張洪亞，王振國(guó)，劉邦剛，楚杰，劉可春，楊桂文

（1.山東師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，山東濟(jì)南250014；2.山東省科學(xué)院生物研究所山東省生物檢測(cè)技術(shù)工程實(shí)驗(yàn)室/山東省生物傳感器重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/山東省科學(xué)院藥物篩選技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，山東濟(jì)南250014；3.濟(jì)南大學(xué)山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院，山東濟(jì)南250002）

石榴酒體外及斑馬魚(yú)體內(nèi)抗氧化活性研究

張洪亞1，2，王振國(guó)3，劉邦剛3，楚杰2，*，劉可春2，楊桂文1，*

（1.山東師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，山東濟(jì)南250014；2.山東省科學(xué)院生物研究所山東省生物檢測(cè)技術(shù)工程實(shí)驗(yàn)室/山東省生物傳感器重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/山東省科學(xué)院藥物篩選技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，山東濟(jì)南250014；3.濟(jì)南大學(xué)山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院，山東濟(jì)南250002）

探對(duì)石榴酒的抗氧化活性進(jìn)行研究，采用分光光度法測(cè)定石榴酒對(duì)DPPH·、·OH和O2-自由基的清除能力和石榴酒的還原力，并利用皮膚熒光斑馬魚(yú)進(jìn)行石榴酒的抗氧化活性試驗(yàn)。結(jié)果表明：石榴酒在一定范圍加入量?jī)?nèi)對(duì)DPPH·、·OH和O2-有良好的清除作用，清除率最大分別為92.95%、82.76%和63.85%。在對(duì)皮膚熒光斑馬魚(yú)進(jìn)行石榴酒的抗氧化活性體內(nèi)試驗(yàn)中，石榴酒濃度在30、40、50μL/mL時(shí)，相對(duì)抗氧化能力分別達(dá)到了39.7%、60.3%、75.4%。

石榴酒；抗氧化活性；自由基；斑馬魚(yú)

Abstract：The study was to investigate the antioxidant activity of pomegranate wine.The antioxidant activity of the pomegranate wine was evaluated by spectrophotometry on its ability of scavenging 1-diphenyl-2-picrylhydrazy（DPPH·），hydroxyl radical（·OH），superoxide anion radical（O2-·）and total reducing power.The zebrafish with fluorescent skin was used to test the antioxidant activities of the pomegranate wine in vivo.The results showed that pomegranate wine had a well scavenging activity on DPPH·，·OH and O2-·in a certain range，and the highest scavenging activity were 92.95%，82.76%and 63.85%，respectively.In vivo experiment in zebrafish with fluorescent skin showed that the highest scavenging activity of pomegranate wine were 39.7%，60.3%and 75.4%in a certain concentration range（30，40，50 μL/mL）.

Key words：pomegranate wine；antioxidantactivity；free radical；zebrafish

石榴素有“九洲奇果”之美譽(yù)，果實(shí)富含多種氨基酸、碳水化合物、維生素和人體所必需的微量元素如鐵、銅、鋅等[1]。石榴果除鮮食外，還可加工成石榴果汁，果醋和果酒等多種產(chǎn)品[2-3]。石榴酒系采用石榴為主要原料，經(jīng)破碎，發(fā)酵，分離，陳釀?wù){(diào)配而成的果酒。石榴果酒中含大量多酚、類黃酮及花青素等高效抗氧化活性物質(zhì)，同時(shí)含有大量的維生素C，有很強(qiáng)的抗氧化能力。其中，石榴酒中類黃酮的含量大大超過(guò)紅葡萄酒[4]，類黃酮可中和人體內(nèi)誘發(fā)疾病與衰老的氧自由基，在延緩衰老，預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化以及減緩癌變的進(jìn)程等方面有著良好的作用[5]。此外石榴酒中的花色苷和多酚類化合物有明顯的抑菌消炎作用和抗癌、抗衰老、抗突變和防癌的作用，能有效地預(yù)防疾病的發(fā)生[6]?；谄渲T多功效，石榴酒具有很好的保健功能，有廣闊的應(yīng)用市場(chǎng)。

