(kù)中取出樣品，作為第3、9、15、21、27個(gè)月的樣品。

1.4 溫濕度

圖1顯示，冷藏庫(kù)，保持3.5～5.0 ℃的恒溫，65%～75%相對(duì)濕度的恒濕環(huán)境。簡(jiǎn)易庫(kù)每日記錄溫度和濕度，入庫(kù)之日起的日歷月作為0月，之后的每個(gè)日歷月作為1個(gè)月，實(shí)際貯藏28個(gè)月。

圖1 簡(jiǎn)易庫(kù)與冷藏庫(kù)溫濕度記錄圖

圖2 簡(jiǎn)易庫(kù)與冷藏庫(kù)溫度積及龍眼肉中5-HMF含量

1.5 溫度積

其中，Ti為簡(jiǎn)易庫(kù)當(dāng)日上午10點(diǎn)時(shí)的溫度，Dm為每個(gè)月記錄的天數(shù)，Ta為冷藏庫(kù)的平均溫度即4.25 ℃，D為每個(gè)月的天數(shù)。圖2顯示，兩庫(kù)中0～27個(gè)月逐月的溫度積。

1.6 外觀觀察

表1顯示，從庫(kù)中取出樣品置于白色搪瓷盤中，于日光下觀察外觀。

1.7 水分測(cè)定

表1顯示，從庫(kù)中取出樣品粉碎過(guò)3號(hào)篩，按《中國(guó)藥典》規(guī)定的烘干法[11]測(cè)定水分。

1.8 5-HMF含量測(cè)定

1.8.1 色譜條件 圖3顯示，ODS色譜柱(4.6 mm×150 mm，5 μm)，流動(dòng)相為甲醇-水(5∶95，v/v)，流速1.0 mL·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)284 nm，柱溫35 ℃，進(jìn)樣量10 μL。

表1 簡(jiǎn)易庫(kù)與冷藏庫(kù)中龍眼肉的水分和5-HMF的含量

注：1、2.龍眼肉藥材批次

圖3 5-HMF對(duì)照品與供試品HPLC圖注：A.對(duì)照品；B.供試品；1.5-HMF

1.8.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取5-HMF對(duì)照品3.97 mg置于10 mL棕色量瓶中，以80%甲醇溶解、定容，制成0.397 mg·mL-1的5-HMF對(duì)照品溶液。

1.8.3 供試品溶液的制備 取“1.7”項(xiàng)下的樣品1.0 g精密稱定，置于25 mL具塞錐形瓶中，精密加入80%甲醇溶液25 mL，稱定質(zhì)量，超聲處理25 min放至室溫，再次稱定質(zhì)量，用80%甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，過(guò)濾取續(xù)濾液，過(guò)0.22 μm濾膜，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

1.8.4 方法學(xué)考察 ①線性關(guān)系考察:將對(duì)照品溶液用80%甲醇稀釋配成濃度為0.06352、0.0397、0.01985、0.00397、0.00006625、0.00 002 914 mg·mL-1的系列溶液，分別進(jìn)樣10 μL，按“1.8.1”的色譜條件測(cè)定峰面積。以進(jìn)樣量(mg)為橫坐標(biāo)，峰面積(mAU)為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。線性方程為：y=6797937x+4341 (r2=0.9998),表明進(jìn)樣量在0.0002914-0.6 352 mg范圍內(nèi)，與峰面積線性關(guān)系良好；②精密度試驗(yàn):精密吸取對(duì)照品溶液，稀釋成0.00 397 mg·mL-1后，按“1.8.1”項(xiàng)下色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣6次，每次10 μL，測(cè)定5-HMF的峰面積，計(jì)算得RSD為0.21%(n=6)，表明儀器精密度良好。③重復(fù)性試驗(yàn):精密稱取同一供試品6份(簡(jiǎn)易庫(kù)27個(gè)月樣品1)，按“1.8.3”項(xiàng)下制備供試品溶液，按“1.8.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，5-HMF平均含量為0.009 017 mg·mL-1，計(jì)算得RSD為2.29%(n=6)，表明本方法重復(fù)性良好；④穩(wěn)定性試驗(yàn):精密吸取同一供試品溶液(簡(jiǎn)易庫(kù)27個(gè)月樣品1)，室溫放置，分別在0、2、4、8、12、24 h進(jìn)樣分析，測(cè)定5-HMF峰面積，計(jì)算RSD為1.85%(n=6)，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好；⑤加樣回收率試驗(yàn):表2顯示，稱取同一供試品6份(簡(jiǎn)易庫(kù)27個(gè)月樣品1)，每份約0.5 g精密稱定，分別精密加入稀釋的5-HMF對(duì)照品溶液(0.0 397 mg·mL-1)163 mL，按“1.8.3”項(xiàng)下制備供試品溶液，按“1.8.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定5-HMF含量，計(jì)算平均回收率為98.53%，RSD為2.20%(n=6)；⑥檢測(cè)限與定量限:在“1.8.1”色譜條件下將對(duì)照品溶液逐漸稀釋，最終確定檢測(cè)限(S/N=3)為1.457×10-4mg，定量限(S/N=10)為3.312×10-4mg。

