檀笑昕，張淑娟，劉 坤，張鏵尹，連靠奇，徐向東，康維鈞

(河北醫(yī)科大學(xué) 公共衛(wèi)生學(xué)院,河北 石家莊 050011)

高效液相色譜-電化學(xué)檢測(cè)法研究大蒜素對(duì)百草枯中毒小鼠腦組織中單胺類(lèi)神經(jīng)遞質(zhì)含量的影響

檀笑昕，張淑娟，劉 坤，張鏵尹，連靠奇，徐向東，康維鈞*

(河北醫(yī)科大學(xué) 公共衛(wèi)生學(xué)院,河北 石家莊 050011)

建立了單胺類(lèi)神經(jīng)遞質(zhì)的高效液相色譜-電化學(xué)檢測(cè)方法，探討了大蒜素對(duì)百草枯中毒小鼠腦組織內(nèi)的單胺類(lèi)神經(jīng)遞質(zhì)及其代謝產(chǎn)物的影響。健康ICR小鼠隨機(jī)分為4組：正常對(duì)照(Con)組、大蒜素(DAS)組、百草枯染毒(PQ)組和大蒜素治療(PQ+DAS)組，每組6只。PQ組灌胃PQ 35 mg/kg建立中毒模型，Con組和DAS組灌服同體積生理鹽水。DAS組和PQ+DAS組小鼠于造模2 、26、50 h后腹腔內(nèi)各注射1次DAS(25 mg/kg)，PQ組和正常組小鼠腹腔內(nèi)注射等量無(wú)菌生理鹽水。造模12 h后處死小鼠。收集小鼠腦組織樣品并稱(chēng)重，處理后進(jìn)樣。色譜分析采用 Acclaim 120 C18(150 mm×2.1 mm，3 μm)色譜柱，以離子對(duì)緩沖鹽溶液-甲醇(93∶7，體積比)為流動(dòng)相，流速為0.27 mL/min；電化學(xué)檢測(cè)器檢測(cè)，工作電壓為450 mV。結(jié)果表明，與正常組和DAS組比較，PQ組部分神經(jīng)遞質(zhì)水平降低；DAS治療后能夠改變上述生化指標(biāo)的變化；與PQ組相比，PQ+DAS組神經(jīng)遞質(zhì)含量增高，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。腦組織樣品中5-HT、DA、5-HIAA、DOPAC和HVA低、中、高3水平的加標(biāo)回收率均為79.8%～112.1%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)小于10%。實(shí)驗(yàn)表明，大蒜素對(duì)百草枯中毒后小鼠體內(nèi)含量降低的神經(jīng)遞質(zhì)有明顯的上調(diào)作用。

高效液相色譜-電化學(xué)檢測(cè)；百草枯；大蒜素；單胺類(lèi)神經(jīng)遞質(zhì)

百草枯(Paraquat，PQ)是一種有機(jī)雜環(huán)類(lèi)接觸性脫葉劑，具有觸殺作用和一定內(nèi)吸作用，目前在世界范圍內(nèi)廣泛使用。PQ可經(jīng)皮膚、呼吸道和消化道進(jìn)入體內(nèi)，其在體內(nèi)幾乎不經(jīng)降解，主要隨尿排出體外，可分布在肺、肝、腎、甲狀腺、胎盤(pán)、各種體液和腦脊液中，從而體現(xiàn)其明顯的臟器損傷效應(yīng)[1]。且PQ目前尚無(wú)特效解毒藥物[2-3]，中毒后很快出現(xiàn)多器官功能衰竭導(dǎo)致死亡[4-5]，中毒死亡率達(dá)80%以上[6-7]。研究表明，百草枯中毒可導(dǎo)致小鼠腦組織脂質(zhì)過(guò)氧化增強(qiáng)，腦內(nèi)單胺類(lèi)神經(jīng)遞質(zhì)含量降低，對(duì)小鼠神經(jīng)系統(tǒng)具有毒性[8]。

