荊 嬌，馬海玲，閆文升，張永忠，張玉清，焦宗偉

（石家莊醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校，河北 石家莊 050000）

辛伐他汀對腎缺血再灌注損傷大鼠心肌細(xì)胞凋亡的影響

荊 嬌，馬海玲，閆文升，張永忠，張玉清，焦宗偉

（石家莊醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校，河北 石家莊 050000）

目的 觀察辛伐他汀預(yù)處理對腎缺血再灌注損傷大鼠遠(yuǎn)程器官細(xì)胞凋亡的影響。方法 采用夾閉雙側(cè)腎動(dòng)靜脈45分鐘后去夾再灌的方法復(fù)制腎缺血再灌注損傷（RI/RI）模型。36只SD大鼠隨機(jī)分成3組：（1）假手術(shù)組；（2）腎缺血再灌注組；（3）辛伐他汀組，每組12只。取心肌組織測定乳酸脫氫酶（LDH）、肌酸激酶（CK）活性，TUNEL法檢測細(xì)胞凋亡率，蛋白免疫印跡檢測NF-kB蛋白表達(dá)。結(jié)果 與假手術(shù)組比，腎缺血再灌注組LDH、肌CK活性增高，細(xì)胞凋亡率升高，NF-kB表達(dá)增多，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。與腎缺血再灌注組相比辛伐他汀組LDH、CK活性降低，胞凋亡率降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），NF-kB表達(dá)降低。結(jié)論 辛伐他汀對RIRI大鼠心肌損傷有改善作用，可能與凋亡基因NF-kB表達(dá)有關(guān)。

辛伐他??；細(xì)胞凋亡；NF-kB

他汀類藥物是三羥基三甲基戊二酰輔酶A還原酶抑制劑，目前普遍用于治療高脂血癥。近年來發(fā)現(xiàn)，他汀類藥物除降血脂作用外，還有抗炎作用，對腎臟有保護(hù)功能等其他非降脂方面的作用，在防治心臟疾病方面也日益重視[1]。但辛伐他汀預(yù)處理對遠(yuǎn)程器官的影響的研究尚不多見。本實(shí)驗(yàn)就此進(jìn)行了初步研究。

1 資料與方法

除假手術(shù)組只開腹不夾閉腎動(dòng)、靜脈外，其余各組均需夾閉雙側(cè)腎動(dòng)、靜脈45 min，然后除夾再灌。后逐層縫合。取心肌組織測定、LDH、CK、活性，TUNEL法檢測細(xì)胞凋亡率，蛋白免疫印跡檢測NF-kB蛋白表達(dá)。各項(xiàng)指標(biāo)檢測方法嚴(yán)格按說明書操作。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)量資料以

1.1 一般資料

成年健康雄性SD（河北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心）；辛伐他汀（杭州上虞京新藥業(yè)有限公司）；LDH、CK（南京建成生物制品公司）；NF-kB（Santa cruz biotechnology）。

成年健康雄性SD大鼠36只，體重16～230 g，在20～26℃實(shí)驗(yàn)室安靜飼養(yǎng)兩天后隨機(jī)分為3組：（1）假手術(shù)組；（2）腎缺血再灌注組；（3）辛伐他汀組。每組12只。分組后，辛伐他汀組每日給予辛伐他汀20 mg/kg灌胃，持續(xù)2周。假手術(shù)組和缺血再灌組每日給予等量的生理鹽水灌胃。兩周之后復(fù)制動(dòng)物模型。

1.2 方法

10%水合氯醛腹腔麻醉，開腹，暴露雙側(cè)腎動(dòng)、靜脈。表示，采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以百分?jǐn)?shù)（%），例（n）表示，采用x2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 辛伐他汀對心肌組織LDH和CK活性的影響

缺血再灌注組心肌組織LDH和CK活性高于假手術(shù)組，與缺血再灌注組相比，辛伐他汀組LDH、CK活性降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

