王伊琴 包勇敢 荊文魁 楊 帆 陳少博云澤龍 秦貞奎 楊利峰 趙德明

(1.內(nèi)蒙古二連浩特出入境檢驗(yàn)檢疫局，二連浩特，011100；2.中國(guó)檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院，北京，100123；3.中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院國(guó)家動(dòng)物海綿狀腦病實(shí)驗(yàn)室，北京，100094)

蒙原羚朊蛋白基因的序列分析和多態(tài)性研究

王伊琴1包勇敢1荊文魁1楊 帆1陳少博1云澤龍1秦貞奎2楊利峰3趙德明3

(1.內(nèi)蒙古二連浩特出入境檢驗(yàn)檢疫局，二連浩特，011100；2.中國(guó)檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院，北京，100123；3.中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院國(guó)家動(dòng)物海綿狀腦病實(shí)驗(yàn)室，北京，100094)

稿件運(yùn)行過(guò)程

蒙原羚； 朊蛋白基因； 序列分析； 基因多態(tài)性； 朊病毒病； 種間屏障

朊蛋白病(prion protien disease)又稱為傳染性海綿狀腦病(transmissible spongiform encephalopathies，TSE)，是由致病性朊蛋白引起的一種致死性神經(jīng)退行性疾病?？筛腥径喾N屬動(dòng)物，其中瘋牛病、羊癢病和人的克雅氏病是最常見(jiàn)的海綿狀腦病[1]。朊蛋白通過(guò)GPI錨定于細(xì)胞膜表面的糖蛋白，單拷貝PrP基因編碼，整個(gè)開(kāi)放閱讀框位于單一外顯子內(nèi)。Prusiner“唯蛋白”理論表明，海綿狀腦病的致病因子是一種編碼宿主蛋白的PrPC轉(zhuǎn)變?yōu)楫惓５木哂兄虏⌒缘腜rPSc，二者都具有相同的氨基酸序列，只是空間結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，由正常的以α螺旋為主的結(jié)構(gòu)(PrPC)轉(zhuǎn)變?yōu)橐驭抡郫B為主的結(jié)構(gòu)(PrPSc)，在腦部沉積而產(chǎn)生致病性[2-3]。該病可感染多種屬動(dòng)物，其中以反芻動(dòng)物最為易感，還可以感染人，主要引起人的庫(kù)魯病(Kuru)，克-雅氏病(creutzfeldt-Jakob disease，CJD)及致死性家族失眠癥(fatal familial insomnia，F(xiàn)FI)等。近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的一種人新型克-雅氏病(variant Creutzfeldt-Jakob disease，vCJD)與原來(lái)的CJD 疾病在潛伏期、發(fā)病人群、病理變化等方面有明顯差異，目前科學(xué)家們根據(jù)流行病學(xué)調(diào)查推測(cè)該病的發(fā)生可能源于動(dòng)物的TSE疾病，食用了患有牛海綿狀腦病(Bovine spongiform encephalopathies，BSE)病牛的牛肉，是該病發(fā)生的主要原因[2]。

雖然朊蛋白的致病機(jī)理尚不清楚，但朊蛋白病的潛伏期、遺傳易感性及種間屏障等都與朊蛋白基因氨基酸的多態(tài)性相關(guān)[4-7 ]。朊病常常是自發(fā)的異常性感染或散發(fā)性發(fā)生?，F(xiàn)已證實(shí)，除了羊的癢病、牛的瘋牛病和人的克雅氏病易感外，大型貓科動(dòng)物和外來(lái)的有蹄動(dòng)物也易感。對(duì)人類健康的危害和疾病控制也是近年來(lái)研究的重要課題。PrP的開(kāi)放閱讀框內(nèi)的多態(tài)性與TSE的易感性和致病性有關(guān)，如人的克雅氏病、羊癢病[8-9]。

蒙原羚(Procapragutturosa)分布于蒙古、俄羅斯和中國(guó)。其性喜群棲，一般隨著牧草的生長(zhǎng)情況而游動(dòng)。由于蒙古高原的牛、羊大多是散養(yǎng)方式，這樣牛、羊、蒙原羚之間接觸機(jī)會(huì)增多。此外，由于蒙原羚肉可食用，蒙原羚角可入藥，感染TSE的蒙原羚產(chǎn)品極易流入食物鏈，有感染人和動(dòng)物的潛在風(fēng)險(xiǎn)。因此，關(guān)于蒙原羚的TSE的研究變得異常重要。