大蒜素(Alltride)又名大蒜新素，化學(xué)名為二烯丙基硫化物(DAS)，是大蒜的主要有效成分。大蒜素是硫代亞磺酸類(lèi)有機(jī)物，所含的巰基能與含硫蛋白質(zhì)和谷胱甘肽發(fā)生氧化還原反應(yīng)，并能通過(guò)多種途徑抑制氧化應(yīng)激，具有較強(qiáng)的抗氧化活性[9]。研究表明，大蒜素進(jìn)入人體后通過(guò)增加谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶、谷胱甘肽還原酶和過(guò)氧化氫酶的活性等途徑達(dá)到抑制氧化損傷的作用[10]。已有研究[11]顯示，百草枯中毒后攝入大蒜素可減輕肺損傷，但其能否對(duì)抗PQ中毒所致的神經(jīng)損傷鮮見(jiàn)報(bào)道。本文研究了大蒜素對(duì)PQ中毒所致小鼠腦組織中神經(jīng)遞質(zhì)含量的影響，旨在為大蒜素對(duì)百草枯的臨床治療作用進(jìn)行初步探索。

多巴胺(Dopamine，DA)、5-羥色胺(5-Hydroxytryptamine，5-HT)及其代謝產(chǎn)物等物質(zhì)作為單胺類(lèi)神經(jīng)遞質(zhì)(Monoamine neurotransmitters，MNTs)，是哺乳動(dòng)物和人體內(nèi)中樞神經(jīng)重要的信息傳遞物質(zhì)，已報(bào)道的檢測(cè)方法主要有熒光法、放射免疫法、氣相色譜法、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法、毛細(xì)管電泳法、液相色譜和液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用等[12-16]，其中液相色譜檢測(cè)方法又包括紫外檢測(cè)法[17-18]和柱前衍生化檢測(cè)法[19-21]。本研究建立了同時(shí)測(cè)定小鼠腦組織中DA、5-HT及其代謝產(chǎn)物3,4-二羥基苯乙酸(DOPAC)、高香草酸(HVA)、 羥基吲哚乙酸(5-HIAA)的HPLC-ECD法，并用于觀察檢測(cè)百草枯中毒小鼠模型在大蒜素干預(yù)治療后腦組織中單胺類(lèi)神經(jīng)遞質(zhì)水平的變化。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

U3000型HPLC儀，配有電化學(xué)檢測(cè)器(ECD，美國(guó)賽默飛世爾公司)； Heal Force SMART-N高純水機(jī)(上海力康儀器有限公司)。百草枯水劑(200 g/L，先正達(dá)南通作物保護(hù)有限公司)，大蒜素(Alltride，C6H10S3，純度≥94.2%，中國(guó)食品藥品檢定研究院)。3,4-二羥基苯乙酸(Sigma-Aldrich公司)、多巴胺鹽酸鹽(純度98%，北京百靈威科技有限公司)、5-羥色胺鹽酸鹽(中國(guó)藥品生物制品檢定所)、高香草酸(純度>98%，TCI公司)、羥基吲哚乙酸(純度≥98%，Sigma-Aldrich公司)；甲醇(色譜純)，1-庚烷磺酸鈉(98%離子色譜級(jí))、鹽酸二乙胺(純度99%)均購(gòu)自成都艾科達(dá)化學(xué)試劑有限公司；檸檬酸鈉(優(yōu)級(jí)純，純度≥99%，阿拉丁)；其他試劑均為分析純，實(shí)驗(yàn)用水為高純水。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物雄性ICR小鼠(25～35 g)購(gòu)于河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。所有小鼠在標(biāo)準(zhǔn)條件下飼養(yǎng)，飼養(yǎng)場(chǎng)所通風(fēng)良好，動(dòng)物分組分籠飼養(yǎng)。室溫(24±1) ℃；濕度為50%±10%；光照6∶00～18∶00，給予普通飼料和自由飲水。實(shí)驗(yàn)前24 h 禁食，自由飲水。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)符合中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理?xiàng)l例(第55號(hào)文件，2001)的規(guī)定，并經(jīng)河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.3 實(shí)驗(yàn)條件

1.3.1實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ椭苽?5～35 g健康ICR小鼠隨機(jī)分為4組：正常對(duì)照(Con)組、大蒜素(DAS)組、百草枯染毒(PQ)組和大蒜素治療(PQ+DAS)組。第1天8∶00，PQ組和PQ+DAS組小鼠給予PQ 35 mg/kg灌胃，建立中毒模型，Con組和DAS組灌服同體積生理鹽水。DAS組和PQ+DAS組小鼠于造模2、26、50 h后腹腔內(nèi)各注射1次DAS(25 mg/kg)，PQ組和正常組小鼠腹腔內(nèi)注射等體積無(wú)菌生理鹽水。第3天10∶00，處死小鼠。

