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原花青素抑制小膠質(zhì)細(xì)胞活化緩解阿片藥誘導(dǎo)的痛覺過敏

2017-10-14 05:59盛安琪劉文濤陶學(xué)有張廣欽
中國現(xiàn)代藥物應(yīng)用 2017年19期
關(guān)鍵詞:阿片藥組嗎啡

張 艷 盛安琪 劉文濤 胡 亮 陶學(xué)有 張廣欽

原花青素抑制小膠質(zhì)細(xì)胞活化緩解阿片藥誘導(dǎo)的痛覺過敏

張 艷 盛安琪 劉文濤 胡 亮 陶學(xué)有 張廣欽

目的 探討原花青素(PC)對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞活化和阿片藥誘導(dǎo)的痛覺過敏(OIH)的影響及其分子機(jī)制。方法 采用甩尾法檢測(cè)OIH小鼠甩尾痛閾;免疫熒光法和Western blot法檢測(cè)小鼠脊髓水平小膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記分子(Iba1)表達(dá)水平。結(jié)果 將小鼠分為嗎啡組、嗎啡加PC給藥組(20、 40、 80 mg/kg)和對(duì)照組(給予等體積生理鹽水)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明, 小鼠OIH造模后, 基礎(chǔ)閾值由(9.35±0.48)s降至(5.47±0.39)s, 而對(duì)照組沒有明顯改變, 表示模型建立成功。提前15 min PC灌胃給藥能夠改善嗎啡引起的OIH。40 mg/kg給藥組灌胃給藥2 d后小鼠熱痛閾值與模型組相比, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05), 第2~5天改善效率分別為22.13 %、46.05%、33.50%、28.19%、44.70%。20、80 mg/kg給藥組也有一定程度改善作用,但效果不如40 mg/kg給藥組。采用免疫熒光技術(shù)和Western blot檢測(cè)小鼠脊髓中小膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記物Iba1的活化情況。免疫熒光結(jié)果表明, 與對(duì)照組相比, 模型組小鼠脊髓中Iba1明顯激活, 而PC(40 mg/kg)可以顯著抑制OIH小鼠脊髓中的Iba1的表達(dá)水平。Western blot法檢測(cè)Iba1得到結(jié)果相似。結(jié)論 PC可以通過抑制小膠質(zhì)細(xì)胞活化緩解OIH。

原花青素;阿片藥誘導(dǎo)的痛覺過敏;神經(jīng)炎癥;小膠質(zhì)細(xì)胞

嗎啡是臨床上常用的阿片類鎮(zhèn)痛藥物, 用于癌痛等頑固性疼痛的治療。但是, 短期大劑量應(yīng)用或者長(zhǎng)期應(yīng)用會(huì)導(dǎo)致機(jī)體對(duì)傷害性刺激的敏感性增高, 這種由阿片類藥物導(dǎo)致的痛覺敏感性增加稱為阿片藥誘導(dǎo)的痛覺過敏(opioid-induced hyperalgesia, OIH), 嚴(yán)重限制了阿片類藥物的使用[1-3]。目前,關(guān)于OIH的產(chǎn)生機(jī)制未完全闡明, 主要集中在中樞谷氨酸能系統(tǒng)活性增強(qiáng)、脊髓下行易化作用、內(nèi)源性神經(jīng)肽的作用等。而近期研究逐步開始聚焦脊髓膠質(zhì)細(xì)胞, 尤其是小膠質(zhì)細(xì)胞。小膠質(zhì)細(xì)胞激活介導(dǎo)的神經(jīng)炎癥在疼痛中至關(guān)重要[4-7]。研究指出, 嗎啡激活小膠質(zhì)細(xì)胞中NOD 樣受體蛋白3(NLRP3)炎癥小體, 促使炎癥因子(如白介素-1β、腫瘤壞死因子-α等)大量釋放, 這些炎癥因子作為中樞免疫信號(hào)介導(dǎo)嗎啡誘導(dǎo)的持續(xù)性痛覺敏化作用, 從而增加對(duì)傷害性刺激的敏感性[8-12]。原花青素(procyanidins, PC)是葡萄籽、藍(lán)莓、櫻桃等植物中廣泛存在的一種生物類黃酮, 具有抗氧化、抗炎、改善肥胖等作用。近期有研究發(fā)現(xiàn), PC可以通過抑制巨噬細(xì)胞活化從而改善急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎[3]。但其對(duì)于OIH的作用未見報(bào)道。本文擬用不同劑量的PC, 研究其對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞的活化和對(duì)OIH的影響并簡(jiǎn)要探討其分子機(jī)制?,F(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 藥物 PC(南京澤朗醫(yī)藥植提技術(shù)有限公司);嗎啡(沈陽第一制藥廠)。

