祖思佳，倪孟祥

(中國藥科大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，江蘇 南京 210009)

無花果多糖脫色工藝研究

祖思佳，倪孟祥*

(中國藥科大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，江蘇 南京 210009)

采用大孔吸附樹脂優(yōu)化無花果多糖的脫色工藝。以無花果干果為原料，熱水浸提得無花果多糖粗提物，經(jīng)Sevage試劑去蛋白、乙醇沉淀后凍干得粗多糖粉末。以脫色率和多糖保留率為考察指標(biāo)，篩選適合無花果多糖脫色的最優(yōu)樹脂和最佳的脫色工藝條件。結(jié)果表明，無花果多糖脫色的最優(yōu)樹脂為LSD-296，最佳脫色工藝條件為：樹脂用量2.0 g、多糖溶液濃度4 mg·mL-1、pH值6、脫色溫度40 ℃，為無花果多糖進一步分離純化奠定了基礎(chǔ)。

無花果多糖；脫色工藝；大孔樹脂

Abstract：We optimized the decoloring process of the polysaccharide fromFicuscaricaL.by macroporous resin.Using the dry fruit ofFicuscaricaL.as a raw material，we prepared the crude polysaccharide fromFicuscaricaL.by hot water extraction,and obtained crude polysaccharide powder using freeze-dry method after protein removal by Sevage reagent and ethanol precipitation.Using decolorization rate and polysaccharide retention rate as indexes,we screened the optimal resin and the optimal conditions of decoloring process as follows: choosing LSD-296 as the optimal resin，the dosage of resin of 2.0 g，the concentration of polysaccharide solution of 4 mg·mL-1,pH value of 6，and the decoloring temperature of 40 ℃.This study provides the basis for the separation and purification of polysaccharide fromFicuscaricaL..

Keywords：polysaccharide fromFicuscaricaL.;decoloring process;macroporous resin

無花果(FicuscaricaL.)，也叫阿驲、菩提圣果，屬于桑科榕屬[1]，具有健胃清腸、消腫解毒、降壓輕瀉、助消化等藥用價值[2]。無花果多糖是無花果的重要活性成分之一，具有抗氧化、抗腫瘤及免疫調(diào)節(jié)的功能[3]。目前,國內(nèi)外對無花果多糖的研究主要集中于抗腫瘤、鎮(zhèn)痛、抗氧化等生物活性[4]。水提醇沉所得的無花果多糖含有大量色素，給進一步的分離純化帶來不利的影響，嚴(yán)重制約著無花果多糖的定性定量分析以及生理活性的研究，因此，對無花果多糖的脫色是無花果研究中不可忽視的環(huán)節(jié)。

作者采用大孔吸附樹脂脫色法[5]，對無花果多糖進行脫色，以無花果多糖的脫色率及多糖保留率為考察指標(biāo)，篩選了適合無花果多糖的最優(yōu)樹脂和脫色工藝條件。

1 實驗

1.1 材料、試劑及儀器

無花果，揚州地區(qū)市售。

無水乙醇、硫酸、苯酚、氯仿、正丁醇等試劑均為國產(chǎn)分析純。

SL-N202型電子天平，上海民橋精密科學(xué)儀器有限公司；ZHWY-211B型恒溫?fù)u床，上海智城分析儀器制造有限公司；RE52CS型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，上海亞榮生化儀器廠；SPECTROPHOTOMETER型烘箱，上海?，攲嶒炘O(shè)備有限公司；BS110S型電子分析天平,Sartorius公司；TGL-16B型離心機，上海安亭科學(xué)儀器廠；SHB-Ⅲ型循環(huán)水式多用真空泵，鄭州長城科工貿(mào)有限公司；UV-110型紫外分光光度計，MAPADA公司。

1.2 方法

1.2.1 無花果粗多糖的制備[6-7]

無花果干果→粉碎過40目篩→氯仿回流去脂→沸水浸提→過濾濃縮→除蛋白→醇沉→離心→凍干→粗多糖。

1.2.2 大孔吸附樹脂的預(yù)處理[8]