2.2 辛伐他汀對心肌細(xì)胞凋亡率的影響

與假手術(shù)組比較，缺血再灌注組凋亡指數(shù)升高，而辛伐他汀組凋亡指數(shù)低于缺血組。差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 辛伐他汀對大鼠乳酸脫氫酶、肌酸激酶以及凋亡指數(shù)的影響（±s，n=12）

表1 辛伐他汀對大鼠乳酸脫氫酶、肌酸激酶以及凋亡指數(shù)的影響（±s，n=12）

注：△P＜0.05 vs 假手術(shù)組；*P＜0.05 vs 缺血再灌組

Group LDH（U/L） CK（U/L） 凋亡指數(shù)假手術(shù)組 2345.27±148.62 1648.17±111.45 4.15±1.13缺血再灌組 3168.21±241.51△ 3791.22±154.12△ 35.16±4.23△辛伐他汀組 2856.21±123.45* 2357.54±154.71* 16.45±3.98*

2.3 辛伐他汀對心肌細(xì)胞NF-kB表達(dá)的影響

與假手術(shù)組比較，缺血再灌注組NF-kB表達(dá)升高，而辛伐他汀組NF-kB表達(dá)降低。差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見圖1。

圖1 辛伐他汀對心肌細(xì)胞NF-kB表達(dá)的影響

3 討 論

RI/RI是多因素參與的復(fù)雜過程，其主要的損傷因素有自由基損傷、NO等舒張血管物質(zhì)的減少、內(nèi)皮素等縮血管物質(zhì)產(chǎn)生過多等[2]。腎缺血再灌注期間產(chǎn)生的大量的OFR可通過血液循環(huán)可造成遠(yuǎn)隔器官的損傷，戎浩[3]等的研究也表明腎缺血后遠(yuǎn)端器官也有不同程度的損傷，核轉(zhuǎn)錄因子-kB（NF-kB）是細(xì)胞核內(nèi)重要的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子，是細(xì)胞存活、細(xì)胞周期、細(xì)胞黏附和遷移的重要調(diào)節(jié)者，有報(bào)道大鼠心肌缺血再灌后NF-kB活化對心肌細(xì)胞的凋亡起促進(jìn)作用[4]。

本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用實(shí)驗(yàn)室以往的方法[5]復(fù)制腎缺血再灌注損傷模型，觀察各項(xiàng)指標(biāo)，結(jié)果顯示，缺血再灌注后，LDH、CK活性均顯著升高，NF-kB表達(dá)升高。說明缺血再灌注后心肌受損，心肌細(xì)胞凋亡增多。而給予辛伐他汀干預(yù)后，LDH、CK活性降低，NF-kB表達(dá)降低與缺血再灌注組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），這說明辛辛伐他汀對RIRI大鼠心肌損傷有改善作用，可能與凋亡基因NF-kB表達(dá)有關(guān)，但具體機(jī)制有待于進(jìn)一步的探討研究。

[1] 姜 華,尹 微.辛伐他汀對膿毒癥大鼠心肌保護(hù)作用的研究[J].臨床合理用藥雜志,2016,9(21):48-49.

[2] 仝 飛,夏曉紅.短暫反復(fù)缺血預(yù)處理對大鼠腎缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制研究[D].石家莊:河北醫(yī)科大學(xué),2011.

[3] 戎 浩,夏曉紅.褪黑素對腎缺血再灌注損傷大鼠腦組織氧自由基和細(xì)胞凋亡的影響[J].中國病理生理雜志,2015,31(10):1861.

[4] 胡煜輝,馮 云,劉星等.大鼠心肌缺血再灌注損傷中心肌細(xì)胞凋亡與NF-kB p65、iNOS的表達(dá)[J].細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志,2010,26(9):868-871.

[5] 夏曉紅,申玉學(xué),石紀(jì)才,等.內(nèi)皮素抗體在大鼠腎缺血/再灌注損傷的作用[J].中國病理生理雜志,1999,15(5):415-417.

本文編輯：李 豆

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ISSN.2095-6681.2017.21.170.02

河北省教育廳高等學(xué)?？茖W(xué)技術(shù)指導(dǎo)性研究項(xiàng)目（編號：Z2014020）