目前，關(guān)于蒙原羚的朊蛋白基因序列的分析和多態(tài)性的研究均尚未見(jiàn)報(bào)道，本研究通過(guò)對(duì)26只蒙原羚朊蛋白基因進(jìn)行克隆與序列測(cè)定，由795/771 bp 堿基編碼了264/256個(gè)氨基酸的前體蛋白，包括N端的24個(gè)氨基酸信號(hào)肽和C端的22個(gè)氨基酸的GPI信號(hào)肽[3，10-11]，并對(duì)其進(jìn)行基因多態(tài)性分析和TSE易感性預(yù)測(cè)，為TSE的發(fā)病機(jī)理的相關(guān)研究奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1試劑

基因組DNA提取試劑盒購(gòu)于BioDev-Tech公司，DNA凝膠回收試劑盒及pGEM-T Easy 載體購(gòu)于Promega公司；Taqplus DNA聚合酶、限制性內(nèi)切酶EcoR I及DNA Marker為TaKaRa公司產(chǎn)品；大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞購(gòu)于TransGene Biotech公司，其他試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.1.2樣品

本試驗(yàn)是在無(wú)菌條件下采取了26份健康蒙原羚的EDTA抗凝血血樣。試驗(yàn)研究的蒙原羚均健康，約2～3歲，來(lái)自內(nèi)蒙古自治區(qū)呼和浩特市大青山野生動(dòng)物園。

1.2方法

1.2.1引物

根據(jù)GenBank中已發(fā)表序列(EU 224471)，應(yīng)用Primer premier 5.0設(shè)計(jì)特異性引物，由上海生工合成。

上游引物：5′-ATGGTGAAAAGCCACATAGGCAGTTG-3′；

下游引物：5′5′-CTATCCTACTATGAGAAAAATGAGGAAAG-3′。

1.2.2 Prnp的擴(kuò)增

該引物擴(kuò)增了綿羊朊蛋白開(kāi)放閱讀框ORF由795/771 bp核苷酸，共編碼了264/256個(gè)氨基酸?；蚪M總DNA的提取按試劑盒方法進(jìn)行。PCR 反應(yīng)在25 μL體系中進(jìn)行，其中含有：基因組DNA 200 ng；引物 0.5 μM；dNTP 200 μM；Taqplus DNA Polymerase(5 U/μL)0.5 μL；0.1 M 10×Ammonium Buffer；去離子水17 μL，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，循環(huán)條件如下：94℃預(yù)變性5 min、94℃變性30 s、61℃退火40 s、72℃延伸40 s、共循環(huán)36 次、最后于72℃延伸8 min。

1.2.3 PCR產(chǎn)物的克隆

擴(kuò)增產(chǎn)物純化按試劑盒純化，純化后PCR擴(kuò)增產(chǎn)物與pGEM-T easy vector進(jìn)行連接，4℃水浴過(guò)夜。將上述連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α，涂布于含有氨芐青霉素，X-gal和IPTG的LB瓊脂平板，于37℃溫箱中倒置培養(yǎng)20 h，隨機(jī)挑取白色菌落進(jìn)行篩選。挑取單個(gè)菌落接種于含氨芐青霉素的LB 培養(yǎng)液中，37℃振蕩培養(yǎng)過(guò)夜。利用質(zhì)粒提取試劑盒制備質(zhì)粒，然后對(duì)其進(jìn)行酶切和PCR鑒定。

1.2.4序列測(cè)定及分析

純化后PCR擴(kuò)增產(chǎn)物直接測(cè)序或克隆至pGEM-T easy vector后，每個(gè)樣品挑取3～4個(gè)克隆進(jìn)行測(cè)序。并利用DNAMAN軟件(Version 5.2.2)進(jìn)行序列比較和同源性分析。