分別將DM130、D3520、D201、H103、D101、LSA-21、LX-50、LSD-296、D4020、XDA-6等10種大孔吸附樹脂浸泡于95%乙醇3 h，蒸餾水清洗至無醇味；5%鹽酸溶液浸泡3 h，蒸餾水洗至中性；5%NaOH溶液浸泡3 h，蒸餾水洗至中性；重復(fù)3次，待用。

1.2.3 大孔吸附樹脂的篩選

取預(yù)處理過的10種大孔吸附樹脂各2 g置于50 mL三角瓶中，加入15 mL濃度為4 mg·mL-1的無花果多糖水溶液，封口后于搖床中振蕩，轉(zhuǎn)速為100 r·min-1，振搖12 h，充分吸附后測定脫色率和多糖保留率[9]。脫色率是依據(jù)多糖內(nèi)色素在295 nm處有最大吸收值，多糖保留率是依據(jù)硫酸苯酚法[10]產(chǎn)生顏色反應(yīng)在490 nm處有最大吸收值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線后求得。

脫色率及多糖保留率按下式計算[11-12]：

選取脫色率和多糖保留率較高的2種樹脂進行靜態(tài)吸附實驗，即每隔1 h測定脫色率和多糖保留率。從中選取更快達(dá)到吸附平衡且脫色率高的樹脂。

1.2.4 脫色工藝條件的優(yōu)化

1.2.4.1 樹脂用量對脫色率和多糖保留率的影響

精確稱取樹脂0.2 g、0.5 g、1.0 g、1.5 g、2.0 g、3.0 g、4.0 g、5.0 g各3份于三角瓶中，加入15 mL濃度為4 mg·mL-1的無花果多糖溶液,在脫色時間3 h、脫色溫度20 ℃和pH值6的條件下，考察樹脂用量的影響。

1.2.4.2 多糖溶液濃度對脫色率和多糖保留率的影響

分別配制濃度(mg·mL-1)為1、2、4、6、8的無花果多糖溶液，在脫色時間3 h、脫色溫度20 ℃和pH值6的條件下，考察多糖溶液濃度的影響。

1.2.4.3 pH值對脫色率和多糖保留率的影響

精確量取15 mL濃度為4 mg·mL-1的無花果多糖溶液,在脫色時間3 h、脫色溫度20 ℃和pH值分別為1、2、4、6、8、10、12的條件下，考察pH值的影響。

1.2.4.4 脫色溫度對脫色率和多糖保留率的影響

精確量取15 mL濃度為4 mg·mL-1的無花果多糖溶液,在脫色時間3 h、pH值6、脫色溫度分別為20 ℃、30 ℃、40 ℃、50 ℃、60℃的條件下，考察脫色溫度的影響。

2 結(jié)果與討論

2.1 大孔吸附樹脂的篩選(圖1)

圖1 10種大孔樹脂吸附實驗結(jié)果Fig.1 The adsorption test results of ten macroporous resins

由圖1可知，D101與LSD-296的脫色率和多糖保留率較好，故選D101與LSD-296進行靜態(tài)吸附實驗。

2.2 2種大孔吸附樹脂的靜態(tài)吸附實驗結(jié)果(圖2)

圖2 D101和LSD-296在不同時間下的脫色率和多糖保留率Fig.2 The decolorization rates and polysaccharide retention rates of resins D101 and LSD-296 at different time

由圖2可知，LSD-296能更快達(dá)到吸附平衡且脫色效果更好，吸附3 h后，脫色率幾乎不再變化，故最優(yōu)樹脂選LSD-296，吸附時間為3 h。

2.3 樹脂用量的影響(圖3)

圖3 樹脂用量的影響Fig.3 The effect of resin dosage

由圖3可知，樹脂用量為2.0 g時，脫色率最大且多糖保留率較高，故選樹脂用量為2.0 g。

2.4 多糖溶液濃度的影響(圖4)

