肖慧

摘 要：本實(shí)驗(yàn)以平臥菊三七的葉為實(shí)驗(yàn)材料，通過(guò)對(duì)提取溫度、提取時(shí)間、料液比進(jìn)行單因素實(shí)驗(yàn)，探討了不同提取工藝對(duì)黃酮得率的影響。通過(guò)單因素實(shí)驗(yàn)得出：最佳提取溫度為80℃、最佳提取時(shí)間3h、最佳提取料液比為1：30。

關(guān)鍵詞：平臥菊三七 葉 黃酮 工藝優(yōu)化 得率

前言

平臥菊三七是菊三七屬。是一種攀援草本，有臭氣，淡褐色或紫色，有條棱。它可以用于治支氣管肺炎，肺結(jié)核，其成份黃酮類有多種生物學(xué)活性在抗氧化作用方面、抗腫瘤活性，黃酮類物質(zhì)對(duì)冠心病、心絞痛、高血脂，心血管疾病有很好的療效。

由于平臥菊三七有諸多的藥用性質(zhì)，且其藥用性質(zhì)主要來(lái)自于其中的黃酮成分，為此本試驗(yàn)以平臥菊三七的葉為原料，采用分光光度法測(cè)提取物黃酮類化合物的含量，為平臥菊三七經(jīng)濟(jì)價(jià)值的綜合利用以及產(chǎn)品的開(kāi)發(fā)提供參考依據(jù)。

1、試驗(yàn)材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

1.1.1主要試驗(yàn)試劑

乙醇——分析純 硝酸鋁——分析純 氫氧化鈉——分析純 石油醚——分析純

1.1.2 試驗(yàn)原料

平臥菊三七 采自江西農(nóng)業(yè)大學(xué)中草藥資源開(kāi)發(fā)教學(xué)基地

1.1.3主要試驗(yàn)儀器

UV-2100型可見(jiàn)光分光分度計(jì) 尤尼柯（上海）儀器有限公司

Adventurer AR2140電子天平 OHAUS CORP USA

40目標(biāo)準(zhǔn)篩 上虞市大地分樣篩廠

HH-4，HH-2數(shù)顯恒溫水浴鍋 國(guó)華電器有限公司

L-20B型高速冷凍離心機(jī) 上海安亨科學(xué)儀器廠等

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1平臥菊三七葉的預(yù)處理

將干燥的平臥菊三七的葉用粉碎機(jī)粉碎，過(guò)40目篩后得到的葉粉用石油醚脫色脫脂3h，然后放入通風(fēng)櫥中讓其風(fēng)干至恒重，得到樣品。

1.2.2 平臥菊三七葉中黃酮提取工藝流程

平臥菊三七葉→預(yù)處理（清洗-曬干-粉碎）→乙醇溶液提取→過(guò)濾→定容→測(cè)吸光度→計(jì)算黃酮得率

1.2.3平臥菊三七葉提取黃酮的單因素試驗(yàn)設(shè)計(jì)

1.2.3.1料液比對(duì)平臥菊三七葉黃酮得率的影響

在酒精濃度80%，且溫度80℃，時(shí)間3h條件下采用不同料液（1：20，1：30，1：40，1：50，1：60）分別提取，研究料液比對(duì)平臥菊三七葉黃酮得率的影響。

1.2.3.2提取溫度對(duì)平臥菊三七葉黃酮得率的影響

在1.2.3.1得出最佳料液比，且時(shí)間3h下采用不同溫度（50℃、60℃、70℃、80℃、90℃、95℃）分別提取，研究不同溫度對(duì)平臥菊三七葉黃酮得率的影響。

1.2.3.3提取時(shí)間對(duì)平臥菊三七葉黃酮得率的影響

在1.2.3.1，1.2.3.2得出最佳料液比，溫度，在不同提取時(shí)間情況（1h、2h、3h、4h、5h）分別提取一次，研究不同時(shí)間對(duì)平臥菊三七葉黃酮得率的影響。