2 結(jié)果

2.1 PCR擴(kuò)增、克隆和酶切鑒定

PCR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳分析，條帶大小與擴(kuò)增片段基本一致約為795/771 bp(圖1)，初步證實(shí)為蒙原羚Prnp基因。PCR產(chǎn)物純化后克隆到載體中，轉(zhuǎn)化后挑取陽(yáng)性菌落，經(jīng)EcoRⅠ酶切可獲得3 000和795或771 bp左右2個(gè)條帶(Pgem-T Easy載體兩端分別存在1個(gè)EcoRⅠ酶切位點(diǎn))，這與載體和插入目的的片段大小正好相符(圖2)；同時(shí)應(yīng)用上、下游引物在重組質(zhì)粒中PCR擴(kuò)增出大小約為795或771 bp的條帶，結(jié)果表明擴(kuò)增片段已經(jīng)插入載體中(圖略)。

圖1 Prnp的PCR產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果Fig.1 Agarose gel electrophorsis result of Prnp PCR products 注：M：DL 2 000 DNA 相對(duì)分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，2～7：不同樣品PCR產(chǎn)物 Note：M：DL 2 000 plus DNA marker，2-7：PCR products from different samples

圖2 陽(yáng)性克隆質(zhì)粒的酶切鑒定Fig.2 Analysis of plasmids digested by EcoR I 注：1、2、4、5：不同樣品重組質(zhì)粒EcoR I酶切鑒定結(jié)果，M：DL 2 000相對(duì)分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) Note：1，2，4，5：products from different recombinant plasmids digested by EcoR I，M：DL 2 000 plus DNA marker

2.2蒙原羚Prnp基因的序列分析及其多態(tài)性

蒙原羚Prnp的ORF 795/771 bp核苷酸編碼了264/256氨基酸，蒙原羚朊蛋白序列分析并提交于GenBank(AB473602-AB473615)。應(yīng)用DNAMAN、DNASTAR進(jìn)行序列分析比較，26只蒙原羚的朊蛋白基因高度同源。蒙原羚prion protein的開(kāi)放閱讀框內(nèi)有6個(gè)氨基酸的多態(tài)性位點(diǎn)，氨基酸置換情況分別為119(N→S)，143(S→G)，160(Y→H)，172(V→A)，182(N→S)和221(V→A)(表1)。

蒙原羚與其他11種動(dòng)物朊蛋白氨基酸的比較(圖3)。蒙原羚朊蛋白同源性比較結(jié)果分別是湯氏瞪羚(Eudorcasthomsonii，EU032301，100%)、印度羚(Antilopecervicapra，AY720706，100%)、牛(Bostaurus，EU224471，98.5%)、大羚羊(Tragelaphusoryx，EF165082，98.1%)、歐洲狍(Capreoluscapreolus，AY639096，96.3%)、斑紋角馬(Connochaetes，EF165086，96.3%)、綿羊(Ovisaries，M31313，95.9%)、山羊(Caprahircus，EU032305，95.9%)、黇鹿(Cervusdama，AY639094，95.6%)、人(Homosapiens，NM183079，86.9%)、小家鼠(Musmusculus，NM011170，84.3%)。蒙原羚朊蛋白基因有缺失的基因型與斑紋角馬、歐洲狍、綿羊、山羊高度同源，分別為99.3%、99.3%、98.9%、98.9%(圖3，圖4)和13種動(dòng)物朊蛋白同源性比較的進(jìn)化樹(shù)見(jiàn)圖5。

表1蒙原羚朊蛋白基因多態(tài)性位點(diǎn)