圖4 多糖溶液濃度的影響Fig.4 The effect of polysaccharide solution concentration

由圖4可知，多糖溶液濃度為4 mg·mL-1時,脫色率、多糖保留率均達(dá)到最大，故選多糖溶液濃度為4 mg·mL-1。

2.5 pH值的影響(圖5)

圖5 pH值的影響Fig.5 The effect of pH value

由圖5可知，pH值為6時，脫色率較高且多糖保留率最大，故選pH值為6。

2.6 脫色溫度的影響(圖6)

圖6 脫色溫度的影響Fig.6 The effect of decoloring temperature

由圖6可知，脫色溫度為40 ℃時，脫色率和多糖保留率均達(dá)到最大，故選脫色溫度為40 ℃。

3 結(jié)論

采用大孔吸附樹脂對無花果粗多糖進行脫色，確定最優(yōu)樹脂為LSD-296，最佳脫色工藝條件為：樹脂用量2.0 g、多糖溶液濃度4 mg·mL-1、pH值6、脫色溫度40 ℃。該實驗僅為脫色工藝的初步研究，影響無花果多糖脫色工藝的因素還有很多，如轉(zhuǎn)速、脫色時間等，其它因素及相互間的影響等還需進一步研究。

[1] VEBERIC R,COLARIC M,STAMPAR F.Phenolic acids and flavonoids of fig fruit (FicuscaricaL.) in the northern Mediterranean region[J].Food Chemistry,2008,106(1):153-157.

[2] 吳亞林,黃靜,潘遠(yuǎn)江.無花果多糖的分離、純化和鑒定[J].浙江大學(xué)學(xué)報(理學(xué)版),2004,31(2):177-179.

[3] 潘悠優(yōu),花佩,王允祥，等.無花果多糖提取、分離、純化及生物活性的研究進展[J].食品科學(xué),2016,37(17):289-295.

[4] 邱松山,姜翠翠,譚振鐘，等.無花果粗多糖體外抗氧化能力初步研究[J].時珍國醫(yī)國藥,2011,22(7):1659-1660.

[5] 王維香,王曉君,黃瀟,等.川芎多糖脫色方法比較[J].離子交換與吸附,2010,26(1):74-82.

[6] 陳運江.大孔徑樹脂分離純化無花果多糖工藝研究[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué),2010(2):320-321.

[7] 王玲,籍保平.龍眼粗多糖提取的影響因素及工藝的研究[J].現(xiàn)代食品科技,2006,22(3):53-55.

[8] 孫麗娜,范英兵,胡冬慧,等.大孔吸附樹脂對藍(lán)莓多糖的脫色研究[J].黑龍江大學(xué)工程學(xué)報,2016,7(1):29-34.

[9] 賈永鋒,曹致芳,張羅修.無花果對免疫抑制小鼠的溶血素及淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化的影響[J].中藥藥理與臨床,1997,13(4):41-42.

[10] 郁瑋,楊小明,劉偉民,等.苯酚-硫酸法測定無花果中多糖含量的研究[J].食品科技,2009,34(10):256-258.

[11] 呂建平.連翹葉片多糖的提取、分離純化及抗氧化性研究[D].臨汾：山西師范大學(xué)，2014.

[12] 易陽,張名位,廖森泰,等.龍眼多糖樹脂脫色工藝優(yōu)化[J].農(nóng)業(yè)機械學(xué)報,2010,41(8):146-150.

DecoloringProcessofPolysaccharidefromFicuscaricaL.

ZU Si-jia，NI Meng-xiang*

(SchoolofLifeScienceandTechnology,ChinaPharmaceuticalUniversity,Nanjing210009,China)

R284 TQ028.1

A

1672-5425(2017)09-0051-03

2017-04-11

祖思佳(1988-)，女，吉林松原人，碩士研究生，研究方向：生物學(xué)，E-mail：1510068942@qq.com；通訊作者：倪孟祥，副教授，E-mail：nimx_2000@aliyun.com。

10.3969/j.issn.1672-5425.2017.09.010

祖思佳，倪孟祥.無花果多糖脫色工藝研究[J].化學(xué)與生物工程，2017，34(9)：51-53.