斑馬魚(yú)是一種亞熱帶淡水觀賞魚(yú)，體型小，繁殖速度快，培育簡(jiǎn)便快捷，在胚胎發(fā)育時(shí)期身體透明可見(jiàn)，顯微鏡下易于觀察，被列為繼大鼠和小鼠之后的第三大模式生物。皮膚熒光轉(zhuǎn)基因斑馬魚(yú)是將熒光蛋白標(biāo)記在角質(zhì)細(xì)胞上，利用甲硝唑使皮膚細(xì)胞消融，然后再加入抗氧化物質(zhì)，使有一部分皮膚細(xì)胞的熒光重新得以表達(dá)，從而量化抗氧化物質(zhì)的抗氧化能力[7]。自由基是客觀存在的，過(guò)量的自由基對(duì)人體造成損害[8]，因此研究具有抗氧化作用的石榴酒意義重大。本文通過(guò)體外和體內(nèi)試驗(yàn)考察石榴酒的抗氧化能力，同時(shí)以VC作為對(duì)照，為石榴酒的開(kāi)發(fā)和綜合利用提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

石榴酒：山東省科學(xué)院藥物篩選技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室采用石榴汁發(fā)酵而成；DPPH：梯希愛(ài)（上海）化成發(fā)展有限公司；Tric-ainc MS222麻醉劑：Sigma公司；水為雙蒸水；甲硝唑溶液0.01 mol/L（DMSO溶解）；轉(zhuǎn)基因皮膚熒光斑馬魚(yú)cy17（krt4-NTR：GFP）：山東省科學(xué)院生物研究所繁殖；VC、DMSO、硫酸亞鐵、亞硝酸鈉、硝酸鋁、水楊酸、氫氧化鈉、雙氧水、無(wú)水乙醇等（均為分析純）：國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

UV-2100型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)：上海合利儀器有限公司；Olympus SZX-16型熒光顯微鏡：日本Olympus公司；恒溫培養(yǎng)箱：上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司；電熱恒溫水浴鍋：上海賀徳實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 石榴酒體外抗氧化活性試驗(yàn)

采用1，1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基（DPPH自由基）法、水楊酸法和鄰苯三酚自氧化法來(lái)進(jìn)行抗氧化試驗(yàn)，測(cè)定了石榴酒的總還原力，同時(shí)以VC為陽(yáng)性對(duì)照。

1.2.1.1 DPPH·的清除試驗(yàn)

用無(wú)水乙醇配置100 μmol/LDPPH自由基醇溶液，置于棕色瓶中備用。將3 mL DPPH自由基醇溶液分別加入到 1 mL 含有 5、10、20、30、40 μL 樣品的水溶液中，充分混勻，于避光處反應(yīng)20 min后，在517 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。同時(shí)用VC溶液作陽(yáng)性對(duì)照。DPPH自由基的清除率計(jì)算公式為

式中：Ai為樣品溶液的吸光度；Aj為石榴酒溶液在測(cè)定波長(zhǎng)處的吸光度；Ao為未加石榴酒溶液的吸光度。

1.2.1.2 ·OH清除能力的測(cè)定

分別取石榴酒 10、80、160、240、320 μL 于試管中，并用雙蒸水補(bǔ)齊至2 mL，充分混勻，在反應(yīng)體系中依次加2 mL濃度為9 mmol/L的FeSO4、2 mL濃度為9 mmol/L的水楊酸-乙醇溶液、2 mL受試樣液、2 mL濃度為8.8 mmol/L的H2O2，混勻后在37℃下啟動(dòng)反應(yīng)，反應(yīng)30 min后在510 nm波長(zhǎng)處測(cè)其吸光值。同時(shí)以VC做為陽(yáng)性對(duì)照進(jìn)行測(cè)定，羥基自由基清除率計(jì)算公式為

式中：Bi為樣品溶液的吸光度；Bj為石榴酒溶液在測(cè)定波長(zhǎng)處的吸光度；Bo為未加石榴酒溶液的吸光度。

1.2.1.3 O2-·清除能力的測(cè)定

分別取石榴酒 10、40、60、80、100、120 μL 于試管中，并用雙蒸水補(bǔ)齊至1 mL，混勻后，在反應(yīng)體系中分別加4.5 mL濃度為0.05 mol/L的Tris-HCl（pH 8.2）緩沖液，于25℃水浴20 min后，再加1.0 mL不同濃度的受試樣液和0.5 mL 2.5 mmol/L在25℃下預(yù)熱過(guò)的鄰苯三酚溶液，混勻后在25℃下反應(yīng)5 min后立即用2滴～3滴濃度為8.0 mol/L的HCl溶液終止反應(yīng)，于320 nm處測(cè)吸光值，同時(shí)以VC做為陽(yáng)性對(duì)照，超氧離子自由基清除率計(jì)算公式：