1.3.2標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液與混合標(biāo)準(zhǔn)工作液的制備精密稱(chēng)取DA、5-HT、5-HIAA、HVA、DOPAC標(biāo)準(zhǔn)品適量，以0.1 mol/L高氯酸溶解，配制成濃度分別為57.16、67.68、52.3、65.96、72.55 μmol/L的儲(chǔ)備液；DOPAC、HVA、5-HT各取2.0 mL，DA、5-HIAA各取2.5 mL，用Ringer’s液(含氯化鈉0.82%～0.9%、氯化鉀0.025%～0.035%、氯化鈣0.03%～0.036%)定容至100 mL，制成DA、5-HT、5-HIAA、HVA、DOPAC濃度分別為1 429.0、1 353.6、1 307.5、1 319.2、1 451.0 nmol/L的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液。

1.3.3單胺類(lèi)神經(jīng)遞質(zhì)的測(cè)定小鼠斷頭處死，于冰面上取小鼠全腦，稱(chēng)重后，分兩次加入共1.2 mL 0.1 mol/L高氯酸，冰浴中超聲勻漿，4 ℃下12 000 r/min離心20 min后取上清液，過(guò)0.22 μm濾膜后進(jìn)樣檢測(cè)。色譜柱為Acclaim 120 C18Column(150 mm×2.1 mm，3 μm)；流動(dòng)相：緩沖鹽溶液(28 mmol/L檸檬酸鈉、14.5 mmol/L 磷酸二氫鉀、2.2 mmol/L 1-庚烷磺酸鈉、0.5 mmol/L乙二胺四乙酸二鈉(EDTA-2Na)、10.0 mmol/L 鹽酸二乙胺，0.28% 乙酸調(diào)pH 4.55) -甲醇(93∶7，體積比)，流速：0.27 mL/min；工作電壓：450 mV；柱溫：35 ℃；進(jìn)樣量：20 μL。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果與討論

2.1 勻漿液的選擇

在樣品勻漿液的選擇上，選取3種勻漿/蛋白沉淀液進(jìn)行樣品處理(① 0.3 mL生理鹽水+0.6 mL冰乙腈；② 0.6 mL 0.1 mol/L高氯酸；③ 0.3 mL 0.1 mol/L高氯酸+0.3 mL 0.1 mol/L EDTA-2Na)。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，采用①勻漿樣品穩(wěn)定性差且無(wú)法有效提取待測(cè)物；勻漿液②對(duì)各待測(cè)物的提取保留效果最好，且在檢測(cè)條件下無(wú)干擾峰，但處理后的勻漿液顯酸性，DA和HVA分離變差；勻漿液③對(duì)待測(cè)樣品酸度的影響小，高氯酸濃度適宜，不會(huì)引起神經(jīng)遞質(zhì)氧化分解，既能有效沉淀蛋白，又不干擾峰形。最終選擇勻漿液“0.3 mL 0.1 mol/L高氯酸+0.3 mL 0.1 mol/L EDTA-2Na”進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

2.2 色譜條件的優(yōu)化

2.2.1色譜分離條件的優(yōu)化本文使用Syncronis C18(250 mm×4.6 mm,5 μm;Thermo Scientific,USA )、Accucore C18(150 mm×4.6 mm,2.6 μm; Thermo Scientific,USA)、Acclaim 120 C18(150 mm×2.1 mm,3 μm; Thermo Scientific,USA)、Atlantis T3(150 mm×1 mm,1 μm; Waters,USA) 4種色譜柱進(jìn)行試驗(yàn)。結(jié)果表明，選擇直徑<3 mm的柱子可增加檢測(cè)靈敏度，檢出限下降1個(gè)數(shù)量級(jí)以上；同時(shí)，粒徑越小，柱效越高，但粒徑≤1 μm后柱外譜帶明顯加寬，柱壓明顯升高。綜合考慮，選用Acclaim 120 C18柱(150 mm×2.1 mm,3 μm; Thermo Scientific,USA)進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

