黃青，許軍，蘇麗飛，楊振興，董小萍，趙中振*

·品種品質(zhì)·

六種不同產(chǎn)地的肉桂中桂皮醛及總揮發(fā)油的含量測定

黃青1,2，許軍2，蘇麗飛3，楊振興3，董小萍1*，趙中振2*

目的：測定6種不同產(chǎn)地共18批肉桂中桂皮醛及總揮發(fā)油的含量，為肉桂的質(zhì)量評價提供科學依據(jù)和方法。方法：桂皮醛的含量測定采用高效液相二極管陣列檢測法（HPLC-DAD），色譜柱為CAPCELL PAK C18MGⅡ S5（4.6×250 mm，5 μm），流動相為乙腈-水（38:62），流速為1 mL．min-1,柱溫為35 ℃，檢測波長290 nm，進樣量10 μL；總揮發(fā)油的含量測定采用水蒸氣蒸餾法。結(jié)果：不同產(chǎn)地的肉桂中桂皮醛含量有明顯差異，越南文安產(chǎn)含量最高，老撾產(chǎn)含量最低，總揮發(fā)油含量測定結(jié)果亦如此。結(jié)論：此研究結(jié)果可為肉桂的臨床用藥提供科學參考和依據(jù)。

肉桂；桂皮醛；總揮發(fā)油；含量測定

肉桂為樟科植物肉桂Cinnamomum cassiaPresl的干燥樹皮，多于秋季剝?nèi)￡幐?，氣香濃烈，味甜辣[1]。肉桂在我國主要分布于廣西、廣東，其次是云南、海南、福建，四川、江西、貴州、湖南、浙江、臺灣南部也有少量栽培；國外主要分布于越南、印度、斯里蘭卡、印尼和柬埔寨等國[2]。肉桂性味辛、甘、熱，歸腎、脾、心、肝經(jīng)，具有補火助陽、散寒止痛、活血通經(jīng)的功效[1]?，F(xiàn)代藥理學研究表明，肉桂揮發(fā)油具有鎮(zhèn)痛解痙、解熱、降血壓、抗菌、升高白細胞、抗腫瘤、抗?jié)?、健胃、壯陽等作用[3,4]。而桂皮醛作為揮發(fā)油中最主要的成分，國內(nèi)外大量研究表明其具有抗炎、神經(jīng)保護、抗腫瘤、降糖、抗菌等多種藥理活性[5]。且桂皮醛和揮發(fā)油的含量作為2015年版《中國藥典》肉桂含量測定項下規(guī)定的指標，其含量的多少是評價肉桂質(zhì)量好壞的重要因素[1]。肉桂產(chǎn)地眾多，但對其進行品質(zhì)相關研究的還較少，本文采用HPLC-DAD，通過對廣西平南、廣西東興、廣東德慶、越南文安、云南和老撾6個產(chǎn)地共18批肉桂藥材中桂皮醛的含量進行測定的同時采用水蒸氣蒸餾法測定這18批藥材的總揮發(fā)油含量，旨在為肉桂的臨床用藥及進一步的開發(fā)利用提供科學參考和依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器

高效液相色譜儀（Agilent，1100型）;色譜工作站（Agilent，1100型）；1/10萬分析天平（SARTORIUS，CP224S型）；1/100萬分析天平(METTLER TOLEDO，MT5型);超聲波清洗器（CREST ULTRASONICS，CP-2600D型）；離心機（EPPENDORF，CENTRIFUGE 5810型）;超純水儀(天恒科技有限公司，A10)。

1.2 試劑與標準品

甲醇(RCI labscan,色譜純，LC1115-G)；乙腈（RCI labscan,色譜純，LC1005-G）；桂皮醛對照品（CHEM SERV-ICE公司，純度高于98.0%，批號1901400）。

