張馨月 鐘婷婷 鐘建橋 許飏

646000四川瀘州，西南醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院皮膚科（第一作者現(xiàn)在重慶醫(yī)科大學(xué)附屬大學(xué)城醫(yī)院皮膚科，401331）

·論著·

帶狀皰疹患者皰液及外周血病毒載量與血漿S100β和神經(jīng)元特異性烯醇化酶水平的研究

張馨月 鐘婷婷 鐘建橋 許飏

646000四川瀘州，西南醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院皮膚科（第一作者現(xiàn)在重慶醫(yī)科大學(xué)附屬大學(xué)城醫(yī)院皮膚科，401331）

目的 檢測(cè)帶狀皰疹患者皰液、血液水痘-帶狀皰疹病毒（VZV）DNA載量及血漿S100β蛋白、神經(jīng)元特異性烯醇化酶（NSE）濃度變化，并探討其相關(guān)性。方法 在西南醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院皮膚科收集50例急性期帶狀皰疹住院患者皰液、治療前后外周血標(biāo)本和20例健康對(duì)照外周血標(biāo)本。采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)皰液及外周血病毒載量，ELISA檢測(cè)血漿S100β蛋白、NSE濃度。結(jié)果 50例帶狀皰疹患者皰液中均檢測(cè)到VZV；治療前18例、治療后5例血液中測(cè)出VZV。對(duì)照組血液中均未測(cè)出VZV。急性期帶狀皰疹患者皰液病毒載量與血漿S100β、NSE含量均呈正相關(guān)（r=0.535、0.430，均P＜0.05）。治療前血VZV陽(yáng)性患者較血VZV陰性患者血漿S100β、NSE水平升高（均P＜0.05），血VZV DNA載量與血漿S100β、NSE均呈正相關(guān)（r=0.711、0.645，均P＜0.05）。結(jié)論 帶狀皰疹患者可檢測(cè)出VZV DNA，且急性期帶狀皰疹患者皰液、治療前血VZV DNA載量越高，血漿S100β、NSE水平越高。

帶狀皰疹；病毒載量；S100蛋白質(zhì)類(lèi)；磷酸丙酮酸水合酶；神經(jīng)損傷；S100β

帶狀皰疹是由水痘-帶狀皰疹病毒（VZV）感染引起的以神經(jīng)炎癥、皮膚皰疹為特征的皮膚病，可伴有不同程度的神經(jīng)損傷。S100、神經(jīng)元特異性烯醇化酶（NSE）是早期評(píng)估神經(jīng)損傷及預(yù)后的重要因子［1?2］，但目前未見(jiàn)帶狀皰疹與S100β和NSE的研究。研究表明，VZV病毒載量與帶狀皰疹臨床表現(xiàn)的嚴(yán)重程度有關(guān)，但是否與神經(jīng)損傷也存在相關(guān)性，目前尚不清楚。我們通過(guò)檢測(cè)急性期帶狀皰疹患者皰液、血液病毒載量及血漿S100β和NSE的變化，探討病毒載量與血漿S100β、NSE的關(guān)系，為臨床早期評(píng)估及預(yù)防帶狀皰疹神經(jīng)損傷提供依據(jù)。

對(duì)象與方法

一、對(duì)象

2014年5月至2014年10月，西南醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院皮膚科病房住院的帶狀皰疹患者50例，設(shè)為帶狀皰疹組，其中男26例，女24例，年齡33～83（59.61±13.88）歲。20例本院體檢中心體檢健康者設(shè)為對(duì)照組，其中男10例，女10例，年齡42～61（52.55±5.69）歲。其中帶狀皰疹組入組標(biāo)準(zhǔn)為：①具有典型的臨床癥狀及體征，符合帶狀皰疹診斷標(biāo)準(zhǔn)［3］；②具有皰壁完整、皰液總量≥200 μl的水皰；③患者病程＜7 d，發(fā)病后未經(jīng)任何治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他引起中樞或周?chē)窠?jīng)損傷的疾病的患者；②妊娠及哺乳期婦女；③合并嚴(yán)重的心、肺等系統(tǒng)性疾病的患者；④其他原因?qū)е旅庖吡Φ拖碌幕颊撸鐞盒阅[瘤、HIV感染、紅斑狼瘡等自身免疫性疾病患者，以及長(zhǎng)期應(yīng)用免疫抑制劑者；⑤精神病患者，或既往有精神病史和精神病家族史的患者；⑥住院時(shí)間不夠、住院期間發(fā)生其他重大事件（如過(guò)敏性休克、心跳驟停、嚴(yán)重感染等）、未抽取治療后血液標(biāo)本或未完成隨訪等；⑦近期有消化道潰瘍、出血、精神癥狀及嚴(yán)重高血壓、高血糖或拒絕使用的個(gè)別患者；⑧兩次及以上的復(fù)發(fā)性帶狀皰疹、播散性帶狀皰疹、泛發(fā)性帶狀皰疹等特殊帶狀皰疹患者。兩組年齡、性別差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

