李金鴿，王惠仔，呂根芳

1.西北婦女兒童醫(yī)院(西安710061)，2.西安市碑林區(qū)柏樹林社區(qū)衛(wèi)生服務中心(西安710001)

△通訊作者

西安地區(qū)流產(chǎn)絨毛組織72例染色體核型分析

李金鴿1，王惠仔1，呂根芳2△

1.西北婦女兒童醫(yī)院(西安710061)，2.西安市碑林區(qū)柏樹林社區(qū)衛(wèi)生服務中心(西安710001)

目的：研究自然流產(chǎn)絨毛組織的染色體核型，分析自然流產(chǎn)的原因。方法：收集72例自然流產(chǎn)患者的絨毛組織，進行絨毛細胞的培養(yǎng)，染色體收獲和G顯帶法進行染色體核型分析。結(jié)果：72例絨毛組織，培養(yǎng)成功52例，異常染色體核型27例，異常率51.92%。異常的染色體核型中，數(shù)目異常19例，結(jié)構(gòu)異常7例，數(shù)目結(jié)構(gòu)均異常1例。結(jié)論：自然流產(chǎn)的主要原因可能是染色體核型異常，分析染色體核型有助于流產(chǎn)患者的再次生育計劃。

自然流產(chǎn)是孕婦早期妊娠期經(jīng)常遇到的一類難題，全球在孕期發(fā)生自然流產(chǎn)的孕婦有6%～15%，其原因主要包括胚胎原因、母體疾病、母體解剖結(jié)構(gòu)異常、內(nèi)分泌功能異常、免疫反應異常以及其他因素，如胎盤界面上增多的NK細胞，血清中血紅素氧化酶1(HO-1)等，其中胚胎因素中是自然流產(chǎn)的最常見的原因[1-4]。為了更好的探究西安地區(qū)流產(chǎn)與染色體核型的關系和避免再次妊娠流產(chǎn)的發(fā)生，以及西安地區(qū)自然流產(chǎn)患者染色體核型異常率，我院收集了72例流產(chǎn)絨毛組織，對其進行細胞培養(yǎng)和G顯帶法的染色體核型分析。

對象與方法

1 研究對象 2015年8月至2016年9月在我院計劃生育門診以自然流產(chǎn)或者胚胎停育就診的72例孕婦為研究對象，孕周6～14周，孕婦年齡22～35歲。對每位研究者進行手術(shù)清宮術(shù)，取流產(chǎn)組織的絨毛組織進行染色體檢測。排除：全身性疾病、生殖器官異常、內(nèi)分泌異常、軀體與心理的不良刺激等因素。所有研究均經(jīng)過患者同意并均簽署知情同意書。

2 研究方法 ①絨毛培養(yǎng)：將取出的絨毛組織放入裝有生理鹽水的玻璃瓶中保存，取適量的絨毛組織用0.9%的無菌生理鹽水進行沖洗，在倒置顯微鏡下選取合適的絨毛，加入膠原酶，在37 ℃的恒溫箱中培養(yǎng)消化1 h，離心，去上清液，加入0.05%的胰酶液再次消化1 h，1500 r/min，8 min離心，棄上清，加入2 ml培養(yǎng)液，將絨毛組織吹打，形成單個細胞。接種于全培養(yǎng)基培養(yǎng)瓶中，并放入CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3～5 d。當觀察到梭形細胞后，置換培養(yǎng)箱，并加入秋水仙素，3 h后收取細胞。②染色體收獲：用生理鹽水反復沖洗培養(yǎng)瓶，并加入0.25%胰酶消化貼壁細胞，獲得液體后，倒入離心管中。離心，去上清。加入37 ℃的0.075 mmol/L的氯化鉀低滲液，8 min后立即加入甲醛∶冰醋酸(3∶1)固定液1 ml于37 ℃水溫箱中5 min，離心10 min，棄上清。再次加入10 ml固定液放置30 min，共2次。離心后，把細胞沉淀物滴于干凈載玻片上。③G顯帶法：將備好的絨毛標本放于胰酶溶液中消化1 min，立即用生理鹽水洗滌。最后用10%姬姆薩(Giema)染色。

結(jié) 果

72例流產(chǎn)組織的絨毛，其中絨毛細胞培養(yǎng)成功52例，失敗20例，成功率為72.22%。異常染色體核型27例(51.92%)，其中染色體數(shù)目異常核型19例(70.37%)，染色體結(jié)構(gòu)異常核型7例(25.92%)，染色體數(shù)目結(jié)構(gòu)均異常1例(5.26%)，見表1。