Tab.1 Frequencies of Mongolian gazelle Prnp polymorphism

圖3 13種哺乳動(dòng)物朊蛋白氨基酸的比較Fig.3 Amino acid alignment of thirteen mammalian prion proteins 注：人(Human，Homo sapiens，NM183079)，小家鼠(Mouse，Mus musculus，NM011170)，牛(Cattle，Bos taurus，EU224471)，大羚羊(Eland，Tragelaphus oryx，EF165082)，黇鹿(Fallow deer，Cervus dama，AY639094)，綿羊(Sheep，Ovis aries，M31313)，山羊(Goat，Capra hircus，EU032305)，歐洲狍(Western roe deer，Capreolus capreolus，AY639096)，湯氏瞪羚(Thomson’s gazelle，Eudorcas thomsonii，EU032301)，印度羚(Blackbuck，Antilope cervicapra，AY720706)，和斑紋角馬(Wildebeest，Connochaetes taurinus，EF165086)與蒙原羚(Mongolian gazelles，Procapra gutturosa，AB473611 和 AB473604)的氨基酸的比較。用破折號(hào)表示序列的缺失、用點(diǎn)表示氨基酸序列的一致性Note：The deduced amino acid sequence of Human(Homo sapiens，NM183079)，Mouse(Mus musculus，NM011170)，Cattle(Bos taurus，EU224471)，Eland(Tragelaphus oryx，EF165082)，F(xiàn)allow deer(Cervus dama，AY639094)，Sheep(Ovis aries，M31313)，Goat(Capra hircus，EU032305)，Western roe deer(Capreolus capreolus，AY639096)，Thomson’s gazelle(Eudorcas thomsonii，EU032301)，Blackbuck(Antilope cervicapra，AY720706)，and Wildebeest(Connochaetes taurinus，EF165086)were compared with Mongolian gazelles(Procapra gutturosa，AB473611 and AB473604).Deletions are indicated by dashes and sites identical to the consensus sequence are denoted by dots

圖4 13種哺乳動(dòng)物朊蛋白的同源性的比較Fig.4 Sequence homology of thirteen mammalian prion proteins 注：1.人(NM183079)，2.小家鼠(NM011170)，3.牛(EU224471)，4.大羚羊(EF165082)，5.黇鹿(AY639094)，6.綿羊(M31313)，7.山羊(EU032305)，8.歐洲狍(AY639096)，9.湯氏瞪羚(EU 032301)，10.印度羚(AY720706)，11.斑紋角馬(EF165086)，12.蒙原羚(AB473611和AB473604) Note：1.Human(NM183079)，2.Mouse(NM011170)，3.Cattle(EU224471)，4.Eland(EF165082)，5.Fallow deer(AY639094)，6.Sheep(M31313)，7.Goat(EU032305)，8.Western roe deer(AY639096)，9.Thomson’s gazelle(EU032301)，10.Blackbuck(AY720706)，11.Wildebeest(EF165086)，12.Mongolian gazelle(AB473611)，13.Mongolian gazelle(AB473604)

圖5 13種哺乳動(dòng)物朊蛋白同源性比較的進(jìn)化樹(shù)Fig.5 Phylogenetic tree of thirteen mammalian prion proteins 注：Human(NM183079)，Mouse(NM011170)，Cattle(EU224471)，Eland(EF165082)，F(xiàn)allow deer(AY639094)，Sheep(M31313)，Goat(EU032305)，Western roe deer(AY639096)，Thomson’s gazelle(EU 032301)，Blackbuck(AY720706)，Wildebeest(EF165086)，Mongolian gazelle1(AB473611)，Mongolian gazelle 2(AB473604)

朊蛋白基因的N端有幾個(gè)數(shù)目不等的八肽重復(fù)區(qū)，大多數(shù)哺乳動(dòng)物中有5個(gè)八肽重復(fù)區(qū)，而牛是有6個(gè)。在本研究中，26只蒙原羚中大多數(shù)(84.6%)在朊蛋白基因的N端有6∶6重合子基因型，少數(shù)(15.4%)是6∶5雜合子基因型，未見(jiàn)有5∶5的基因型。具體缺失的位置在R5(87-94)，缺失1個(gè)八肽重復(fù)區(qū)(表2)。

表2 蒙原羚的八肽重復(fù)區(qū)

Tab.2 Octapeptide repeats in gPrnp

注：重復(fù)區(qū)缺失發(fā)生在R5 87-94位的氨基酸

Note：The octapeptide repeats between R4 and R6 was deleted

3 討論

朊蛋白供體與受體之間的PrP同源性與物種屏障有關(guān)。二者的同源性越高，就越易突破種間屏障而易感[12-14]。已經(jīng)證實(shí)了轉(zhuǎn)基因鼠中的187、189、206、208的氨基酸所形成的表位參與了突破種間屏障而感染BSE[15-16]。蒙原羚的朊蛋白基因與綿羊、鹿、牛的基因序列高度同源，分別為95.9%、95.6%和98.5%。蒙原羚在6個(gè)位點(diǎn)發(fā)生氨基酸的置換分別為119(N→S)，143(S→G)，160(Y→H)，172(V→A)，182(N→S)和221(V→A)。這些多態(tài)性位點(diǎn)位于PrP的C端球形結(jié)構(gòu)域，影響著人和動(dòng)物的種間屏障。