本研究通過(guò)西南醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有對(duì)象均簽署知情同意書(shū)。

帶狀皰疹組患者入院后口服伐昔洛韋0.3 g，每日2次，共9 d；維生素B1，每日100 mg肌內(nèi)注射，共14 d；維生素B12每日0.5 mg肌內(nèi)注射，共14 d；加巴噴丁每晚300 mg（據(jù)疼痛程度及反應(yīng)調(diào)整劑量），共14 d。配合皮損處局部處理及紅光治療，潑尼松每日30 mg口服共7 d，并輔以免疫調(diào)節(jié)劑及活血止痛中藥聯(lián)合治療，14 d為1個(gè)療程。

二、主要試劑

人S100β蛋白酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒購(gòu)自北京誠(chéng)林生物科技有限公司，人NSE酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒購(gòu)自北京誠(chéng)林生物科技有限公司，VZV核酸測(cè)定試劑盒（PCR?熒光探針?lè)ǎ┵?gòu)自上海之江生物科技有限公司。

三、方法

1.皰液采集：經(jīng)無(wú)菌消毒后，采集患者入院第1天的皰液（不少于200 μl）于微量離心管，置于-80℃保存待檢。

2.血液采集及處理：分別用含乙二胺四乙酸（EDTA）的一次性采血管于治療前、治療14 d后無(wú)菌采集帶狀皰疹患者及對(duì)照組肘靜脈血8 ml，提取血漿和外周血淋巴細(xì)胞置于EP管內(nèi)，放入-80℃冰箱凍存待檢。

3.皰液及外周血淋巴細(xì)胞VZV DNA載量檢測(cè)：采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)皰液及外周血淋巴細(xì)胞VZV DNA載量，操作步驟參照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

4.血漿S100β蛋白和NSE檢測(cè)：應(yīng)用ELISA試劑盒檢測(cè)血漿S100β蛋白和NSE，操作步驟參照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

四、統(tǒng)計(jì)分析

用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS19.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)描述與分析。計(jì)量資料采用±s表示，資料組間比較采用t檢驗(yàn)。Pearson相關(guān)系數(shù)用于描述指標(biāo)間的相關(guān)性。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)果

一、VZV DNA載量表達(dá)比較

50例帶狀皰疹患者皰液均檢測(cè)出VZV DNA，載量為（374 879.34±117 681.59）拷貝∕ml。治療前18例（36%）外周血VZV DNA陽(yáng)性，載量為（18 974.45± 28 301.88）拷貝∕ml；治療后5例（10%）陽(yáng)性，載量為（239.91±872.25）拷貝∕ml。治療前皰液VZV DNA載量高于治療前、后外周血VZV DNA載量（Z值分別為-8.762，-9.039，均P＜0.05）。外周血治療前VZV DNA載量較治療后高（Z值為-3.724，P＜0.05）。18例治療前外周血VZV DNA陽(yáng)性的帶狀皰疹患者中，血與皰液VZV DNA載量呈正相關(guān)（r=0.631，P＜0.05）。見(jiàn)圖1。對(duì)照組血液中均未測(cè)出VZV。

圖1 18例帶狀皰疹患者治療前外周血與皰液水痘-帶狀皰疹病毒（VZV）DNA載量關(guān)系散點(diǎn)圖

二、血漿S100β、NSE水平比較

血VZV陽(yáng)性帶狀皰疹組治療前血漿S100β、NSE水平均較血VZV陰性帶狀皰疹患者高（P＜0.05），見(jiàn)表1。

表1 治療前血水痘-帶狀皰疹病毒（VZV）陽(yáng)性與陰性的帶狀皰疹患者血漿S100β和神經(jīng)元特異性烯醇化酶（NSE）水平比較（ng∕L，±s）

表1 治療前血水痘-帶狀皰疹病毒（VZV）陽(yáng)性與陰性的帶狀皰疹患者血漿S100β和神經(jīng)元特異性烯醇化酶（NSE）水平比較（ng∕L，±s）

分組血VZV陽(yáng)性患者血VZV陰性患者t值P值例數(shù)18 32 S100β 173.25±19.12 155.07±20.14 3.119＜0.05 NSE 171.127±14.885 155.162±20.869 3.136＜0.05

