童東，魏志成，左芳，王麗，羅煜，孟憲麗，曾勇

·藥理毒理·

沙棘提取物一般藥理學(xué)實驗研究

童東，魏志成，左芳，王麗，羅煜，孟憲麗，曾勇

目的:為探討沙棘提取物的安全性，觀察沙棘提取物的一般藥理作用，以供臨床用藥參考。方法:觀察沙棘提取物對家犬血壓、呼吸頻率、呼吸振幅和心電圖標(biāo)準(zhǔn)Ⅱ?qū)?lián)的影響,對小鼠自發(fā)活動的影響，對戊巴比妥鈉閾劑量致小鼠睡眠時間的影響，對戊巴比妥鈉閾下劑量致小鼠催眠有無明顯協(xié)同作用，對小鼠的轉(zhuǎn)棒運動有無明顯的影響。結(jié)果: 沙棘提取物在155 mg(原料藥).kg-1體重給藥劑量內(nèi)，對家犬心血管系統(tǒng)和呼吸系統(tǒng)均無明顯影響；在754mg(原料藥).kg-1體重給藥劑量范圍內(nèi)，對小鼠的中樞神經(jīng)系統(tǒng)沒有明顯的抑制作用，對小鼠的機能協(xié)調(diào)運動也無明顯影響。結(jié)論:一般藥理作用研究表明，在上述劑量內(nèi)沙棘提取物對動物心血管系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)及中樞神經(jīng)系統(tǒng)均無明顯影響，提示其不良反應(yīng)小。

沙棘提取物；藥理作用；心血管系統(tǒng)；呼吸系統(tǒng)；中樞神經(jīng)系統(tǒng)

沙棘(Hippophae rhamnoidesL. )是我國蒙醫(yī)、藏醫(yī)傳統(tǒng)習(xí)用藥材 ，1977年首次被衛(wèi)生部正式收載于《中華人民共和國國藥典》[1]，具有活血散瘀、止咳祛痰 、消食化滯的功效。本實驗通過沙棘提取物對家犬心血管系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)和小鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)的一般藥理學(xué)作用的研究，為其臨床用藥安全性提供依據(jù)。

1 材料

1.1 受試藥物

沙棘提取物，成都中醫(yī)藥大學(xué)民族醫(yī)藥學(xué)院提供，批號：20150312。主要含沙棘果油和總黃酮，實驗時用蒸餾水將沙棘提取物分別配制成高、中、低三個劑量組，其家犬的分別為155，77.5，38.75 mg原料藥/kg，相當(dāng)于臨床成人用量倍數(shù)9、4.5、2.25倍。ICR小鼠的分別為54，377，188.5 mg原料藥/kg，相當(dāng)于臨床成人用量倍數(shù)43、21.5、10.75倍，安定(天津金耀藥業(yè)有限公司，H12020957)，給藥量10 mg．kg-1，使用時用蒸餾水配置。

1.2 主要試劑、儀器

戊巴比妥鈉，含量≥95.0%，批號：F20130816，中國醫(yī)藥（集團）上?；瘜W(xué)試劑公司進口分裝，用氯化鈉注射液配制成3%濃度備用；肝素鈉注射液，批號：20140205，12500單位/ml/支，天津市生物化學(xué)制藥廠生產(chǎn)，用氯化鈉注射液配制成50 U.ml-1備用；氯化鈉注射液，規(guī)格：500 ml：4.5 g，批號：20140705，四川奇力同心制藥有限公司生產(chǎn)；儀器BL-420型生物機能實驗系統(tǒng)，成都泰盟電子有限公司產(chǎn)品；心電圖記錄儀（ECG-6511），上海光電醫(yī)用電子儀器有限公司產(chǎn)品；YH-4型生理壓力傳感器，北京航天生物醫(yī)學(xué)工程研究所產(chǎn)品；HXH-101型呼吸波傳感器；高碑店市新航機電設(shè)備有限公司產(chǎn)品；YLS-1A多功能小鼠自發(fā)活動記錄儀，YLS—4C轉(zhuǎn)棒式疲勞儀，均由山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院設(shè)備站生產(chǎn)。