1.3 藥材

本研究所用所有肉桂藥材樣品均由深圳津村藥業(yè)有限公司提供，經(jīng)香港浸會大學中醫(yī)藥學院趙中振教授鑒定。（樣品批號及信息見表1）

表1 18批肉桂藥材信息表

2 方法與結(jié)果

2.1 桂皮醛含量測定

2.1.1 供試品溶液的制備 取肉桂粉末（過45目篩）約0.1g，精密稱定，精密加入甲醇25 mL，靜置0.5 h，超聲提取0.5 h（300 w, 30℃），再靜置0.5 h，離心（4000 r．min-1，10 min），將上清液倒入50 mL容量瓶中；藥渣再加15 mL甲醇，混勻后同法提取，離心后將上清液倒入同一50 mL容量瓶中，殘渣用5 mL甲醇潤洗，離心（4000 r．min-1，10 min），合并上清液，加甲醇定容至50 mL，0.45 μm微孔濾膜過濾，即得。

2.1.2 色譜條件 CAPCELL PAK C18MGⅡ S5（4.6×250 mm，5 μm）；流動相為乙腈-水（38:62）,流速為1 mL．min-1,柱溫為35 ℃, 檢測波長290 nm，進樣量10 μL；該條件下得到的對照品和供試品溶液所得HPLC圖見圖1。

圖1 對照品和樣品HPLC圖

2.1.3 工作曲線與線性關系 分別配置濃度為10，40，200，250，304 μg．mL-1的桂皮醛對照品溶液，0.45 μm微孔濾膜過濾，注入高效液相色譜儀，照“2.1.2”項下的色譜條件進行測定分析，以對照品濃度x（μg．mL-1）為橫坐標，峰面積y為縱坐標繪制工作曲線,并進行線性回歸，所得回歸方程為：y=100.39x+21.924,R2=0.9999。線性范圍為：10～304 μg．mL-1。結(jié)果表明在桂皮醛進樣濃度為10～304 μg．mL-1時與峰面積呈現(xiàn)良好的線性關系。

2.1.4 靈敏度 檢測限即測定信噪比為3：1時的桂皮醛對照品濃度，為0.03 μg．mL-1；定量限即測定信噪比為10：1時的桂皮醛對照品濃度，為0.14 μg．mL-1。

2.1.5 精密度 稱取廣東德慶產(chǎn)的一批肉桂(RGgddq-2)樣品6份，每份各約0.1 g，精密稱定，分別按“2.1.1”項下的方法制備供試品溶液，進樣，照“2.1.2”項下的色譜條件測定分析，記錄這6份樣品溶液的峰面積，帶入回歸方程計算得出各自的桂皮醛濃度，結(jié)果見表2，并計算得出6份樣品的桂皮醛含量之間的RSD為1.47%，小于2%，符合藥典要求，表明其重復性較好。

表2 精密度考察結(jié)果

2.1.6 穩(wěn)定性 廣東德慶產(chǎn)的一批肉桂(RGgddq-2)樣品，按“2.1.1”項下的方法制備供試品溶液，分別于0，2，4，6，8，12，24h照“2.1.2”項下的色譜條件測定其桂皮醛含量，具體結(jié)果見表3，其RSD為0.15%，表明供試品溶液在室溫下24h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

表3 穩(wěn)定性考察結(jié)果

2.1.7 準確度 精密稱取已知含量的肉桂藥材(RGgddq-2,桂皮醛含量3.37%)9份，每份約0.05g，精密稱定，加入一定量的桂皮醛對照品，按“2.1.1”項下的方法制備供試品溶液，照“2.1.2”項下的色譜條件測定其桂皮醛含量，加入的桂皮醛對照品的量及測定結(jié)果見表4?；厥章示?2%～105%，表明此方法的準確度良好。

表4 加樣回收率考察結(jié)果

2.1.8 樣品測定 取18個批次的肉桂藥材各3份，按“2.1.1”項下的方法制備供試品溶液，照“2.1.2”項下的色譜條件測定其桂皮醛含量，結(jié)果見表5和圖2。