本文以兩種不同流動(dòng)相進(jìn)行試驗(yàn)，并對(duì)各組分的比例進(jìn)行了優(yōu)化。經(jīng)反復(fù)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，以磷酸鹽-檸檬酸鈉緩沖體系作為流動(dòng)相的噪聲低于乙酸鈉-檸檬酸鈉緩沖體系，有效降低了檢出限。進(jìn)一步優(yōu)化了酸度對(duì)待測(cè)物分離檢測(cè)的影響，發(fā)現(xiàn)當(dāng)pH值大于5.5時(shí)，DOPAC與5-HIAA不能有效分離且4 min內(nèi)出峰；pH值小于4.2時(shí)，各物質(zhì)的峰形均有明顯拖尾，檢出限增大。有機(jī)相比例主要影響各待測(cè)物的保留時(shí)間，實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，增大甲醇的比例不會(huì)改變各物質(zhì)的出峰順序，但可明顯縮短各物質(zhì)的保留時(shí)間，尤其是對(duì)5-HT影響較大，但甲醇比例過(guò)大會(huì)使得DOPAC出峰過(guò)早，與非待測(cè)峰重疊，影響分析結(jié)果。經(jīng)過(guò)優(yōu)化，選用“14.5 mmol/L 磷酸二氫鉀-30 mmol/L檸檬酸鈉+ 0.5 mmol/L EDTA-2Na+2.2 mmol/L 1-庚烷磺酸鈉+10 mmol/L二乙胺鹽酸鹽+0.28%乙酸”為流動(dòng)相。

2.2.2氧化電位的選擇DOPAC、DA的出峰電位為200 mV；5-HT及5-HIAA為300 mV；HVA為400 mV。在400～650 mV范圍內(nèi)，峰高與施加電壓大小成正比，但大于450 mV后，雜峰拖尾嚴(yán)重，對(duì)分析物造成干擾。選擇450 mV作為施加電壓測(cè)定樣品后發(fā)現(xiàn)，腦組織樣品中抗壞血酸含量較高，在已有條件下無(wú)法氧化完全，拖尾較嚴(yán)重，對(duì)DOPAC的定量檢測(cè)造成干擾。因此，本實(shí)驗(yàn)在檢測(cè)時(shí)，選擇在前3 min以通道1(E1)施加650 mV氧化電位以盡可能消除AA的干擾后，通道2(E2)再以450 mV為氧化電位對(duì)待測(cè)物進(jìn)行檢測(cè)。

2.2.3其他條件的選擇由于流動(dòng)相中含離子對(duì)試劑時(shí)，采用梯度洗脫會(huì)導(dǎo)致柱壓在短時(shí)間內(nèi)明顯改變，進(jìn)而對(duì)色譜柱造成損傷，因此采用改變流速和柱溫的方法，既可使各物質(zhì)保持良好的分離度，又可縮短5-HT的保留時(shí)間。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，柱溫越高，流速越大，保留時(shí)間縮短，峰形更佳；流速越大，峰展寬越小，但因柱徑小、有機(jī)相比例小、待測(cè)物極性大等因素，流速不宜超過(guò)0.3 mL/min。最終選擇流速為0.27 mL/min，柱溫為35 ℃。

2.3 方法學(xué)驗(yàn)證

取空白溶劑(勻漿液)、20 nmol/L混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液、正常小鼠腦組織勻漿進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖(圖1)。結(jié)果顯示，標(biāo)準(zhǔn)品和腦透析液中的各峰形對(duì)稱(chēng)，內(nèi)源性雜質(zhì)無(wú)干擾，DOPAC、5-HIAA、HVA、DA、5-HT的保留時(shí)間分別約為3.75、7.26、9.19、10.99、29.56 min，5種待測(cè)物分離良好。

分別取0.02、0.05、0.10、0.20、0.50、1.00、2.00 mL混合標(biāo)準(zhǔn)工作液，加水稀釋定容至10.00 mL配制系列標(biāo)準(zhǔn)品溶液，進(jìn)樣20 μL測(cè)定。以濃度(X，μmol/L)為橫坐標(biāo)、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的峰面積(Y，μA×min)為縱坐標(biāo)進(jìn)行回歸分析，得到5種待測(cè)物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)曲線。以最低濃度標(biāo)準(zhǔn)工作液進(jìn)樣后各待測(cè)物峰面積的3倍標(biāo)準(zhǔn)偏差為檢出限(LOD)。各待測(cè)物的LOD、線性范圍、回歸方程及相關(guān)系數(shù)見(jiàn)表1。