1.3 實驗動物

家犬24只，（♀12只、♂12只），體重9～13 kg，市購。ICR小鼠，體重18～22 g，雌雄各半，由四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院實驗動物研究所提供。實驗動物生產(chǎn)許可證號：SCXK（川）2014-16。

2 實驗方法

2.1 對家犬血壓、呼吸、心電圖的影響。

將符合實驗要求的家犬隨機分為4組：空白對照組和沙棘提取物高、中、低3個劑量組分別為155，77.5，38.75 mg原料藥/kg，每組6只，雌雄各半。試驗在屏蔽室內(nèi)進行，空調(diào)室溫20-24℃，相對濕度65%-75%，將犬用戊巴比妥鈉(30 mg．kg-1)靜脈注射麻醉，四肢接心電圖肢導(dǎo)聯(lián)，描記標(biāo)準(zhǔn)Ⅱ?qū)?lián)；HXH-101型呼吸傳感器固定于犬劍狀軟骨處，分離頸總動脈，將動脈插管（管內(nèi)充滿50 U.mL-1肝素鈉氯化鈉注射液）插入頸總動脈內(nèi)，用線固定，動脈插管與YH-4型生理壓力傳感器連接。呼吸波傳感器接入BL-420系統(tǒng)的通道1，生理壓力傳感器接入通道2，記錄呼吸、血壓和Ⅱ?qū)?lián)心電。

待各項觀察指標(biāo)穩(wěn)定后，分別在給藥前檢測二次心電圖、呼吸和血壓，間隔約30 min檢測一次，取二次平均值作為藥前基礎(chǔ)值。將導(dǎo)尿管經(jīng)口緩慢插入食管和胃, 沙棘提取物高、中、低三個劑量組按上述劑量灌胃給藥，給藥體積均為1 mL．kg-1，各組分別于給藥后30、60、90、120、180、240 min檢測血壓、心電圖、呼吸各參數(shù)。

2.2 對小鼠自發(fā)活動的影響

將合格ICR小鼠在實驗環(huán)境中適應(yīng)性飼養(yǎng)1周，給藥前讓小鼠在YLS-1A多功能小鼠自發(fā)活動記錄儀的測試箱內(nèi)適應(yīng)5 min后立即測試小鼠在5 min內(nèi)的活動次數(shù)，按選擇活動次數(shù)在100～200次/5 min的小鼠按活動次數(shù)和體重、性別隨機分為5組：空白對照組、陽性對照組（安定）和沙棘提取物高、中、低劑量組分別為754，377，188.5 mg原料藥/kg每組10只，雌雄各半。然后各組均按0.2 mL．10g-1灌胃給予相應(yīng)的受試液，給藥后60 min時，同前法記錄各組小鼠5 min內(nèi)的活動次數(shù)。

2.3 對戊巴比妥鈉閾劑量致小鼠睡眠時間的影響

ICR小鼠60只，將小鼠隨機分為沙棘提取物高、中、低劑量組、陽性對照組（安定）和空白對照組5組，每組12只，雌雄各半。試驗在室溫22-24℃的空調(diào)溫度條件下進行，各組按相應(yīng)劑量以0.2 mL/10g灌胃給予相應(yīng)受試液(空白對照組給予蒸餾水)。給藥后30 min，按35 mg．kg-1（給藥體積為0.2 mL．g-1）尾靜脈注射閾劑量戊巴比妥鈉，以小鼠翻正反射消失1 min以上為入睡指標(biāo)，從翻正反射消失至恢復(fù)時間為睡眠持續(xù)時間，觀察記錄各組小鼠的睡眠持續(xù)時間。

2.4 對小鼠戊巴比妥鈉閾下劑量催眠的協(xié)同作用

ICR小鼠60只，隨機分組，每組12只，雌雄各半。小鼠在室溫22-24℃的實驗環(huán)境中適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，各組均按相應(yīng)劑量以0.2 mL．10g-1灌胃給予相應(yīng)受試液，給藥后30 min，按28 mg．kg-1（給藥體積為0.2 ml．g-1）尾靜脈注射戊巴比妥鈉，以小鼠翻正反射消失1 min以上為入睡指標(biāo)，觀察各組小鼠的入睡只數(shù)。