1.2 動(dòng)物 30只健康雄性ICR小鼠, 體重18~22 g, 由江蘇省南京青龍山動(dòng)物繁殖場(chǎng)提供, 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物許可證號(hào):SYXK(蘇 )2016-0011。

1.3 儀器 熒光顯微鏡(Zeiss AX10);電泳儀(Bio-Rad);化學(xué)發(fā)光儀(ChemiDoc XRS+)。

1.4 方法

1.4.1 OIH模型小鼠的制備及行為學(xué)測(cè)定 皮下注射10 mg/kg嗎啡, 連續(xù)注射5 d, 2次/d 。以造模前1 d測(cè)得的小鼠熱痛閾值作為基礎(chǔ)痛閾。測(cè)量3次, 間隔10 min, 取平均值。以造模后熱痛閾值較基礎(chǔ)痛閾下降>20%者視為OIH模型成功。具體方法如下:將小鼠尾1.5~3.0 cm浸入恒溫水浴中(47±0.5)℃, 用秒表記錄鼠尾自浸入水中到出現(xiàn)甩尾動(dòng)作的時(shí)間, 為防止組織損傷, 若小鼠10 s未甩尾, 則記為10 s。

1.4.2 Western blot法檢測(cè)Iba1蛋白水平的表達(dá) 于第5天給藥后取小鼠脊髓L4~6節(jié)段;按一定比例加入裂解液, 處理樣品, 經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳, 轉(zhuǎn)移至PDVF膜上, 10%脫脂奶粉室溫封閉1.5 h, 加入一抗過夜, TBST洗后二抗孵育2 h,TBST洗后顯色。

1.4.3 免疫熒光檢測(cè)脊髓背角Iba1表達(dá) 于第5天給藥后0.5 h, 水合氯醛深麻下打開胸腔, 經(jīng)左心室插管依次灌注生理鹽水30 ml、4%多聚甲醛30 ml。取小鼠脊髓腰膨大部位經(jīng)4%多聚甲醛固定、40%蔗糖溶液脫水后, 進(jìn)行連續(xù)恒冷冰凍切片。將切片加入一抗過夜, 磷酸緩沖液(PBS)洗后加入熒光二抗孵育2 h, PBS洗后用50%甘油封片, 在熒光顯微鏡下觀察。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用GraphPad Prism6軟件數(shù)據(jù)處理。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差s)表示, 采用t檢驗(yàn)。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 OIH小鼠熱痛閾值的變化 水浴甩尾法測(cè)定小鼠熱痛閾值。小鼠分為五組, 嗎啡組、嗎啡加PC給藥組(20、40、80 mg/kg)和對(duì)照組(給予等體積生理鹽水)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,小鼠OIH造模后, 基礎(chǔ)閾值由(9.35±0.48)s降至(5.47±0.39)s,而對(duì)照組沒有明顯改變, 表示模型建立成功。提前15 min PC灌胃給藥能夠改善嗎啡引起的OIH。40 mg/kg給藥組灌胃給藥2 d后小鼠熱痛閾值與模型組相比, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P<0.05) , 第2~5天改善效率分別為22.13%、46.05%、33.50%、28.19%、44.70%。20、80 mg/kg給藥組也有一定程度改善作用, 但效果不如40 mg/kg給藥組。見圖1。

2.2 PC對(duì)OIH小鼠脊髓小膠質(zhì)細(xì)胞活化的影響 采用免疫熒光技術(shù)和Western blot檢測(cè)小鼠脊髓中小膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記物Iba1的活化情況。免疫熒光結(jié)果表明, 與對(duì)照組相比, 模型組小鼠脊髓中Iba1明顯激活, 而PC(40 mg/kg)可以顯著抑制OIH小鼠脊髓中的Iba1的表達(dá)水平。見圖2。Western blot法檢測(cè)Iba1也得到相似結(jié)果。見圖3。