表5 18批不同產(chǎn)地的肉桂中桂皮醛含量測定（S, n=3）

表5 18批不同產(chǎn)地的肉桂中桂皮醛含量測定（S, n=3）

桂皮醛含量/%產(chǎn)地 樣品一（x±S,n=3）樣品二（x±S,n=3）平均值（x±S,n=3）廣西平南 2.90 0.08 3.04 0.05 3.11 0.03 3.02 0.11廣西東興 4.02 0.17 4.01 0.21 3.13 0.16 3.72 0.51廣東德慶 2.30 0.04 3.24 0.08 2.95 0.01 2.83 0.48越南文安 9.32 0.04 10.09 0.13 8.96 0.62 9.46 0.58云南 4.49 0.08 4.89 0.17 4.75 0.22 4.71 0.20老撾 2.77 0.10 2.53 0.06 2.60 0.05 2.63 0.12樣品三（x±S,n=3）

圖2 18批不同產(chǎn)地的肉桂中桂皮醛含量（S, n=3）

2.2 總揮發(fā)油含量測定

稱取肉桂藥材粉末25 g，置于1000 mL圓底燒瓶中，加蒸餾水200 mL浸泡1 h后(邊加邊攪勻)再加100 mL蒸餾水水蒸氣蒸餾提取5 h，靜置1 h，讀數(shù)，結(jié)果見表6和圖3。

表6 18批不同產(chǎn)地的肉桂中總揮發(fā)油含量測定S, n=3）

表6 18批不同產(chǎn)地的肉桂中總揮發(fā)油含量測定S, n=3）

總揮發(fā)油含量/%樣品一(x±S,n=3)規(guī)格 產(chǎn)地 樣品二(x±S,n=3)樣品三(x±S,n=3)平均值(x±S,n=3)中筒 廣西平南 2.1 0.2 2.0 0.0 2.1 0.2 2.1 0.1中筒 廣西東興 2.8 0.0 2.7 0.2 2.1 0.2 2.5 0.4中筒 廣東德慶 1.7 0.2 2.1 0.2 2.3 0.2 2.0 0.3 B級 越南文安 4.9 0.6 5.1 0.6 4.9 0.6 5.0 0.1 B級 云南 3.3 0.1 3.4 0.0 3.3 0.1 3.3 0.1老撾肉桂 老撾 1.9 0.2 1.6 0.0 1.3 0.2 1.6 0.3

圖3 18批不同產(chǎn)地的肉桂中總揮發(fā)油含量S, n=3）

3 結(jié)果與討論

3.1 供試品及對照品溶液的制備

由于2015年版《中國藥典》中肉桂項下的桂皮醛含量測定采用的提取方法需放置過夜[1]，且如此操作一次并不能提取完全，故對其進行了適當優(yōu)化，考察了物料比及提取時間，最終確定本文中所使用的供試品溶液制備方法，該方法經(jīng)方法學考察證明符合藥典要求。桂皮醛較不穩(wěn)定，制作工作曲線的對照品溶液應現(xiàn)配現(xiàn)用，且實驗過程應盡量避光、快速操作。

3.2 色譜條件

2015年版《中國藥典》中肉桂項下的桂皮醛含量測定所采用的流動相為乙腈-水（35:75）[1]，本研究對其進行適當調(diào)整以使分離度等符合藥典要求，最終確定本實驗中所使用的流動相為乙腈-水（38:62）。