2.5 對小鼠轉(zhuǎn)棒運動的影響

試驗在22-24℃空調(diào)室溫條件下進行，試驗前對動物進行訓(xùn)練、篩選，捏住小鼠尾中部，使小鼠在轉(zhuǎn)棒上爬行，轉(zhuǎn)速為30 rpm．min-1，爬行一段時間后逐漸放松鼠尾，當(dāng)其不再依靠鼠尾平衡身體時完全松開鼠尾，對于跳躍或團身抱軸的小鼠棄之不用，每批訓(xùn)練30 min，連續(xù)訓(xùn)練3 d。選取第3 d訓(xùn)練時未掉棒的合格小鼠50只，將小鼠隨機分為沙棘葉提取物高、中、低劑量組、陽性對照組和空白對照組五組，每組10只，雌雄各半。各組按相應(yīng)劑量以0.2 mL/10g灌胃給予相應(yīng)受試液，給藥后30 min，測量各組小鼠10 min內(nèi)的落棒只數(shù)。

2.6 統(tǒng)計方法

所有實驗數(shù)據(jù)采用SPSS21.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析。以（±s）表示結(jié)果的數(shù)據(jù)用單因數(shù)方差分析進行組間比較,以(%)表示結(jié)果的數(shù)據(jù)用χ2檢驗檢測其組間差異的顯著性。

3 實驗結(jié)果

3.1 對家犬血壓、呼吸系統(tǒng)及心電圖的影響

血壓、呼吸檢測統(tǒng)計結(jié)果見表1～表4；心電圖（Ⅱ?qū)?lián)）記錄結(jié)果見表5 ,沙棘提取物在155 mg原料藥/kg劑量范圍內(nèi)對家犬的血壓、呼吸振幅、呼吸頻率及心電圖（Ⅱ?qū)?lián)）的心率、均無明顯影響, 給藥前及給藥后各檢測時間點的檢測值與空白對照組比較其差別均無顯著意義（P＞0.05），心律均為竇性。

表1 沙棘提取物對家犬收縮壓測定值（n=6，±s，kPa）

表1 沙棘提取物對家犬收縮壓測定值（n=6，±s，kPa）

注:與空白對照組比較，P＞0.05

檢測時間（min） 空白對照組 高劑量組 中劑量組 低劑量組基礎(chǔ)值 16.16±1.38 15.37±1.19 16.25±0.94 16.17±1.58 30 16.07±1.26 15.54±1.04 16.45±1.09 16.11±1.67 60 16.24±1.50 15.41±1.06 16.45±1.19 16.18±1.64 90 16.22±1.45 15.55±1.14 16.09±1.18 16.11±1.58 120 16.39±1.28 15.47±1.07 16.34±1.02 16.11±1.64 180 16.31±1.41 15.39±1.01 16.50±1.33 16.13±1.75 240 16.28±1.33 15.41±1.07 16.36±1.28 16.17±1.69

表2 沙棘提取物對家犬舒張壓測定值（n=6，±s，kPa）

表2 沙棘提取物對家犬舒張壓測定值（n=6，±s，kPa）

注：與空白對照組比較同，P＞0.05

檢測時間（min） 空白對照組 高劑量組 中劑量組 低劑量組基礎(chǔ)值 13.03±1.02 11.95±1.08 12.88±1.16 12.82±1.04 30 13.04±1.12 11.73±1.14 12.98±1.28 12.80±0.98 60 13．15±1．13 11．98±1．15 12．81±1．07 12．95±1．07 90 13．25±1．14 12．06±1．22 12．77±1．42 12．92±1．02 120 13．36±1．09 11．87±1．42 12．70±1．62 12．97±1．04 180 13．34±1．11 11．83±1．71 12．77±1．28 13．00±1．07 240 13．24±0．98 12．07±1．28 12．99±1．25 13．03±1．05

