趙 軍

（河北省唐山市豐潤區(qū)人民醫(yī)院， 河北 唐山 064000）

乙肝病毒大蛋白血清學(xué)診斷乙肝患者的臨床意義

趙 軍

（河北省唐山市豐潤區(qū)人民醫(yī)院， 河北 唐山 064000）

目的通過檢測乙肝病毒大蛋白(LHBs)、乙肝病毒DNA以及乙肝兩對半(HBV M)，探討乙肝表面抗原大蛋白用于臨床診斷乙型肝炎的意義。方法共檢測357例乙肝患者血清標(biāo)本，LHBs和乙肝兩對半采用酶聯(lián)免疫方法進(jìn)行檢測，采用實時熒光定量PCR方法檢測HBV DNA。結(jié)果LHBs含量與HBV DNA拷貝數(shù)呈正相關(guān)性，相關(guān)系數(shù)r＝0.929；HBeAg陽性的175份標(biāo)本中，HBV DNA的陽性率(97.2%)與LHBs的陽性率(94.3%)之間沒有顯著性差異。HBeAg陰性的182份標(biāo)本中LHBs的陽性率與HBV DNA無顯著性差異。結(jié)論乙肝表面抗原大蛋白與HBV DNA有良好的相關(guān)性，乙肝表面抗原大蛋白檢測可以用于反映乙肝患者病毒DNA復(fù)制的血清學(xué)指標(biāo)。

乙肝病毒大蛋白；乙肝兩對半；HBV；DNA

我國慢性HBV感染患者，尤其是肝硬化患者中HBeAg陰性者高達(dá)60%以上[1]，對這些患者HBV復(fù)制程度的簡單評估為臨床上迫切需要解決的問題之一。臨床上評估HBV復(fù)制的指標(biāo)主要有HBV DNA和HBeAg，但是HBeAg陰性的乙肝患者除HBV DNA外，無其他標(biāo)志物可反映HBV復(fù)制程度，與病毒蛋白標(biāo)志物酶聯(lián)免疫檢查法相比，HBV DNA檢測相對復(fù)雜，因此臨床上急需一種血清免疫學(xué)指標(biāo)用于反映HBeAg陰性乙肝患者HBV的復(fù)制情況。

HBV-S基因編碼的表面大蛋白(LHBs)在空間上具有兩種不同的跨膜構(gòu)象，內(nèi)側(cè)和HBV核殼體膜結(jié)合，外側(cè)與病毒受體結(jié)合，是HBV顆粒成熟包裝的關(guān)鍵[2]。近些年發(fā)現(xiàn)Pre-S區(qū)的特有拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)在乙肝病毒感染與復(fù)制等過程中起重要作用[3-4]，因此我們使用包被了針對構(gòu)象型Pre-S區(qū)的高親和力、高特異性的單抗來定量檢測LHBs。本研究探討了LHBs反映HBeAg陰性乙肝患者HBV復(fù)制程度的可靠性。

1 資料與方法

1.1 一般資料

所有357例乙肝患者為我院2015.12—2016.12間門診或住院乙肝患者，其中男257例，女100例。年齡16～67，平均45.5歲。乙肝診斷符合2000—2009中華傳染病與寄生蟲病學(xué)分會、肝病學(xué)分會西安會議標(biāo)準(zhǔn)。

1.2 檢測方法

乙肝兩對半、LHBs采用ELISA法檢測:兩對半檢測試劑盒為廈門英科新創(chuàng)科技有限公司產(chǎn)品，LHBs定量檢測試劑盒由北京熱景生物技術(shù)有限公司提供。

HBV DNA檢測:采用實時熒光PCR方法擴(kuò)增，試劑盒為深圳匹基公司產(chǎn)品，使用美國伯樂ACYCLE1定量PCR儀，以拷貝數(shù)/mL表示含量，≥102拷貝/mL為陽性。

2 結(jié)果

2.1 HBeAg、HBV-LP和HBV DNA的陽性率比較

血清檢測結(jié)果見表1，統(tǒng)計分析表明三種不同指標(biāo)的陽性率差異有統(tǒng)計學(xué)意義，進(jìn)一步分析表明HBV-LP和HBV DNA的陽性率差異無統(tǒng)計學(xué)意義。HBeAg陽性的175份標(biāo)本中，HBV DNA的陽性率(97.2%)與 LHBs的陽性率(94.3%)之間沒有顯著性差異(P＞0.05)。HBeAg陰性的182份標(biāo)本中LHBs的陽性率與HBV DNA無顯著性差異。