式中：Ci為樣品溶液的吸光度；Cj為石榴酒溶液在測(cè)定波長(zhǎng)處的吸光度；C0為未加石榴酒時(shí)溶液的吸光度。

1.2.1.4 還原能力的測(cè)定

用移液槍準(zhǔn)確取 40、80、120、160、200 μL 不同梯度體積的石榴酒加入到試管中，用雙蒸水補(bǔ)齊至2.5mL，然后加入2.5 mL 0.2 mol/L pH 6.6的H3PO4緩沖液，再添加2.5 mL 1%的K3Fe（CN）6溶液后混勻。置于50℃的水浴鍋中反應(yīng)20 min后，再加入2.5 mL 10%的C2HCl3O2溶液，混勻后在離心機(jī)中以3 000 r/min的轉(zhuǎn)速離心10 min，取離心后的上清液5 mL加入已添加0.5 mL 0.1%的FeCl3溶液和4 mL蒸餾水的試管中，混勻。10 min后于700 nm處測(cè)定其吸光度。同時(shí)以VC作為對(duì)照。

1.2.2 斑馬魚(yú)體內(nèi)抗氧化活性的研究

1.2.2.1 斑馬魚(yú)抗氧化原理

斑馬魚(yú)的皮膚由包膜和基底層組成，形成第一道防御系統(tǒng)。以往研究表明，魚(yú)的皮膚對(duì)外部刺激非常敏感，轉(zhuǎn)基因斑馬魚(yú)能有條件的引發(fā)皮膚表層細(xì)胞凋亡。皮膚熒光斑馬魚(yú)是將熒光蛋白標(biāo)記在角質(zhì)細(xì)胞上，對(duì)熒光角質(zhì)細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，如果一個(gè)細(xì)胞內(nèi)的自由基導(dǎo)致了細(xì)胞受損，就會(huì)使線粒體膜穿孔，這些小孔會(huì)允許細(xì)胞色素C到達(dá)細(xì)胞質(zhì)中，使得細(xì)胞色素C與Apaf-1結(jié)合形成聚合體，由ATP提供能量，這些聚合體進(jìn)而使caspase-9裂解為caspase-3和caspase-7，這些裂解的caspase可以激活蛋白水解酶，使蛋白水解，并降解DNA。通過(guò)加入抗氧化物質(zhì)來(lái)清除細(xì)胞內(nèi)的自由基，從而減少細(xì)胞凋亡。轉(zhuǎn)基因熒光斑馬魚(yú)可通過(guò)熒光顯微鏡觀察到皮膚上顯示許多綠色的熒光亮斑點(diǎn)，與甲硝唑孵育，會(huì)引起細(xì)胞凋亡，使熒光斑點(diǎn)消失，當(dāng)再加入抗氧化物質(zhì)熒光斑點(diǎn)會(huì)恢復(fù)[9]。利用此特性進(jìn)行抗氧化試驗(yàn)，選擇皮膚熒光斑馬魚(yú)卵黃部位進(jìn)行拍照，運(yùn)用Image-Pro軟件計(jì)數(shù)各組的熒光點(diǎn)數(shù)量，可以測(cè)定藥物的相對(duì)抗氧化能力。

1.2.2.2 斑馬魚(yú)胚胎的準(zhǔn)備

斑馬魚(yú)的養(yǎng)殖方法參照Westerfield[10]等的方法，選擇成熟的斑馬魚(yú)，按照雌魚(yú)與雄魚(yú)1∶1或者1∶2的比例置入繁殖缸內(nèi)，次日清晨取出受精卵，加入亞甲基藍(lán)溶液，放入28℃培養(yǎng)箱中孵化，備用。

1.2.2.3 試驗(yàn)分組與給藥

配制濃度分別為 5、10、20、30、40、50 μL/mL 的石榴酒樣液，并配制濃度為20、40、100 μg/mL的VC溶液。將孵化24 h的斑馬魚(yú)胚胎取出，加入1 mg/mL的鏈霉蛋白酶溶液中約3 min左右，脫去斑馬魚(yú)胚胎的外層卵膜將脫去卵膜的斑馬魚(yú)胚胎隨機(jī)分成4組：溶劑對(duì)照組、甲硝唑組、石榴酒組和VC組，每組7個(gè)胚胎，同時(shí)設(shè)置2個(gè)副孔，加入到24孔板中，每組試驗(yàn)進(jìn)行3次。

