王玉超，李保全＊ ，胡東方，古金元，陳同煜，彭 濤，王文武，馬梓承，孟凡亮，劉照虎，劉思當(dāng)，肖一紅

(山東農(nóng)業(yè)大學(xué)，山東省動(dòng)物生物工程與疾病防治重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，山東 泰安 271000）

某規(guī)?；i場(chǎng)三種重大疫病血清抗體檢測(cè)結(jié)果分析

王玉超，李保全＊ ，胡東方，古金元，陳同煜，彭 濤，王文武，馬梓承，孟凡亮，劉照虎，劉思當(dāng)，肖一紅

(山東農(nóng)業(yè)大學(xué)，山東省動(dòng)物生物工程與疾病防治重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，山東 泰安 271000）

河北省某規(guī)模化豬場(chǎng)為了解豬重大疫病疫苗免疫效果，實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)其群體免疫狀況，優(yōu)化疫苗免疫程序，及時(shí)發(fā)現(xiàn)存在問(wèn)題及潛在風(fēng)險(xiǎn)，應(yīng)用韓國(guó)金諾(MEDIAN)公司豬瘟、豬藍(lán)耳病、豬偽狂犬病gE抗體檢測(cè)試劑盒，對(duì)該豬場(chǎng)送檢的71份血清進(jìn)行抗體檢測(cè)。結(jié)果顯示，豬瘟、豬藍(lán)耳病、豬偽狂犬病gE抗體總體陽(yáng)性率分別為49.30%、52.11%和4.22%?；跈z測(cè)結(jié)果，對(duì)該豬場(chǎng)免疫狀況進(jìn)行了分析，并提出來(lái)免疫整改建議，為該場(chǎng)的豬病免疫程序制定提供了科學(xué)指導(dǎo)。

豬重大疫病；抗體檢測(cè)；免疫程序；豬病防控

養(yǎng)豬生產(chǎn)中，豬瘟、豬藍(lán)耳病、豬偽狂犬病等是當(dāng)前危害養(yǎng)豬業(yè)的重要疾病。就目前我國(guó)的實(shí)際情況，免疫仍是豬場(chǎng)疫病防控的主要手段，而免疫效果存在眾多影響因素，因此抗體的檢測(cè)顯得尤為重要。適時(shí)進(jìn)行抗體檢測(cè)，可以評(píng)估豬群的免疫狀態(tài)與疫苗免疫效果，為疫苗的選擇、免疫程序的制定提供科學(xué)依據(jù)，從而更好地指導(dǎo)豬病防控的臨床實(shí)踐工作。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 樣品采集與處理 2017年2月中旬，于河北地區(qū)某存欄生產(chǎn)母豬約800頭規(guī)模豬場(chǎng)通過(guò)前腔靜脈采集血樣71份，凝血處理，分離血清后置于-20 ℃冰箱凍存待檢，采樣情況見(jiàn)表1。

表1 采樣信息

1.1.2 主要試劑及儀器

MEDIAN公司豬瘟病毒（CSFV）抗體檢測(cè)試劑盒、豬藍(lán)耳病病毒（PRRSV）抗體檢測(cè)試劑盒、豬偽狂犬病病毒gE（PRVgE）抗體檢測(cè)試劑盒，Eppendorf移液器，酶標(biāo)儀。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 檢測(cè)方法 嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書操作。

1.2.2 結(jié)果判定 CSFV：阻斷率≥40.0%為陽(yáng)性，阻斷率＜40.0%為陰性；PRRSV：S/P 值≥0.4為陽(yáng)性，S/P值＜0.4為陰性；PRVgE：S/N＞0.6為陰性，S/N≤0.6為陽(yáng)性。若豬場(chǎng)使用偽狂犬病基因缺失疫苗，一旦檢出偽狂犬病 gE 陽(yáng)性則說(shuō)明有偽狂犬病野毒感染。