各種數(shù)據(jù)顯示Prnp的多態(tài)性與朊病的易感性、潛伏期和種間屏障有密切關(guān)系[5，17-19]。羊的136、154、171三個(gè)位點(diǎn)的氨基酸與羊癢病有關(guān)。136(A→V)、154(R→H)、171(Q→R/H/K)3個(gè)位點(diǎn)的等位基因編碼的氨基酸對(duì)羊癢病易感性影響最大。在136、154、171的3個(gè)位點(diǎn)編碼的氨基酸分別是Val/Arg/Gln(VRQ)，對(duì)羊癢病非常易感，其多態(tài)性與羊癢病的潛伏期、易感性有關(guān)。在136、154、171氨基酸分別是Ala/Arg/Arg(ARR)時(shí)，與羊癢病的抗性有關(guān)。而在136、154、171氨基酸分別是Ala/Arg/Gln或His(ARQ或ARH)時(shí)，對(duì)該病有中度易感性(medium-high susceptibility)[20-23]。落基山馬鹿(Cervuselaphusnelsoni)和麋鹿(Elaphurusdavidianus)發(fā)生的慢性消耗性疾病(CWD)，與朊蛋白基因的多態(tài)性相關(guān)。在132位點(diǎn)是甲硫氨酸時(shí)，麋鹿或鹿發(fā)生CWD的易感性增加[24]。CJD、GSS、FFI的發(fā)生與人的朊蛋白基因的ORF的氨基酸的變化有關(guān)。人的朊蛋白基因在129位點(diǎn)的氨基酸是甲硫氨酸的純合子型時(shí)，人對(duì)VCJD有易感性[6，25]。研究證實(shí)，15例波蘭CJD患者，在129位點(diǎn)有73.3%是甲硫氨酸的純合子型，13.3%Val純合子型、13.3%Met /Val雜合子型，而119例正常波蘭人，在129位點(diǎn)是45%甲硫氨酸的純合子型[6，25]。研究證明，羊癢病感染神經(jīng)細(xì)胞瘤轉(zhuǎn)染人或鼠的PrP嵌合體基因，在位點(diǎn)167、171、214、和218氨基酸替換時(shí)，可以抗PrPSc的形成[26]。因此，人和動(dòng)物PRP的C-端球形結(jié)構(gòu)域與朊病的易感性相關(guān)，但是蒙原羚朊蛋白基因在C-端球形結(jié)構(gòu)域的多態(tài)性是否有朊病的易感性或抗性還需進(jìn)一步探討。

在本研究中，大部分(85.4%)蒙原羚的八肽重復(fù)區(qū)是6∶6基因型，而少部分(14.6%)是6∶5基因型(表2)。蒙原羚的八態(tài)重復(fù)區(qū)是介于牛和羊之間，牛大多數(shù)是6個(gè)重復(fù)區(qū)，羊大多數(shù)是有5個(gè)重復(fù)區(qū)(圖3)。某些遺傳性朊病毒病，例如遺傳性朊病如家族性Creutzfeldt-Jakob病(fCJD)、GSS綜合征均與Prnp八肽重復(fù)區(qū)插入突變相關(guān)，插入突變超過(guò)8個(gè)以上增加了CJD易感性[27]，在朊病病例中，朊蛋白基因八肽重復(fù)數(shù)目越多發(fā)病越早，病程越短[28-29]。對(duì)于動(dòng)物來(lái)說(shuō)，八肽插入突變數(shù)目的多少與動(dòng)物朊病的易感性尚無(wú)定論[27]。目前，蒙原羚尚未有朊病的報(bào)道。

總之，該研究結(jié)果顯示，蒙原羚朊蛋白基因種間高度同源，蒙原羚在6個(gè)位點(diǎn)發(fā)生氨基酸的置換分別為119、143、160、172、182和221，通過(guò)對(duì)13種蒙原羚等哺乳動(dòng)物的Prnp分析，與湯氏瞪羚、印度羚100%同源，與牛、大角斑羚同源性高于98%，此外，C-端球形結(jié)構(gòu)域的R4與R6之間(87-94)缺失1個(gè)八肽重復(fù)區(qū)。分別與牛和羊的同源性相比較，八肽重復(fù)區(qū)的長(zhǎng)度與牛相同，故蒙原羚Prnp和牛的同源性高于和羊的同源性。目前，尚未有蒙原羚感染TSE的報(bào)道，對(duì)蒙原羚Prnp多態(tài)性的研究，可能對(duì)TSE的發(fā)病機(jī)制、朊病的抗性基因和跨種間傳播將有重要的意義。