根據(jù)試驗(yàn)分組，在溶劑對(duì)照組加入2 mL新鮮培養(yǎng)水，并用新鮮培養(yǎng)水配成0.01 mol/L的甲硝唑溶液。甲硝唑組、石榴酒組和VC組分別加入2 mL 0.01 mol/L的甲硝唑溶液，同時(shí)石榴酒組和VC組按照各自的濃度分別加入5 μL溶液，搖勻，將加樣后的24孔板置于28℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h。

將樣品板取出后，在熒光顯微鏡下觀察斑馬魚(yú)胚胎的生長(zhǎng)狀況以及皮膚熒光的數(shù)量，同時(shí)為防止拍照過(guò)程中斑馬魚(yú)不斷的游動(dòng)，在24孔板的每個(gè)帶有樣品的孔中加入適量的三卡因溶液對(duì)斑馬魚(yú)進(jìn)行麻醉，利用Imagepro-plus軟件統(tǒng)計(jì)各組斑馬魚(yú)胚胎表面的熒光點(diǎn)數(shù)量，再利用SPSS軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果與討論

2.1 DPPH·的清除試驗(yàn)

DPPH是一種穩(wěn)定的以氮為中心順磁化合物，并具有孤對(duì)電子，在波長(zhǎng)為517 nm處有最大吸收。當(dāng)抗氧化劑存在時(shí)，孤對(duì)電子配對(duì)成電子對(duì)，是自身紫色變成黃色，導(dǎo)致在最大光吸收波長(zhǎng)處的吸光值降低，其下降程度與自由基的清除程度呈線性關(guān)系，因此可以用分光光度計(jì)進(jìn)行定量測(cè)定，從而評(píng)價(jià)試驗(yàn)樣品的抗氧化能力[11]。石榴酒對(duì)DPPH自由基的清除作用見(jiàn)圖1。

圖1 石榴酒對(duì)DPPH自由基的清除作用Fig.1 DPPH radical scavenging activity of pomegranate wine

如圖1所示，石榴酒對(duì)DPPH自由基的清除作用隨著樣品溶液濃度的增加而增大。在用量為5 μL～20 μL時(shí)，石榴酒對(duì)DPPH自由基清除率從62.08%增大到92.95%，當(dāng)用量進(jìn)一步增加到40 μL時(shí)，石榴酒對(duì)DPPH自由基的清除率增幅不明顯，基本保持不變。對(duì)照組 VC在濃度為 0.2 μg/mL～1.0 μg/mL 時(shí)對(duì) DPPH自由基的清除率從86.23%增大到94.74%。由此可見(jiàn)，石榴酒對(duì)DPPH自由基具有一定的清除效果，用量達(dá)到一定量時(shí)與VC對(duì)DPPH自由基的清除效果相當(dāng)。

2.2 清除羥基自由基能力的測(cè)定

羥基自由基（·OH）是生物體內(nèi)活性氧代謝產(chǎn)生的物質(zhì)，是一種氧化性很強(qiáng)的自由基，能引發(fā)不飽和脂肪酸發(fā)生脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，使機(jī)體發(fā)生氧化損傷[12]。通過(guò)水楊酸法測(cè)定石榴酒對(duì)羥基自由基的清除能力，F(xiàn)enton反應(yīng)產(chǎn)生·OH，·OH氧化水楊酸得到2，3-二羥基苯甲酸，檢測(cè)其在510 nm處的吸光度來(lái)表示·OH的多少，·OH的量與吸光度呈正比[13]。石榴酒對(duì)·OH自由基的清除作用見(jiàn)圖2。

圖2 石榴酒對(duì)·OH自由基的清除作用Fig.2·OH radical scavenging activity of pomegranate wine

試驗(yàn)結(jié)果如圖2所示。在10 μL～320 μL用量范圍內(nèi)，石榴酒對(duì)·OH清除率隨用量增加而明顯增大，清除率從36.41%增加到82.76%，增幅為46.35%，在用量為240 μL時(shí)繼續(xù)增加用量，清除率基本不變，達(dá)到最大清除率為82.76%。VC樣液濃度在1.0 μg/mL時(shí)對(duì)羥基的清除率為71.94%，說(shuō)明石榴酒對(duì)羥基自由基有較好的清除作用。