表2 龍眼肉中5-HMF的加樣回收率

1.8.5 樣品含量測(cè)定 表1顯示，各樣品按“1.8.3”項(xiàng)下制備供試品溶液，在“1.8.1”色譜條件下測(cè)定，用外標(biāo)一點(diǎn)法計(jì)算干品中5-HMF含量。

2 結(jié)果

2.1 貯藏庫(kù)溫濕度比較

圖1結(jié)果顯示，從2014年7月11日開(kāi)始到2016年10月31日的28個(gè)月中，冷藏庫(kù)保持了恒溫恒濕狀態(tài)，溫度較低為3.5～5.0 ℃，濕度較高維持在65～75%RH。簡(jiǎn)易庫(kù)經(jīng)過(guò)3個(gè)夏天2個(gè)冬天的過(guò)程，夏天的溫度和濕度均比冬天要高，溫度的最高值為42 ℃、最低值為15 ℃，濕度的最高值為74%RH、最低值為30%RH。

2.2 外觀比較

表1顯示，簡(jiǎn)易庫(kù)中龍眼肉從第3個(gè)月開(kāi)始，質(zhì)地變硬，表面有糖分析出。冷藏庫(kù)中龍眼肉質(zhì)地柔潤(rùn)，表面無(wú)糖分析出，但有輕度的黏軟現(xiàn)象。龍眼肉色澤較深為棕褐色，在貯藏過(guò)程中未見(jiàn)明顯變化。

2.3 水分含量

簡(jiǎn)易庫(kù)與冷藏庫(kù)各兩批龍眼肉中的水分含量比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，在0月時(shí)的水分高于藥典規(guī)定的15%。貯藏27個(gè)月后，簡(jiǎn)易庫(kù)中水分下降了4.66%、4.86%，冷藏庫(kù)中下降3.98%、3.82%。

2.4 5-HMF含量

龍眼肉的5-HMF含量在0月時(shí)為0.001 031 mg·g-1，貯藏后均得到升高。第3個(gè)月時(shí)簡(jiǎn)易庫(kù)與冷藏庫(kù)分別升高到0.005191、0.005173和0.001134、0.001 430 mg·g-1。貯藏到第27個(gè)月時(shí)，簡(jiǎn)易庫(kù)樣品是0月時(shí)含量的10.0、10.1倍，冷藏庫(kù)則為3.8、3.2倍。簡(jiǎn)易庫(kù)5-HMF的含量是冷藏庫(kù)對(duì)應(yīng)時(shí)間的2.7～4.6倍，同一庫(kù)中2批樣品之間5-HMF的含量基本一致。

2.5 溫度積對(duì)5-HMF含量變化的影響

圖2顯示，簡(jiǎn)易庫(kù)與冷藏庫(kù)溫度積均隨著貯藏時(shí)間的延長(zhǎng)而升高。簡(jiǎn)易庫(kù)的溫度積受季節(jié)的影響，其升高呈急緩相間的變化。冷藏庫(kù)的溫度常年維持穩(wěn)定，其溫度積的升高呈直線累積。兩庫(kù)的龍眼肉中5-HMF的變化趨勢(shì)與兩庫(kù)的溫度積具對(duì)應(yīng)的一致性。