2 結(jié)果與分析

2.1 抗體檢測(cè)結(jié)果

經(jīng)檢測(cè)，豬瘟、豬藍(lán)耳病和豬偽狂犬病gE抗體整體陽(yáng)性率分別為49.30%、52.11%和4.22%，豬偽狂犬病gE抗體檢測(cè)存在3份陽(yáng)性血清，匯總結(jié)果見(jiàn)表 2。

表2 檢測(cè)結(jié)果

2.2 豬瘟抗體檢測(cè)結(jié)果及分析

農(nóng)業(yè)部印發(fā)的《2013 年國(guó)家動(dòng)物疫病強(qiáng)制免疫計(jì)劃》指示，存欄豬的豬瘟抗體陽(yáng)性率大于 70%為免疫合格。母豬作為豬場(chǎng)的核心生產(chǎn)豬群，理論上其豬瘟抗體陽(yáng)性率應(yīng)為100%，但出乎意料的是在本次檢測(cè)中，母豬豬瘟抗體陽(yáng)性率僅有50%，有一半的母豬（14頭）抗體不合格，懷疑存在免疫操作或者疫苗稀釋保存問(wèn)題，也可能豬群帶毒率較高，存在免疫耐受。產(chǎn)房仔豬抗體平均值25.64%，離散度91.72%，陽(yáng)性率23.08%，更是遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于豬瘟抗體合格的標(biāo)準(zhǔn)。因?yàn)樵搱?chǎng)母豬豬瘟抗體陽(yáng)性率只有50%，產(chǎn)房仔豬從母體獲得的豬瘟母源抗體水平自然不會(huì)很高，仔豬得不到母源抗體的有效保護(hù)。保育豬的豬瘟抗體平均值、離散度和陽(yáng)性率分別為35.56%、66.36%和41.67%，說(shuō)明一免之后保育豬的豬瘟抗體水平有了一定程度的提升，但該水平的豬瘟抗體仍不足以讓保育豬獲得有效保護(hù)。育肥豬的豬瘟抗體平均值、離散度和陽(yáng)性率分別為59.26%、44.94%和72.22%，其豬瘟抗體水平基本上符合強(qiáng)制免疫規(guī)定的合格率，說(shuō)明二免后的豬瘟抗體達(dá)到了抵抗野毒感染的水平?？偟膩?lái)說(shuō)，該場(chǎng)豬瘟抗體整體陽(yáng)性率僅有49.30%，遠(yuǎn)低于強(qiáng)制免疫規(guī)定的合格率，僅有育肥豬的豬瘟抗體陽(yáng)性率達(dá)到70%以上，其他豬群均為易感豬群，存在極大的豬瘟感染風(fēng)險(xiǎn)。豬瘟抗體檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 豬瘟抗體檢測(cè)結(jié)果

2.3 豬藍(lán)耳病病毒抗體檢測(cè)結(jié)果及分析

豬藍(lán)耳病免疫良好的豬場(chǎng)，抗體陽(yáng)性率在70%～80%，離散度在25%左右，S/P值在0.8～1.2之間，并且保證S/P值大于2.5的豬只占豬群5%以下。該場(chǎng)產(chǎn)房仔豬、保育豬、育肥豬和母豬的豬藍(lán)耳病抗體陽(yáng)性率分別為7.69%、25.00%、94.44%和57.14%，豬場(chǎng)一直沒(méi)有免疫過(guò)豬藍(lán)耳病疫苗，但是抗體檢測(cè)陽(yáng)性，說(shuō)明已有部分豬只感染過(guò)豬藍(lán)耳病病毒。從產(chǎn)房仔豬到保育豬再到育肥豬，豬藍(lán)耳病抗體陽(yáng)性率在明顯升高，且S/P值＞2.5的比例從無(wú)到有，懷疑感染點(diǎn)應(yīng)該在保育豬時(shí)期，并之后在豬群中持續(xù)感染，并且保育豬和育肥豬豬藍(lán)耳病毒抗體S/P值＞2.5比例均大于5%，需要密切關(guān)注豬群的狀態(tài)，比如，保育豬有無(wú)發(fā)熱、喘、逐步消瘦的情況，特別是育肥豬有無(wú)突然死亡，部分死亡豬只耳、口鼻、尾巴發(fā)紫的現(xiàn)象，一旦發(fā)現(xiàn)要及時(shí)送診，以確定有無(wú)豬藍(lán)耳病發(fā)生。豬藍(lán)耳病病毒抗體檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 豬藍(lán)耳病病毒抗體檢測(cè)結(jié)果