圖1 連續(xù)PC灌胃給藥對(duì)小鼠熱痛閾值的影響

圖2 免疫熒光法檢測(cè)PC對(duì)小鼠脊髓背角Iba1的影響

圖3 Western blot法檢測(cè)PC對(duì)小鼠脊髓背角Iba1的影響

3 討論

現(xiàn)有的改善OIH的藥物主要有N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受體拮抗劑、環(huán)氧化酶-2抑制劑、鈣離子通道阻滯劑、α2受體阻斷劑等[13-17]。但這些都不能徹底改善OIH,并且具有一定的副作用, 給患者帶來沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)和心理壓力[18]。而本實(shí)驗(yàn)中使用的PC最高劑量為80 mg/kg, 等效人體劑量?jī)H6.66 mg/kg, 抗炎效果佳, 安全性好, 無疑具有巨大的臨床應(yīng)用前景。

研究發(fā)現(xiàn)炎癥因素在嗎啡耐受中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用[19]。嗎啡激活神經(jīng)突觸后膜受體, 同時(shí)可以結(jié)合到小膠質(zhì)細(xì)胞表面toll樣受體4的MD-2亞基, 激活小膠質(zhì)細(xì)胞, 進(jìn)而釋放大量促炎因子, 如炎癥因子白介素-1β、白介素-6、腫瘤壞死因子-α[20-22]。這些炎癥因子一方面激活鄰近的膠質(zhì)細(xì)胞, 誘發(fā)胞膜表面更多嘌呤能P2X4、P2X7受體、toll樣受體4等表達(dá)增加;另一方面激活鄰近的神經(jīng)元上相應(yīng)受體, 進(jìn)一步促進(jìn)NMDA受體的激活, 促進(jìn)鈣離子內(nèi)流, 導(dǎo)致神經(jīng)元異常性興奮, 拮抗嗎啡的鎮(zhèn)痛作用[23]。實(shí)驗(yàn)室前期工作已經(jīng)發(fā)現(xiàn), PC可以通過抑制小膠質(zhì)細(xì)胞激活來改善嗎啡耐受[24], 但是PC對(duì)于OIH的影響尚未報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn), PC能抑制嗎啡引起的脊髓背角小膠質(zhì)細(xì)胞的活化, 顯著改善阿片藥物導(dǎo)致的OIH。Weng 等[25]應(yīng)用半胱天冬酶抑制劑可以通過抑制小膠質(zhì)細(xì)胞活化來改善嗎啡耐受以及OIH癥狀。本文研究與上述研究結(jié)果一致。此外, PC可以通過抑制p38 MAPK緩解脂多糖誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng), 而p38 MAPK是主要表達(dá)在小膠質(zhì)細(xì)胞中的MAPK家族成員。

綜上所述, PC可能通過抑制小膠質(zhì)細(xì)胞活化, 減輕神經(jīng)炎癥反應(yīng), 從而改善嗎啡導(dǎo)致的OIH。目前, PC主要功效是抗氧化、抗過敏等。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)PC可以抑制小鼠OIH的產(chǎn)生, 并對(duì)其可能的機(jī)制, 即抑制小膠質(zhì)細(xì)胞活化進(jìn)行了考察。研究成果為將來臨床上應(yīng)用PC治療OIH提供理論依據(jù), 并為阿片類鎮(zhèn)痛藥物的安全應(yīng)用提供新的思路。

[1] Roeckel LA, Le CG, Gavériaux-Ruff C, et al.Opioid-induced hyperalgesia: Cellular and molecular mechanisms.Neuroscience,2016(338):160-182.

[2] Grace PM, Strand KA, Galer EL, et al.Morphine paradoxically prolongs neuropathic pain in rats by amplifying spinal NLRP3 inflammasome activation.Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America, 2016, 113(24):E3441.

[3] Liu HJ, Pan XX, Liu BQ, et al.Grape seed-derived procyanidins alleviate gout pain via NLRP3 inflammasome suppression.Journal of Neuroinflammation, 2017, 14(1):74.

[4] Bagchi D, Bagchi M, SjS, et al.Cellular protection with proanthocyanidins derived from grape seeds.Annals of the New York Academy of Sciences, 2002, 957(1):260-270.

[5] Gu L, Kelm MA, Hammerstone JF, et al.Concentrations of proanthocyanidins in common foods and estimations of normal consumption.Journal of Nutrition, 2004, 134(3):613.

[6] Santosbuelga C, Scalbert A.Proanthocyanidins and tannin-like compounds--nature, occurrence, dietary intake and effects on nutrition and health.Journal of the Science of Food & Agriculture,2000, 80(7):1094-1117.