3 討論

牛膝、大棗、五味子、栝樓等中藥，隨著色澤的加深，5-HMF含量逐漸升高[12-15]。山萸肉隨著貯藏時(shí)間的延長(zhǎng)相應(yīng)地產(chǎn)生色澤加深和5-HMF含量升高[16]。而龍眼肉隨著貯藏時(shí)間的延長(zhǎng)，產(chǎn)生了5-HMF含量升高的現(xiàn)象，但未見(jiàn)色澤的加深，這種現(xiàn)象系首次報(bào)道。由于5-HMF的產(chǎn)生與美拉德反應(yīng)[17]的產(chǎn)生有關(guān)，該反應(yīng)又受到溫度的影響，這與本文中簡(jiǎn)易庫(kù)產(chǎn)生更多的5-HMF現(xiàn)象一致。

通過(guò)HPLC的分析，首次說(shuō)明龍眼肉中含有5-HMF，對(duì)其進(jìn)行含量測(cè)定，將有助于龍眼肉質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的提高，對(duì)質(zhì)量控制具有參考意義的熱分析動(dòng)力學(xué)中，采用了溫度積的概念[18]。溫度積也曾被用來(lái)評(píng)價(jià)不同季節(jié)鋪筑不同砂礫的抗裂性能[19]、不同季節(jié)鋪筑半剛性材料的力學(xué)性能[20]，對(duì)于與時(shí)間跨度有關(guān)的動(dòng)態(tài)變化具有較好的評(píng)價(jià)意義。本文將溫度積的概念首次應(yīng)用于分析溫度對(duì)中藥在貯藏過(guò)程中化學(xué)成分變化的影響。

從外觀變化和5-HMF含量的升高考慮，我們建議龍眼肉的貯藏以低溫為好。

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Dynamic Analysis between Physic-chemical Indexes of Longan Arillus and Temperature-integral of Two Kinds of Warehouse

WU Cui, MA Yu-cui, CHAO Zhi-mao△
(InstituteofChineseMateriaMedica,ChinaAcademyofChineseMedicalSciences,Beijing100700,China)

Objective: To study the dynamic change between temperature-integral and physic-chemical indexes of Longan Arillus (dried arillus ofDimocarpuslonganLour.) stored in simple and cool warehouses. Methods: The properties of Longan Arillus were observed under sunlight. The water content was determined based on the drying method. The content of 5-hydroxymethylfurfural (5-HMF) was determined by HPLC method. The temperature-integral was used to analyze its effect on 5-HMF content. Results: The temperature-integral showed a fast and slow alternating increasing trend of simple warehouse and linear upward trend of cool warehouse. The white sugar powder and hard texture of Longan Arillus were appeared since the third month in simple warehouse. The slight soft and moist of Longan Arillus were appeared in cool warehouse. The water content of Longan Arillus was decreased in both warehouses. The 5-HMF content at the 0 month was 0.001031 mg·g-1and was gradually increasing in the succedent month with a range of 2.7～4.6 times in simple warehouse than in cool warehouse. Conclusion: The increase trend of 5-HMF content of Longan Arillus was consistent with the change trend of temperature-integral. The concept of temperature-integral was put forward and used to analyze the change of chemical composition in Chinese medicine during the storage link for the first time.

Dimocarpuslongan; 5-hydroxymethylfurfural; Longan Arillus; storage; temperature integral

中醫(yī)藥行業(yè)科研專項(xiàng)(201407005)-中藥材貯藏庫(kù)及配套技術(shù)

吳 翠(1993-),女,江蘇徐州人,醫(yī)學(xué)碩士,從事中藥材貯藏與包裝研究。

△通訊作者：巢志茂(1963-),男,江蘇常州人,研究員,醫(yī)學(xué)碩士,從事中藥材貯藏與包裝研究,Tel：13522705161，E-mail: chaozhimao@163.com。

R284.1

A

1006-3250(2017)08-1158-04

2017-03-28