表3 沙棘提取物對家犬呼吸振幅測定值（n=6，±s，g）

表3 沙棘提取物對家犬呼吸振幅測定值（n=6，±s，g）

注：與空白對照組比較，P＞0.05

檢測時間（min） 空白對照組 高劑量組 中劑量組 低劑量組基礎(chǔ)值 3.20±1.12 3.38±0.79 4.02±1.22 3.57±0.88 30 3.18±1.08 3.33±0.72 3.98±1.28 3.61±0.89 60 3.19±1.12 3.34±0.74 3.97±1.21 3.62±0.88 90 3.19±1.07 3.42±0.77 4.00±1.26 3.62±0.85 120 3.21±1.10 3.36±0.76 3.96±1.19 3.64±0.87 180 3.21±1.12 3.39±0.78 4.02±1.18 3.64±0.88 240 3.26±1.15 3.37±0.76 3.97±1.21 3.62±0.91

表4 沙棘提取物對家犬呼吸頻率測定值（n=6，±s，次/分）

表4 沙棘提取物對家犬呼吸頻率測定值（n=6，±s，次/分）

檢測時間（min） 空白對照組 高劑量組 中劑量組 低劑量組基礎(chǔ)值 10.9±2.15 11.25±2.70 10.83±1.51 12.08±3.53 30 11.3±2.66 11.17±2.86 11.00±2.00 12.33±3.61

注：與空白對照組比較，P＞0.05

表5 沙棘提取物對家犬心率測定值（n=6，±s，次/分）

表5 沙棘提取物對家犬心率測定值（n=6，±s，次/分）

注：與空白對照組比較，P＞0.05

檢測時間（min） 空白對照組 高劑量組 中劑量組 低劑量組基礎(chǔ)值 196.58±40.60 190.25±18.49 197.17±22.00 196.00±20.43 30 176.67±37.17 186.83±23.60 196.17±23.01 195.83±20.33 60 184.00±31.27 183.67±21.30 193.50±27.96 192.83±18.49 90 181.83±30.60 183.83±19.15 187.50±23.35 187.33±24.65 120 178.67±29.22 179.67±18.55 188.50±25.19 195.67±19.94 180 177.33±28.51 176.17±18.89 181.50±27.13 189.83±24.81 240 170.50±28.93 174.83±21.35 183.33±29.49 188.33±26.49

3.2 對小鼠自發(fā)活動的影響

沙棘提取物各劑量組小鼠給藥后90 min內(nèi)，一般行為狀態(tài)無異?，F(xiàn)象，未見跳躍、抽搐、流涎、肌顫及瞳孔變化等異常反應(yīng)；陽性組小鼠給藥后約10 min時開始活動減少、懶動、嗜睡現(xiàn)象。結(jié)果詳見表6。

表6 沙棘提取物對小鼠自發(fā)活動的影響

表6顯示：沙棘提取物高、中、低劑量組在給藥后60 min時小鼠的活動次數(shù)與空白對照組比較差別無顯著意義（P＞0.05）。陽性對照組在給藥后60 min時，小鼠5 min內(nèi)的活動次數(shù)明顯減少，與空白對照組比較差別有非常顯著意義（P＜0.01）。

提示：沙棘提取物高、中、低三劑量對小鼠的自發(fā)活動沒有抑制作用。

3.3 對戊巴比妥鈉閾劑量致小鼠睡眠時間的影響

表7 沙棘提取物對戊巴比妥鈉閾劑量致小鼠睡眠時間的影響試驗結(jié)果

注：與空白對照組比較，**P＜0.01

表7結(jié)果顯示：注射戊巴比妥鈉后，沙棘提取物高、中、低劑量組小鼠睡眠時間與空白組比較差別無顯著意義（P＞0.05）；陽性對照組的睡眠時間明顯長于空白對照組，與空白對照組比較差別有非常顯著意義（P＜0.01）。

提示：沙棘提取物對戊巴比妥鈉閾劑量致小鼠的睡眠時間沒有協(xié)同作用。

3.4 對小鼠戊巴比妥鈉閾下劑量催眠的協(xié)同作用

沙棘提取物高、中、低劑量組和陽性對照組、空白對照組分別有2只、0只、0只、12只、0只小鼠入睡，入睡率依次為16.7%、0%、0%、 100.0%和0%，結(jié)果見表18。

表8 沙棘提取物對戊巴比妥鈉閾下劑量致小鼠催眠的影響試驗結(jié)果

表8結(jié)果顯示：沙棘提取物高、中、低劑量組小鼠入睡個數(shù)與空白對照組比較差別無顯著意義（P＞0.05）；陽性對照組小鼠入睡個數(shù)明顯高于空白對照組，與空白對照組比較差別有非常顯著意義（P＜0.01）。