[7] 崔介君, 孫培龍, 馬新.原花青素的研究進(jìn)展.食品科技,2003(2):92-95.

[8] 凌智群, 張曉輝, 謝筆鈞,等.原花青素的藥理學(xué)研究進(jìn)展.中國藥理學(xué)通報(bào), 2002, 18(1):9-12.

[9] 余瑩, 粟武, 魏東芝.原花青素體外清除自由基活性的研究.華東理工大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版), 2002, 28(3):318-320.

[10] 國植, 徐莉.原花青素:具有廣闊發(fā)展前景的植物藥.現(xiàn)代藥物與臨床, 1996(5):196-204.

[11] 萬本屹, 李宏, 董海洲.葡萄籽原花青素提取及其應(yīng)用研究進(jìn)展.糧食與油脂, 2002(2):43-45.

[12] 呂麗爽, 曹棟.脫脂葡萄籽中低聚原花青素的提取.食品與生物技術(shù)學(xué)報(bào), 2001, 20(2):208-210.

[13] 趙超英, 姚小曼.葡萄籽提取物原花青素的營養(yǎng)保健功能(綜述).中國食品衛(wèi)生雜志, 2000, 12(6):38-41.

[14] 李春陽, 許時(shí)嬰, 王璋.DPPH法測(cè)定葡萄籽原花青素清除自由基的能力.食品與生物技術(shù)學(xué)報(bào), 2006, 25(2):102-106.

[15] 萬本屹, 董海洲, 劉傳富.原花青素及其應(yīng)用.中國食物與營養(yǎng), 2001(6):15-16.

[16] 趙艷, 吳坤.原花青素生物學(xué)作用研究進(jìn)展.中國公共衛(wèi)生,2006, 22(1):110-111.

[17] 汪靜.星形膠質(zhì)細(xì)胞在福爾馬林誘導(dǎo)的大鼠炎性持續(xù)性痛覺過敏中的作用.蘭州大學(xué), 2012.

[18] 劉獻(xiàn)文, 劉忠, 張宗旺,等.小膠質(zhì)細(xì)胞參與尼古丁戒斷切口痛大鼠術(shù)后痛覺過敏的研究.國際麻醉學(xué)與復(fù)蘇雜志, 2014,35(4):331-335.

[19] 姜艷華, 王秋石, 馬虹.己酮可可堿通過抑制小膠質(zhì)細(xì)胞激活減輕大鼠痛覺超敏和痛覺過敏.中國新藥雜志, 2008, 17(20):1770-1773.

[20] 成浩, 楊建平, 張艷兵,等.鞘內(nèi)注射米諾環(huán)素抑制脊髓小膠質(zhì)細(xì)胞激活減輕炎性痛覺過敏.蘇州大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版), 2007,27(1):14-16.

[21] 于虹.鎮(zhèn)靜藥咪達(dá)唑侖對(duì)鼠膠質(zhì)細(xì)胞激活及阿片耐受的影響和機(jī)制研究.華北理工大學(xué), 2016.

[22] Dixon RA, Xie DY, Sharma SB.Proanthocyanidins: A Final Frontier in Flavonoid Research? New Phytologist, 2005, 165(1):9-28.

[23] Parsadaniantz SM, Rivat C, Rostène W, et al.Opioid and chemokine receptor crosstalk: a promising target for pain therapy? Nature Reviews Neuroscience, 2015, 16(2):69.

[24] Cai Y, Pan YB, Jiang L, et al.Procyanidins alleviates morphine tolerance by inhibiting activation of NLRP3 inflammasome in microglia.Journal of Neuroinflammation, 2016, 13(1):53.

[25] Weng Z, Lin Y, Zhang J, et al.Caspase inhibitors may attenuate opioid-induced hyperalgesia and tolerance via inhibiting microglial activation and neuroinflammation.Iranian Journal of Medical Hypotheses & Ideas, 2013, 7(2):31-34.

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2017.19.110

2017-08-17]

江蘇省基礎(chǔ)研究計(jì)劃(自然科學(xué)基金)(項(xiàng)目編號(hào):BK20161033)

211198 中國藥科大學(xué)/臨床藥學(xué)教研室(張艷 盛安琪 張廣欽);南京醫(yī)科大學(xué)/江蘇省神經(jīng)退行性疾病重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室(胡亮 陶學(xué)有)

張廣欽

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