2.3 清除超氧陰離子自由基能力的測(cè)定

O2-·是分子氧在生物體內(nèi)氧化還原反應(yīng)中產(chǎn)生的活性中間體，正常狀態(tài)下保持相對(duì)穩(wěn)定的動(dòng)態(tài)平衡，當(dāng)細(xì)胞受到外界刺激時(shí)會(huì)產(chǎn)生過(guò)量的O2-·自由，使細(xì)胞產(chǎn)生氧化應(yīng)激，引起機(jī)體病變[14]。運(yùn)用四甲基偶氮唑鹽還原法，鄰苯三酚自氧化產(chǎn)生O2-·，O2-·可氧化成四甲基偶氮唑鹽生成藍(lán)紫色的化合物，測(cè)其吸光度來(lái)測(cè)定石榴酒樣品對(duì)O2-·的清除作用，試驗(yàn)結(jié)果如圖3所示。

圖3 石榴酒對(duì)O2-·自由基的清除作用Fig.3 O2-·radical scavenging activity of pomegranate wine

由圖3可以看出，在20 μL～120 μL用量范圍內(nèi)，石榴酒對(duì)超氧陰離子自由基的清除率從59.62%增加到63.85%，增幅為4.23%，說(shuō)明石榴酒對(duì)O2-·有一定的清除作用，清除率在60%左右，相對(duì)VC對(duì)O2-·的清除作用較弱。

2.4 還原力試驗(yàn)

抗氧化劑通過(guò)自身的還原作用給出電子從而清除自由基，因而可通過(guò)一種物質(zhì)還原力的大小來(lái)反映這一物質(zhì)抗氧化能力。據(jù)研究，物質(zhì)的還原力越強(qiáng)，其抗氧化能力越強(qiáng)[15]。通過(guò)普魯士藍(lán)法來(lái)測(cè)定石榴酒的還原力，其原理是石榴酒將鐵氰化鉀[K3Fe（CN）6]還原成亞鐵氰化鉀[K4Fe（CN）6]，亞鐵氰化鉀再與Fe3+作用，生成亞鐵氰化鐵即普魯士藍(lán)，在700 nm波長(zhǎng)下測(cè)定其吸光度，來(lái)表示還原力的大小，吸光度值越大，表明石榴酒的還原力越強(qiáng)[16]。結(jié)果如圖4所示。

由圖 4可以看出，石榴酒用量在 40 μL～120 μL 范圍內(nèi)，吸光度隨石榴酒含量增加而增大，最高為0.81，VC溶液濃度在0.8 μg/mL時(shí)的吸光度為0.84，吸光度越大說(shuō)明還原力越大，因此表明石榴酒具有較強(qiáng)的還原力。

圖4 石榴酒的還原力大小Fig.4 Reducing capacity of pomegranate wine

2.5 斑馬魚(yú)抗氧化活性試驗(yàn)

運(yùn)用轉(zhuǎn)基因皮膚熒光斑馬魚(yú)做石榴酒體內(nèi)抗氧化試驗(yàn)，試驗(yàn)結(jié)果如表1所示，熒光圖片如圖5所示。

表1 石榴酒對(duì)皮膚熒光斑馬魚(yú)胚胎生成的影響Table 1 Effect of pomegranate wine on the skin fluorescent zebrafish embryo formation

圖5 石榴酒對(duì)斑馬魚(yú)的抗氧化活性的影響Fig.5 Effect of pomegranate wine on the skin fluorescent zebrafish embryo formation

其中，溶劑對(duì)照組熒光點(diǎn)數(shù)為（55.2±6.0）個(gè)，甲硝唑組熒光點(diǎn)數(shù)為（8.8±2.3）個(gè)，相對(duì)抗氧化能力/%=（加樣組熒光細(xì)胞數(shù)量－甲硝唑組熒光細(xì)胞數(shù)量）/（溶劑對(duì)照組熒光細(xì)胞數(shù)量－甲硝唑組熒光細(xì)胞數(shù)量）×100