1.2.4平臥菊三七葉黃酮得率的測(cè)定的方法

平臥菊三七葉黃酮測(cè)定時(shí)以蘆丁作為參照物，精密稱取105℃干燥恒重的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品10mg，加80%乙醇溶解，定容到25ml容量瓶中，搖勻，精密吸取標(biāo)液0.0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2ml分別置10ml試管中，加5%NaNO2 1ml，放置6min后加10%AL（NO3）3 1ml放置6min，再加4%NaOH10ml，加水到刻度，搖勻，放置15min，用分光光度計(jì)進(jìn)行測(cè)定，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

稱取1g平臥菊三七葉粉未，用酒精提取過(guò)濾取濾液1ml到25ml容量瓶中，加水5ml搖勻，加入濃度5%NaNO2 1ml混勻放置6min，加5%AL（OH）3溶液1ml混勻，放置6min，加入4%NaOH 10ml，再加定容到25ml，搖勻后放置15min，再用分光光度計(jì)在波長(zhǎng)510nm處測(cè)定吸光度，根據(jù)回歸方程計(jì)算樣品中總黃酮總量[10]。

黃酮利率（%）=C*25*10-6*100/（W*P）

C：黃酮濃度：W：平臥菊三七葉粉末重量；P：料液比

2、結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制及回歸方程的建立

配制濃度分別為0、8、16、24、32、40、48μg/ml的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液，于510nm下測(cè)得蘆丁相應(yīng)的吸光值，吸光度分別為： 0、 0.067、 0.154、0.222、0.274、0.337、0.448。通過(guò)線性回歸得到回歸方程為： y=0.0089x+0.0001 （其中x：濃度，y：吸光度），決定系數(shù)R2=0.9922.

由蘆丁標(biāo)曲回歸方程的相關(guān)系數(shù)R=0.9961>R0.01（5）=0.874 ，可知蘆丁濃度與蘆丁吸光度值之間建立的回歸方程極顯著，可以通過(guò)所測(cè)得的提取液的吸光度值算出黃酮含量。

2.2平臥菊三七葉黃酮的單因素試驗(yàn)結(jié)果

2.2.1料液比對(duì)平臥菊三七葉黃酮得率的影響

在酒精濃度80%，時(shí)間3h，80℃條件下進(jìn)行料液比單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果為：料液比1：20，黃酮得率4.57%，料液比1：30，黃酮得率5.64%，料液比1：40，黃酮得率5.54%，料液比1：50，黃酮得率5.18%，料液比1：60，黃酮得率4.42%。

由此可見(jiàn)，隨著液料比的升高，提取率也隨之升高，其中在到達(dá)30：1時(shí)提取率最高，隨著液料比的升高，黃酮得率降低，所以1：30是黃酮提取的最適合料液比。

2.2.2溫度對(duì)平臥菊三七葉黃酮得率的影響

在酒精濃度80%和2.2.1所得黃酮最適合提取的料液比分別是1：30，時(shí)間是3h條件下進(jìn)行溫度單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果為：溫度50℃，黃酮得率3.96%，溫度60℃，黃酮得率4.46%，溫度70℃，黃酮得率4.72%，溫度80℃，黃酮得率5.57%，溫度5.16℃，黃酮得率4.42%。

由此可見(jiàn)，隨著溫度的升高，提取率也隨之升高，其中在到達(dá)80℃時(shí)提取率最高，80℃以后隨著溫度的升高，黃酮得率降低，所以80℃是黃酮提取的最適合溫度。

2.2.3時(shí)間對(duì)平臥菊三七葉黃酮得率的影響

在酒精濃度80%和2.2.1、2.2.2所得黃酮最適合提取的料液比、溫度分別是1：30，80℃條件下進(jìn)行時(shí)間單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果為：提取時(shí)間1h，黃酮得率5.59%，提取時(shí)間2h，黃酮得率6.33%，提取時(shí)間3h，黃酮得率7.09%，提取時(shí)間4h，黃酮得率6.88%，提取時(shí)間5h，，黃酮得率6.52%。

由此可見(jiàn)，隨著時(shí)間的增加，提取率也隨之增加，其中在到3h時(shí)提取率最高，以后隨著提取時(shí)間的增加，黃酮得率降低，所以3h是黃酮提取的最適合時(shí)間。

3、結(jié)論

提取平臥菊三七葉黃酮的最佳提取溫度為80℃、最佳提取時(shí)間為3h、最佳提取料液比為1：30。