3.3 桂皮醛含量和總揮發(fā)油含量測定結(jié)果

有效成分桂皮醛和總揮發(fā)油的含量測定結(jié)果表明，產(chǎn)地對肉桂中桂皮醛和總揮發(fā)油的含量影響均較大。其中，越南文安產(chǎn)的肉桂中桂皮醛和總揮發(fā)油的含量均明顯高于其他五個產(chǎn)地；其次，含量較高的為云南產(chǎn)；而廣西平南、廣西東興和廣東德慶三個產(chǎn)地產(chǎn)的肉桂之間的差異則并不顯著；老撾產(chǎn)的肉桂桂皮醛和總揮發(fā)油含量則較其他五個產(chǎn)地的低。眾所周知，中藥發(fā)揮療效的成分及機制極為復雜，并非單一成分越高則其藥效越好，臨床用藥時應具體用途具體考慮。但從測定結(jié)果中可看出，不同產(chǎn)地的肉桂中桂皮醛和總揮發(fā)油的含量有差異，其藥效作用一定是有差異的，臨床用藥時有必要考慮產(chǎn)地這一因素的影響?，F(xiàn)今藥材市場流通的肉桂多種多樣，如何規(guī)范肉桂市場，保證肉桂藥材能發(fā)揮穩(wěn)定藥效這一問題 需解決。而不同產(chǎn)地肉桂中的成分種類及其藥理作用是否亦有較大差異？差異主要體現(xiàn)在哪一方面？這些都還有待進一步的考察。

[1] 國家藥典委員會.中國藥典.一部[S].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2015:136.

[2] 韋如萍,黃水芳,胡德活,等.肉桂的研究現(xiàn)狀及發(fā)展趨勢[J].經(jīng)濟林研究,2006,24(3):65.

[3] Oussalah M,Caillet S,Saucier L,et al.Inhibitory effects of selected plant essential oils on the growth of four pathogenic bacteria:E.coli O157:H7,Salmonellatyphimurium,Stap hylococcus aureus and Listeria monocytogenes[J].Food control,2007,18(5):414.

[4] Somchit MN,Reezal I,Elysha Nur I,et al.In vitro antimicrobial activity of ethanol and water extracts of Cassia alata[J].J of Ethnopharmacol,2003,84:1.

[5] 張利青,張占剛,付巖等.桂皮醛藥理作用的研究進展[J].中國中藥雜志,2015,40(23):4568.

(責任編輯：何瑤)

The determination of cinnamaldehyde and essential oil in Rougui collected from six habitats/

HUANG Qing1,2, XU Jun2,SU Li-fei3, YANG Zhen-xing3, DONG Xiao-ping1, ZHAO Zhong-zhen2//(1.Pharmacy College, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, Chengdu 611137, China; 2.Shool of Chinese Medicine, Hong Kong Baptist University, Hongkong 00852,China;3.Shen Tsumura Medicine CO. LTD., Shenzhen 518103)

Objective: Cinnamaldehyde and essential oil of 18 batches Rougui collected from six different habitats were detected to provide scienti fi c basis and method for quality evaluation of Rougui. Method: A HPLC-DAD method was applied to the determination of cinnamaldehyde. The samples were analyzed on a CAPCELL PAK C18MGⅡ S5 column（4.6×250 mm，5 μm）at 40 ℃.The mobile phase was acetonitrile-water (38:62) at fl ow rate of 1 mL．min-1. The detection wavelength was aet at 290 nm, and the sample size was 10 μL. Meanwhile, the essential oil of cinnamon was detecfed by hydrodistillation. Result:Difference were found in the content of cinnamaldehyde and essential oil among samples from different cultivation areas. Rougui from Vietnam had the highest content and Rougui from Laos had the lowest content. Conclusion: The results provid a scienti fi c basis for clinic medicine and further study of Rougui.

Rougui; cinnamaldehyde; essential oils; content determination

R 282

] A

1674-926X(2017)02-004-04

1.成都中醫(yī)藥大學藥學院，四川 成都 610081；2.香港浸會大學中醫(yī)藥學院，香港 999077；3.深圳津村藥業(yè)有限公司，廣東 深圳 518103

黃青（1992-），女，碩士研究生，主要從事中藥有效成分及質(zhì)量標準研究Email:616581872@qq.com

董小萍（1957-），女，教授，博士生導師，主要從事中藥有效成分及質(zhì)量標準研究Email:dongxiaoping11@126.com;趙中振（1957-），男，教授，博士生導師，主要從事本草學、中藥鑒定學研究Tel: (00852)34112424 Email:zzzhao@hkbu.edu.hk

2017-02-23