由表1可見(jiàn)，斑馬魚(yú)的皮膚熒光點(diǎn)數(shù)最多的是溶劑對(duì)照組，當(dāng)加入甲硝唑后，絕大部分熒光點(diǎn)消失，結(jié)果如圖5中的B所示，再加入石榴酒樣品后，熒光點(diǎn)能夠再次更多的被觀察到，則說(shuō)明石榴酒樣品具有抗氧化活性，且根據(jù)熒光點(diǎn)個(gè)數(shù)恢復(fù)的多少，來(lái)判斷抗氧化性的強(qiáng)弱。

3 結(jié)論

自由基是指能獨(dú)立存在的，含有一個(gè)或多個(gè)不配對(duì)電子的原子、原子團(tuán)、離子或分子，本質(zhì)上具有高度活性和潛在的損傷性，廣泛存在于機(jī)體組織中。一定數(shù)量的自由基對(duì)人體是有益的，病毒侵入后，在白細(xì)胞的表面就會(huì)產(chǎn)生自由基，這些自由基可以作為一種強(qiáng)氧化劑來(lái)殺死病毒。但是當(dāng)自由基超過(guò)一定數(shù)量時(shí)，就會(huì)對(duì)人體造成損傷，利用抗氧化劑可以對(duì)多余的自由基進(jìn)行淬滅，維護(hù)機(jī)體健康。本文對(duì)石榴酒進(jìn)行抗氧化活性試驗(yàn)，研究發(fā)現(xiàn)石榴酒具有較好的抗氧化能力，樣品加入量在一定范圍內(nèi)對(duì)DPPH·、·OH和O2-·的清除率隨著加入量的增大而升高，有著明顯的量效關(guān)系，清除率最大分別為92.95%、82.76%和63.85%。在還原力試驗(yàn)中，吸光度最高為0.81，與VC相比相差不大，說(shuō)明石榴酒具有較好的還原力。

斑馬魚(yú)的魚(yú)皮缺乏角質(zhì)層，直接由活細(xì)胞組成最外層皮膚，當(dāng)遇到惡劣外界環(huán)境時(shí)角質(zhì)細(xì)胞會(huì)發(fā)生凋亡。本研究利用甲硝唑使皮膚細(xì)胞消融，然后再加入抗氧化物質(zhì)，減少了細(xì)胞毒性，使部分細(xì)胞恢復(fù)活性，一部分皮膚細(xì)胞的熒光重新得以表達(dá)，從而量化抗氧化物質(zhì)的抗氧化能力。在本試驗(yàn)中通過(guò)添加甲硝唑消除皮膚熒光點(diǎn)后，再添加石榴酒后，能夠重新在熒光顯微鏡下觀察到斑馬魚(yú)皮膚表面的熒光點(diǎn)，添加量為50 μL/mL時(shí)，相對(duì)抗氧化能力可達(dá)到75.4%，說(shuō)明石榴酒具有良好的抗氧化活性。本研究表明石榴酒有較好的抗氧化活性，為石榴酒的開(kāi)發(fā)利用提供了理論依據(jù)。

[1]馬齊,秦濤,王麗娥,等.石榴的營(yíng)養(yǎng)成分及應(yīng)用研究現(xiàn)狀[J].食品工業(yè)科技,2007(2):237-238

[2]李曉華,劉軍,邢軍.石榴果汁飲品的研制與開(kāi)發(fā)[J].新疆大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版),2002(4):480-482

[3]張憲宇.石榴酒發(fā)酵工藝初探[J].釀酒科技,1998(1):53-54

[4]郭長(zhǎng)江,徐靜,韋京豫,等.我國(guó)常見(jiàn)水果類黃酮物質(zhì)的含量[J].營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào),2008(2):130-135

[5]張廓玉,徐曉紅,劉美榮.優(yōu)質(zhì)果品高產(chǎn)農(nóng)諺問(wèn)答,柿子、石榴分冊(cè)[M].北京:科學(xué)技術(shù)文獻(xiàn)出版社,2009:23-24

[6]倪勤學(xué),霍艷榮,陸國(guó)權(quán).花色苷保健功能的研究進(jìn)展[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2010(35):20025-20028,20453

[7]Kalueff AV,Echevarria DJ,Homechaudhuri S,et al.Zebrafish neurobehavioral phenomics for aquatic neuropharmacology and toxicology research[J].Aquatic Toxicology,2016,170:297-309