2.4 豬偽狂犬病gE抗體檢測(cè)結(jié)果及分析

豬偽狂犬gE抗體一旦檢測(cè)出陽(yáng)性，就說(shuō)明有野毒感染。從檢測(cè)結(jié)果中可以看出，產(chǎn)房仔豬、保育豬和育肥豬中各有一例豬偽狂犬gE抗體陽(yáng)性，說(shuō)明其感染了偽狂犬野毒。豬偽狂犬病毒gE抗體檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表5。

表5 豬偽狂犬病毒gE抗體檢測(cè)結(jié)果

3 討論與建議

通過(guò)檢測(cè)數(shù)據(jù)的分析發(fā)現(xiàn)，該豬群重大疫病的免疫狀況不容樂(lè)觀，存在許多問(wèn)題。第一，母豬群豬瘟病毒抗體水平遠(yuǎn)低于國(guó)家強(qiáng)制免疫計(jì)劃的要求，存在較大的感染壓力，并且不能夠通過(guò)初乳給仔豬提供足夠的保護(hù)力，仔豬也存在較大的豬瘟感染風(fēng)險(xiǎn)；第二，豬群沒(méi)有免疫豬藍(lán)耳病毒疫苗，但豬場(chǎng)各豬群均為豬藍(lán)耳病抗體陽(yáng)性，育肥豬豬藍(lán)耳病抗體陽(yáng)性率高達(dá)94.44%，且保育和育肥豬群S/P異常值比例大，懷疑豬藍(lán)耳病毒已經(jīng)在豬群中開(kāi)始蔓延；第三，該場(chǎng)所檢測(cè)的母豬的偽狂犬野毒抗體均為陰性，在目前偽狂犬野毒的普遍感染情況下，說(shuō)明該豬場(chǎng)做過(guò)偽狂犬的凈化，并且母豬群仍保持陰性，但是保育豬和育肥豬群中各存在一例偽狂犬野毒抗體陽(yáng)性，說(shuō)明曾經(jīng)感染過(guò)偽狂犬野毒。

根據(jù)以上發(fā)現(xiàn)的問(wèn)題，建議豬場(chǎng)采取以下措施：第一，由于母豬群豬瘟病毒抗體水平異常偏低，建議嚴(yán)格檢查疫苗保存、稀釋及免疫操作是否存在問(wèn)題，然后全群母豬立即補(bǔ)免一次豬瘟疫苗，一個(gè)月之后重新做一次抗體檢測(cè)，注意觀察母豬抗體水平是否上升，抗體沒(méi)有上升的母豬應(yīng)懷疑是否存在免疫抑制，或存在免疫耐受；第二，豬群存在豬藍(lán)耳病病毒感染，并且異常S/P值較高，豬群可能存在低致病毒株感染，應(yīng)時(shí)刻注意豬群狀態(tài)，可以嘗試豬群免疫經(jīng)典毒株豬藍(lán)耳病疫苗。第三，保育豬和育肥豬有個(gè)別偽狂犬野毒感染的情況，由于偽狂犬野毒抗體可以通過(guò)母豬初乳傳給哺乳仔豬，并能夠存在10～14周，建議豬場(chǎng)查找偽狂犬野毒抗體呈陽(yáng)性仔豬的母豬，采該母豬血液進(jìn)行偽狂犬野毒抗體檢測(cè)，如果陽(yáng)性，建議淘汰，并加強(qiáng)生物安全措施，以防病毒在豬群中蔓延。

2017-05-21）

本研究由國(guó)家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目“豬重要疫病免疫防控新技術(shù)研究”子課題“規(guī)?；i場(chǎng)科學(xué)合理的免疫程序的研究（2017YFD0500605）”支持；山東省“雙一流”獎(jiǎng)補(bǔ)資助。

李保全