2.2 乙肝表面抗原大蛋白(LHBs)含量與HBV DNA相關(guān)關(guān)系

LHBs的含量與HBV DNA拷貝數(shù)呈正良好的相關(guān)性，兩者的相關(guān)關(guān)系r＝0.929

表1 血清中PreS1-Ag、 HBeAg、 HBV-κLP和HBV DNA的檢測結(jié)果比較

表2 HBeAg陰性和陽性慢性乙肝患者中LHBs以及HBV DNA的陽性率

表3 乙肝患者中HBV DNA與LHBs的相關(guān)關(guān)系

圖1 不同HBV DNA拷貝數(shù)組別中LHBs變化趨勢圖

3 討論

在HBV病毒顆粒包膜化的過程中，LHBs(即HBsAg、Pre-S1蛋白和Pre-S2蛋白)起著關(guān)鍵作用，因此檢測LHBs的存在對于臨床上判定HBV復(fù)制具有一定的意義。L-Hbs的前S區(qū)具有復(fù)雜拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)[5]，并具有反式激活病毒復(fù)制的作用，檢測其存在具有重要意義。檢測結(jié)果表明:LHBs能夠反映HBV的復(fù)制情況，無論是在HBeAg陽性還是陰性的乙肝患者中LHBs的陽性率和HBV DNA的陽性率沒有顯著差異(P＞0.05)，而且血清中LHBs的含量與HBV DNA拷貝數(shù)具有較好的相關(guān)關(guān)系(r＝0.929)。由此可見，LHBs是一個較好的反映HBV復(fù)制情況的血清免疫學(xué)指標(biāo)。

在HBeAg陰性乙肝患者中，HBV DNA的陽性率為59.9%，提示HBeAg陰性慢性乙肝患者中確實有很大部分患者體內(nèi)仍然存在HBV的復(fù)制，LHBs的陽性率與HBV DNA陽性率沒有顯著差異(P＞0.05)。目前臨床上HBeAg普遍作為判定患者病毒復(fù)制程度的指標(biāo)，但是由于HBV病毒基因前C區(qū)或CP區(qū)發(fā)生變異，引起HBeAg合成障礙，而乙肝病毒仍然活躍復(fù)制，會出現(xiàn)HBeAg陰性患者中仍然呈現(xiàn)DNA陽性的結(jié)果，由此可見LHBs能夠反映HBeAg陰性乙肝患者體內(nèi)HBV復(fù)制情況，彌補目前兩對半檢測的不足，是HBV DNA檢測的一個有益的補充。

在HBeAg陰性乙肝患者組中有8%的患者檢測結(jié)果為LHBs陽性而HBV DNA陰性，我們分析有三個原因:(1)由于HBV基因變異頻繁，PCR引物有一定漏檢，而LHBs檢測是采用單抗特異識別，基因變異的影響較少；(2)含有LHBs的亞病毒顆粒是完整病毒顆粒的10000倍，消退時間晚于HBV DNA；(3)抗病毒藥物只能抑制病毒cccDNA再復(fù)制，并不能抑制已經(jīng)形成的病毒表達(dá)蛋白。如果肝內(nèi)cccDNA仍然較多存在，則大蛋白仍舊一段時間內(nèi)存在，但是此時候血液中DNA拷貝數(shù)則可能是陰性。此外由于LHbs上的前S區(qū)具有反式激活病毒復(fù)制的能力，L-Hbs的持續(xù)存在可能預(yù)示疾病反復(fù)。

乙肝病毒大蛋白的反式激活作用有重要的臨床意義，在抗病毒治療后期，HBV DNA檢測陰轉(zhuǎn)或是低載量，而乙肝病毒大蛋白(HBV-LP)的持續(xù)陽性很可能促進(jìn)HBV復(fù)制，導(dǎo)致病情反復(fù)。

[1] Bruns M，Miska S，Chassot S，et al.Enhancement of hepatitis B virus infection by noninfectious subviralparticles[J].J Virol，1998，72(2):1462-1468.

[2] Bruss V，Vieluf K.Functions of the Internal Pre-S Domain of the Large Surface Protein in Hepatitis B Virus Particle Morphogenesis[J].J Virol，1995，69(11):6652-6657.

[3] Bruss V.，Envelopment of the hepatitis B virus nucleocapsid[J].Virus Res，2004，106(2):199-209.

[4] Carsten Lambert，Sylvia Mann et.al.Assessment of determinants fecting the dual topology of hepadnaviral large envelope proteins[J].Journal of General Virology，2004，(85):1221-1225.

[5] Carsten Lambert，Sylvia Mann et.al.Assessment of determinants ffecting the dualtopology of hepadnaviral large envelope proteins[J].Journal of General Virology，2004，(85):1221-1225.

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ISSN.2096-3718.2017.44.8528.02

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