因5種待測(cè)物均為內(nèi)源性物質(zhì)，故用加入法測(cè)定回收率，即向腦組織樣品中加入高、中、低3種濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液，進(jìn)樣測(cè)定。試樣及加標(biāo)試樣的色譜圖見(jiàn)圖1，結(jié)果見(jiàn)表2。

圖1 試樣(A)及加標(biāo)試樣(B)的色譜圖Fig.1 Chromatograms of test sample(A) and test sample with mixed standard substance(B)1. DOPAC,2. 5-HIAA,3. HVA,4. DA,5. 5-HT

表1 待測(cè)物的線性范圍、回歸方程、相關(guān)系數(shù)與檢出限Table 1 Linear range,regression equation,correlation coefficients(r) and limit of detection(LOD) of five compounds

表2 加標(biāo)回收率的實(shí)驗(yàn)結(jié)果(n=3)Table 2 Results of recovery tests of spiked sample(n=3)

*no detected

2.4 穩(wěn)定性試驗(yàn)

將已知濃度的樣品溶液3份，置于常溫下存放，分別于同日內(nèi)0、3、6、12 h重復(fù)測(cè)定4次，考察樣品的穩(wěn)定性。結(jié)果HVA、DA、5-HT在常溫下可穩(wěn)定12 h以上，DOPAC在6 h后含量略有下降，5-HIAA在3 h后含量大幅下降，表明腦透析液中5-HIAA在常溫下僅能穩(wěn)定1～2 h。而在4 ℃下，樣品中各待測(cè)物含量均可穩(wěn)定2 d以上。

2.5 腦組織中單胺類(lèi)神經(jīng)遞質(zhì)含量

各組小鼠腦組織中5種待測(cè)物含量見(jiàn)表3。結(jié)果表明，PQ組大鼠腦組織中DA、5-HT的含量顯著低于Con組(P<0.05)，而PQ+DAS組腦組織中DA、5-HT的含量與PQ組相比顯著上升(P<0.05)。DAS組和Con組小鼠的含量無(wú)顯著差異(P>0.05)。此外，PQ組的DOPAC和5-HIAA含量明顯高于Con組(P<0.05)，提示PQ的毒性作用可能促進(jìn)了DA和5-HT的氧化代謝。

DA和5-HT是中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)重要的神經(jīng)遞質(zhì)，兩者與其主要代謝產(chǎn)物DOPAC、HVA、5-HIAA在神經(jīng)信號(hào)的傳遞中均發(fā)揮著重要作用。有研究表明，氧化應(yīng)激可加速單胺類(lèi)神經(jīng)遞質(zhì)的氧化過(guò)程，導(dǎo)致其含量下降[22]。百草枯中毒會(huì)引起活性氧激增并導(dǎo)致NADPH及其它還原物質(zhì)的消耗[23]，降低還原型谷胱甘肽(GSH)水平[24]。腦組織內(nèi)抗拒脂質(zhì)過(guò)氧化的酶消耗過(guò)多，使得清除體內(nèi)自由基的能力降低，一方面可導(dǎo)致小鼠腦組織脂質(zhì)過(guò)氧化增強(qiáng)，造成腦黑質(zhì)、紋狀體氧化損傷，對(duì)其功能有特異性毒性[25-29]；另一方面，可使腦內(nèi)單胺類(lèi)神經(jīng)遞質(zhì)含量降低，對(duì)小鼠神經(jīng)系統(tǒng)具有一定的毒性作用[8,30]，長(zhǎng)期接觸可能改變多巴胺的代謝[31-32]。腦內(nèi)的多巴胺主要由單胺氧化酶(MAO)轉(zhuǎn)化為DOPAC，在兒茶酚氧位甲基轉(zhuǎn)移酶(Corn)的作用下，DOPAC轉(zhuǎn)化為高香草酸(HVA)。但與靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物不同，鼠腦中多巴胺代謝的終產(chǎn)物主要是DOPAC[33]；5-HT的主要代謝產(chǎn)物是5-HIAA。在本實(shí)驗(yàn)中，PQ組小鼠腦組織中的DA和5-HT較Con組均有下降趨勢(shì)，而DOPAC、5-HIAA的含量明顯升高，這與PQ的發(fā)病機(jī)理相一致。