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Mongolian gazelle(Procapragutturosa)； Prnp； Sequence analysis； Gene polymorphism； Prion disease； Species barrier

傳染性海綿狀腦病(TSE)是發(fā)生于人和動(dòng)物神經(jīng)系統(tǒng)的退行性疾病，影響著人類的健康及動(dòng)物福利。朊蛋白基因的ORF氨基酸的多態(tài)性(Prnp)與TSE的潛伏期、遺傳易感性及種間屏障有關(guān)。在本研究中，首次對(duì)蒙原羚(Procapragutturosa)朊蛋白基因的ORF進(jìn)行全序列分析和多態(tài)性研究。研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，26只蒙原羚Prnp高度同源，與湯氏瞪羚(Eudorcasthomsonii)、印度羚(Antilopecervicapra)、牛(Bostaurus)的SNP的同源性較近，分別為100%、100%和98.5%，然而，斑紋角馬(Connochaetestaurinus)、歐洲狍(Capreoluscapreolus)和綿羊(Ovisaries)與八肽重復(fù)區(qū)的缺失相關(guān)，蒙原羚與它們的同源性分別為99.3%、99.3%和98.9% 。蒙原羚在6個(gè)位點(diǎn)發(fā)生氨基酸的置換分別為119(N→S)，143(S→G)，160(Y→H)，172(V→A)，182(N→S)和221(V→A)。在N端的R5(87-94)缺失1個(gè)八肽重復(fù)區(qū)。蒙原羚Prnp序列的特殊性可能影響分子間的相互作用和TSE種間屏障起關(guān)鍵的作用。

Sequences Analysis and Polymorphism Research of the Prion Protein Gene in Mongolian Gazelles (Procapra gutturosa)

Wang Yiqin1Bao Yonggan1Jing Wenkui1Yang Fan1Chen Shaobo1Yun Zelong1Qin Zhenkui2Yang Lifeng3Zhao Deming3

(1.Erlianhot Entry-Exit Inspection and Quarantine，Erlianhot，011100，China；2.Chinese Academy of Inspection and Quarantine，Beijing，100123，China；3.National Animal Transmissible Spongiform Encephalopathies Laboratory，College of Veterinary Medicine，China Agricultural University，Beijing，100094，China)

Prion diseases are a group of human and animal neurodegenerative conditions that are caused by the deposition of an abnormal isoform prion protein (PrPSc)encoded by a single copy prion protein gene (Prnp).In sheep，genetic variations of Prnp were found to be associated with the incubation period，susceptibility，and species barrier to the scrapie disease.We investigated the sequence and polymorphisms of the prion protein gene of Mongolian gazelles (gPrnp).gPrnp gene sequence analysis of blood samples from 26 Mongolian gazelles showed high identity within species.The gPrnp gene was closely related to the Prnp genes of Thomson’s gazelle，blackbuck，and cattle with 100，100，and 98.5% identity，respectively.The gPrnp gene with a deletion was closely related to the Prnp genes of wildebeest，Western roe deer，and sheep with 99.3，99.3，and 98.9% identity，respectively.Polymorphisms of the open reading frame of Prnp as amino acid substitutions were detected at codons 119(N→S)，143(S→G)or 160(Y→H)，172(V→A)，182(N →S)and 221(V→A).There was also deletion of one octapeptide repeat at the N-terminal octapeptide repeat region.The polymorphisms of gPrnp will assist the study of prion disease pathogenesis，resistance，and cross species transmission.

王伊琴，女，49歲，博士，高級(jí)獸醫(yī)師；研究方向，人畜共患病致病機(jī)理，主要從事出入境動(dòng)物檢驗(yàn)檢疫工作。 E-mail：bygwyq@163.com

2016-10-20

S852.65+9.7

A

修回日期：2016-11-30

發(fā)表日期：2017-05-10

2310-1490(2017)02-168-07