[8]趙保路.自由基、營(yíng)養(yǎng)、天然抗氧化劑與衰老[J].生物物理學(xué)報(bào),2010(1):26-36

[9]李全國(guó),楚杰,陳錫強(qiáng),等.棗葉黃酮體外及皮膚熒光斑馬魚(yú)體內(nèi)抗氧化活性研究[J].食品工業(yè)科技,2014(5):58-61,65

[10]Westerfield M,Wegner J,Jegalian B G.Specific activation of mammalian Hox promoters in mosaic transgenic zebrafish[J].Genes Dev,1992,6(4):138-146

[11]熊雙麗,盧飛,史敏娟,等.DPPH自由基清除活性評(píng)價(jià)方法在抗氧化劑篩選中的研究進(jìn)展[J].食品工業(yè)科技,2012(8):380-383

[12]Sadeq H A,Amin I,Mohd Y M,et al.Prebiotics as functional foods:A review[J].Journal of Functional Foods,2013,5(4):1542-1553

[13]王振,張立敏,田陽(yáng).超氧陰離子自由基電化學(xué)分析的新進(jìn)展[J].分析化學(xué),2014(1):1-9

[14]張昊,任發(fā)政.羥基和超氧自由基的檢測(cè)研究進(jìn)展[J].光譜學(xué)與光譜析,2009(4):1093-1099

[15]Yen GC,Duh PD.Antioxidative properties of methanolic extracts from peanut hulls[J].Journal of the American Oil Chemists Society,1993,70(4):383-386

[16]Yen GC,Duh PD,Tsai HL.Antioxidant and pro-oxidant properties of ascorbic acid and gallic acid[J].Food Chemistry,2002,79(3):307-313

《糧食加工》2018年征訂啟事

《糧食加工》雜志創(chuàng)刊于1976年，1992年為中文核心期刊，被《中國(guó)知網(wǎng)》數(shù)據(jù)庫(kù)長(zhǎng)年收錄，并以其學(xué)術(shù)性與實(shí)用性結(jié)合、內(nèi)容詳實(shí)、信息量豐富、發(fā)行面廣、印刷精美，在全國(guó)糧食行業(yè)具有很大的影響力。刊物主要欄目有糧食經(jīng)濟(jì)論壇、小麥加工、稻米加工、玉米及小雜糧加工、糧食加工設(shè)備、糧食深加工、食品研究與開(kāi)發(fā)、糧食物流與倉(cāng)儲(chǔ)及糧情檢測(cè)分析等。

《糧食加工》為國(guó)內(nèi)外公開(kāi)發(fā)行，雙月刊（逢雙月1日出版），8元/期，全年定價(jià)：48元。國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)A4開(kāi)本，全國(guó)各地郵局均可訂閱。郵發(fā)代號(hào)：52-202，國(guó)外發(fā)行代號(hào)：BM2990。

地 址：西安市蓮湖區(qū)勞動(dòng)路138號(hào)《糧食加工》雜志社

聯(lián)系人：肖 鋒

電 話：029-88648175 傳 真：029-88631191

郵 編：710082

E-mail:xibu98@sina.com lsjg2004@126.com

網(wǎng) 址：Http://www.lsjg.cn

Research in the Antioxidant Activity of Pomegranate Wine in vitro and Zebrafish in vivo

ZHANG Hong-ya1，2，WANG Zhen-guo3，LIU Bang-gang3，CHU Jie2，*，LIU Ke-chun2，YANG gui-wen1，*
（1.Life Sciences Institute，Shandong Normal University，Jinan 250014，Shandong，China；2.Shandong Provincial Engineering Laboratory for Biological Testing Technology/Shandong Provincial Key Laboratory of Biosensors/Key Laboratory for Drug Screening Technology of Shandong Academy of Sciences，Institute of Biology，Shandong Academy of Sciences，Jinan 250014，Shandong，China；3.School of Medicine and Life Sciences，University of Jinan-Shandong Academy of Medicine Sciences，Jinan 250002，Shandong，China）

2017-02-21

10.3969/j.issn.1005-6521.2017.19.005

張洪亞（1992—），女（漢），在讀碩士研究生，生物工程專業(yè)。

*通信作者：楚杰（1965—），女（漢），研究員，主要從事微生物發(fā)酵方面的研究；楊桂文（1967—），男（漢），教授，碩士生導(dǎo)師，主要從事細(xì)胞生物學(xué)方面的研究。