本實(shí)驗(yàn)中大蒜素治療(PQ+DAS)組的DA、5-HT含量均高于PQ染毒組，與周曉明等[34]得出的MAO的表達(dá)有抑制作用的實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致。此次實(shí)驗(yàn)中DAS組的5-HT含量高于Con組，與呂亞囡等[35]得出的大蒜素對(duì)5-HT存在上調(diào)作用的結(jié)論一致。

GroupDOPAC5?HIAAHVADA5?HTCon128 01±0 81113 44±1 8352 27±2 6139 89±1 277 75±2 02DAS156 74±12 47153 60±2 4681 24±2 5534 38±5 3310 72±4 01PQ141 28±2 58138 35±4 0339 16±1 3617 59±4 953 99±0 28PQ+DAS166 78±3 29181 01±2 6746 14±7 3421 67±6 935 03±0 50

3 結(jié) 論

本文建立了HPLC-ECD法，靈敏、簡(jiǎn)便、快速地測(cè)定了小鼠腦組織中5-HT、DA、5-HIAA、DOPAC、HVA等單胺類(lèi)神經(jīng)遞質(zhì)的含量，從而考察了大蒜素對(duì)百草枯染毒小鼠腦組織神經(jīng)遞質(zhì)含量變化的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，大蒜素可能通過(guò)減輕氧化損傷和提高小鼠單胺類(lèi)神經(jīng)遞質(zhì)DA、5-HT 的含量來(lái)有效改善百草枯中毒小鼠的腦損傷，對(duì)百草枯神經(jīng)毒性有一定的解毒作用。然而，大蒜素可否作為百草枯解毒劑或解毒輔助藥物應(yīng)用于臨床，尚有待于進(jìn)一步探討。

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Study on Effects of Alltride on Monoamine Neurotransmitters in Brain of Paraquat Poisoning Rats by HPLC-ECD

TAN Xiao-xin,ZHANG Shu-juan,LIU Kun,ZHANG Hua-yin,LIAN Kao-qi, XU Xiang-dong,KANG Wei-jun*

(School of Public Health,Hebei Medical University,Shijiazhuang 050011,China)

An HPLC-ECD method was established for the determination of five neurotransmitters in cerebral tissues of rats to discuss the protective effects of alltride(DAS) on the monoamine neurotransmitters(MNTs) in paraquat(PQ) poisoning rats brain tissues.Male ICR rats were divided into four groups(n=6) according to their different treatments.The paraquat(PQ) group and the treatment(PQ+DAS) group exposed to 35 mg/kg PQ i.g..The control group and the alltride(DAS) group were given the same volume of sterile saline.The alltride(DAS) group and treatment group were administrated with 25 mg/kg DAS i.p.after PQ was given intragastrically for 2,26,50 h.PQ group and normal group rats were injected with the same amount of sterile saline.The determination was performed on an Acclaim 120 C18column with a mobile phase consisted of buffer salt(sodium citrate,monopotassium phosphate,sodium heptanesulfonate,EDTA-2Na,diethylamine hydrochloride )-methanol(93∶7,by volume) at a flow rate of 0.27 mL/min,and the voltage of electrode was set at 450 mV.Compared with the normal or DAS group，the PQ group showed significant decreases in the quantities of DA and 5-HT.The combination of PQ and DAS resulted in higher amounts of neurotransmitters than that of the administration with PQ alone(P<0.05).The spiked recoveries were in the range of 79.8%-112.1%with RSDs lower than 10%.DAS could prevent rats from the PQ-induced decrease of the neurotransmitters,which may be associated with its abilities to relieve oxidative damages.

HPLC-ECD；paraquat；alltride；monoamine neurotransmitters

O657.72；O623.732

：A

：1004-4957(2017)09-1069-06

2017-04-10；

：2017-04-17

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81573202)

*

：康維鈞，博士，教授，研究方向：衛(wèi)生檢驗(yàn)新方法，Tel: 0311-86265754，E-mail: kangwj158@163.com

10.3969/j.issn.1004-4957.2017.09.002