提示：沙棘提取物對戊巴比妥鈉閾下劑量致小鼠催眠沒有協(xié)同作用。

3.5 對小鼠轉(zhuǎn)棒運動的影響

給藥后30 min，沙棘提取物高、中、低劑量組和空白對照組各小鼠各外觀體征無異常，低劑量組和空白對照組各有1只小鼠在轉(zhuǎn)棒過程中出現(xiàn)掉棒現(xiàn)象，掉棒率為10%；陽性組小鼠出現(xiàn)活動減少、懶動、閉眼現(xiàn)象，在10 min的轉(zhuǎn)棒時間內(nèi)10只小鼠全部掉棒，掉棒率為100.0%，見表9。

表9 沙棘提取物對小鼠轉(zhuǎn)棒活動的影響試驗結(jié)果

表9結(jié)果顯示：在給藥后30 min，沙棘提取物高、中、低三個劑量對小鼠的轉(zhuǎn)棒活動均無明顯影響，掉棒只數(shù)與空白對照組差別均無顯著意義（P＞0.05）；陽性對照明顯使小鼠的轉(zhuǎn)棒活動受阻，掉棒只數(shù)與空白對照組比較差別有顯著意義（P＜0.01）。

提示：沙棘提取物對小鼠的轉(zhuǎn)棒活動無明顯影響。

4 討論

本實驗結(jié)果表明，沙棘提取物在155 mg(原料藥)．kg-1體重給藥劑量內(nèi)，對家犬心血管系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)均無明顯影響；在754 mg(原料藥)．kg-1體重給藥劑量范圍內(nèi)，對小鼠的中樞神經(jīng)系統(tǒng)沒有明顯的抑制作用，對小鼠的機能協(xié)調(diào)運動無明顯影響，說明此臨床指導(dǎo)用量是安全可靠的，至于加大劑量是否影響臨床治療效果還應(yīng)做進一步的探索。

[1] 中華人民共和國藥典委員會.中華人民共和國藥典[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社,2015:285.

（責(zé)任編輯：陳思敏）

Study on the general pharmacological effects of extracts of Shaji/

TONG Dong, WEI Zhi-cheng, ZUO Fang, WANG Li,LUO Yu, MENG Xian-li, ZENG Yong //(School of Pharmacy, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine; Key Laboratory of Standardization for Chinese Herbal Medicine, Ministry of Education; National Key Laboratory Breeding Base of Systematic Research, Development and Utilization of Chinese Medicine Resources, Chengdu 611137, Sichuan)

Objective: To study the safety of extracts of Shaji and to observe the general pharmacological effects for the reference of clinical therapy.Method:The effects of extracts of Shaji on domestic dogs blood pressure, respiratory rate, respiratory amplitude, and electrocardiogram were observed. The effects of extracts of Shaji on mice spontaneous activity, sleeping time and hypnosis induced by pentobarbital sodium, and moving rod movement were observed.Result:With a dose of 155mg．kg-1, extracts of shaji had no obvious effect on cardiovascular systems and respiratory system of dog. With a dose of 754 mg．kg-1, it didn't inhibit the central nervous system and the coordination function of mice.Conclusion:The result indicates that with the above-mentioned dose of extracts of Shaji, it has no effect on animal's cardiovascular systems, respiratory system and central nervous system.

Extracts of Shaji; pharmacological effects; cardiovascular systems; respiratory systems; central nervous system

R 285.5

] A

] 1674-926X(2017)02-015-04

四川省科技計劃項目（2014SZ0071）；四川省科技廳省青年科技創(chuàng)新研究團隊專項計劃項目（2014TD0007）

成都中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院 ，中藥材標(biāo)準(zhǔn)化教育部重點實驗室 中藥資源系統(tǒng)研究與開發(fā)利用省部共建國家重點實驗室培育基地，四川 成都 611137

童東，在讀碩士研究生，主要從事中藥藥效與毒理研究Tel:18382188293 Email:2365975228@qq.com

曾勇，教授，碩士生導(dǎo)師，主要從事中藥藥效與毒理研究Tel:18982095682 Email:286840942@qq.com

2016-08-09