表1 27例流產(chǎn)組織絨毛染色體異常核型

討 論

近幾年來，人類自然流產(chǎn)的發(fā)生率越來越高，據(jù)統(tǒng)計總的流產(chǎn)率已經(jīng)高達50%左右[5-6]，而且自然流產(chǎn)的次數(shù)越多，其自然流產(chǎn)的機率就越大。如此高的自然流產(chǎn)率已經(jīng)嚴重的影響到人們的生活質(zhì)量，不僅嚴重傷害了孕者的身心健康，甚至對孕者家庭和社會的穩(wěn)定造成影響。據(jù)國內(nèi)外研究報道，自然流產(chǎn)的主要原因為染色體核型異常，大約有57%的自然流產(chǎn)是染色體畸形引起的[7-8]。人類染色體核型畸形產(chǎn)生的主要原因包括環(huán)境和藥物對胚胎的影響，以及胚胎在自身發(fā)育過程中所形成的錯誤，如人類發(fā)育早期存在很高的細胞減數(shù)分裂錯誤等。

本文收集72例自然流產(chǎn)者，提取絨毛組織，進行細胞培養(yǎng)，成功52例，失敗20例，成功率達72.3%。培養(yǎng)失敗者可能是因為流產(chǎn)組織取出時被污染，或者流產(chǎn)組織的新鮮度不夠。經(jīng)過培養(yǎng)后的絨毛細胞，提取染色體進行分析，發(fā)現(xiàn)52例中異常染色體核型有27例，異常率為51.92%，與文獻報道的發(fā)現(xiàn)自然流產(chǎn)的染色體核型異常率一致[9-11]。其中27例中，染色體數(shù)目異常19例，結(jié)構(gòu)異常7例，結(jié)構(gòu)和數(shù)目均異常1例。19例數(shù)目異常的核型中，有2例單體，17例都為三體，因此在數(shù)目異常染色體核型中，三體最常見，本文中三體分別有9，14，16，18，21，22染色體，均為以前研究中經(jīng)常報道所見的[12 ]。三體形成的主要原因在于父母雙方的配子在形成受精卵時，其中父方或者母方的染色體未分裂。在對患兒的父母雙方進行染色體核型檢測后，發(fā)現(xiàn)父方，母方的染色體核型存在平和易位時，下一代的患病率顯著增加，由于染色體數(shù)目的增加，導致基因產(chǎn)物的嚴重流失，故其很難存活。最常見的便是21三體綜合征，但其一般出生兒童具有先天愚型或者先天性心臟病，嚴重的影響生活質(zhì)量[13]。除了三體染色體異常外，本文中還發(fā)現(xiàn)單體(45，X)基因型，其產(chǎn)生的主要原因是患者雙親之一的細胞分裂過程中X染色體不分離所致。

染色體結(jié)構(gòu)異常的類型以染色體缺失、重復、倒位、易位為主，最常見主要是倒位和易位。染色體易位是兩個非同源染色體相互交換片段形成的。易位中最常見的又為羅伯遜易位。染色體倒位是由發(fā)生兩次斷裂的染色體異常重接所形成。在本文中，我們發(fā)現(xiàn)了7例結(jié)構(gòu)異常的染色體核型，其中有2例倒位的染色體核型(46，XX，inv(14)(p13;q11))，3例易位的核型。其中兩例易位的核型均為羅伯遜易位。羅伯遜易位是由2條近端著絲粒染色體，在著絲粒附近斷裂重新連接后，所形成的異常染色體核型，其斷裂點是隨機的。研究表明羅伯遜異位核型的豐富性是與異位斷裂點復雜性相關的[14]。這種羅伯遜易位的患兒，其父母可能為羅伯遜易位者或者攜帶者，故檢測染色體核型對這種家庭類型有很大幫助。近幾年來研究發(fā)現(xiàn)染色體核型分析雖然能發(fā)現(xiàn)羅伯遜易位，但不能明確易位的染色體來源，而熒光原位雜交技術(shù)(FISH)為這提供可能。

綜上所述，西安地區(qū)自然流產(chǎn)的患者中，染色體數(shù)目異?？赡苤饕脑?。因此，對自然流產(chǎn)的患者進行染色體核型分析有利于對流產(chǎn)的原因及時做出分析，并指導再次生育，以達到優(yōu)生優(yōu)育。

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(收稿：2017-02-01)

流產(chǎn) 絨毛 染色體 核型分析

R713.41

A

10.3969/j.issn.1000-7377.2017.10.033