三、VZV DNA載量與治療前S100β、NSE的相關(guān)性分析

1.皰液VZV DNA載量與治療前S100β、NSE的相關(guān)性：50例帶狀皰疹患者皰液VZV DNA載量與治療前S100β、NSE呈正相關(guān)（圖2，3），相關(guān)系數(shù)r值分別為0.535、0.430，均P＜0.05。

圖2 50例帶狀皰疹患者皰液水痘-帶狀皰疹病毒DNA載量與治療前血漿S100β關(guān)系散點(diǎn)圖

圖3 50例帶狀皰疹患者皰液水痘-帶狀皰疹病毒DNA載量與治療前血漿神經(jīng)元特異性烯醇化酶（NSE）關(guān)系散點(diǎn)圖

2.治療前外周血VZV DNA載量與S100β、NSE的相關(guān)性：治療前外周血VZV DNA陽(yáng)性的18例帶狀皰疹患者血VZV DNA載量與血漿S100β、NSE呈正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)r值分別為0.711、0.645，均P＜0.05。見(jiàn)圖4，5。

討論

本研究50例患者中，治療前后血中VZV DNA陽(yáng)性率分別為36%和10%，表明VZV并不僅是沿神經(jīng)纖維移至皮膚，同時(shí)也可局部擴(kuò)散入血，導(dǎo)致部分患者治療前出現(xiàn)VZV DNA血癥，甚至治療后遺留VZV DNA血癥。帶狀皰疹患者皰液與血VZV DNA載量具有一定的相關(guān)性，皰液中病毒載量越高，血VZV DNA越高。但并非所有皰液VZV DNA載量高者血中均可測(cè)出VZV DNA。故引起帶狀皰疹患者出現(xiàn)VZV DNA血癥的原因除了與皰液VZV DNA載量高有關(guān)外，還可能有其他因素，如年齡、部位、免疫力、皮損面積、糖尿病以及合并腫瘤等［4］，需擴(kuò)大樣本量進(jìn)一步研究。

研究表明，血漿S100β蛋白的水平可初步反映神經(jīng)損傷的嚴(yán)重程度，S100β含量越高，神經(jīng)損傷越重，預(yù)后越差［2，5］。NSE作為神經(jīng)元的標(biāo)志酶，在絕大多數(shù)神經(jīng)損傷的疾病中神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞均會(huì)有不同程度的損傷［6］，兩者同時(shí)檢測(cè)，可增加敏感性和特異性。

本研究顯示，治療前血VZV陽(yáng)性患者血漿S100β、NSE均較陰性患者高，提示當(dāng)患者出現(xiàn)VZVDNA血癥時(shí)，神經(jīng)損傷程度可能更重。臨床上應(yīng)特別加強(qiáng)這類(lèi)患者的抗病毒治療和神經(jīng)損傷的監(jiān)測(cè)和隨訪，如腦電圖、CT、MRI以及腦脊液等檢查。

圖4 18例帶狀皰疹患者治療前外周血水痘-帶狀皰疹病毒DNA載量與血漿S100β關(guān)系散點(diǎn)圖

圖5 18例帶狀皰疹患者治療前外周血水痘-帶狀皰疹病毒DNA載量與血漿神經(jīng)元特異性烯醇化酶（NSE）關(guān)系散點(diǎn)圖

編后記 本文帶狀皰疹患者均應(yīng)用了核苷類(lèi)抗病毒藥和1周糖皮質(zhì)激素。關(guān)于糖皮質(zhì)激素在帶狀皰疹治療中的應(yīng)用，目前皮膚科學(xué)界有不同觀點(diǎn)。一般較公認(rèn)的觀點(diǎn)是：高齡帶狀皰疹患者、有基礎(chǔ)疾病或免疫受損（如應(yīng)用免疫抑制劑）或重癥帶狀皰疹（疼痛劇烈、皮損面積大或有出血壞死等表現(xiàn)）可以在充分抗病毒基礎(chǔ)上，根據(jù)病情短期使用系統(tǒng)性糖皮質(zhì)激素。

［1］Thelin EP,Johannesson L,Nelson D,et al.S100B is an important outcome predictor in traumatic brain injury［J］.J Neurotrauma, 2013,30（7）:519?528.DOI:10.1089∕neu.2012.2553.

［2］Beer C,Blacker D,Bynevelt M,et al.Systemic markers of inflammation are independently associated with S100B concentration:results of an observational study in subjects with acute ischaemic stroke［J］.J Neuroinflammation,2010,7:71. DOI:10.1186∕1742?2094?7?71.

［3］趙辨.中國(guó)臨床皮膚病學(xué)［M］.江蘇：江蘇科學(xué)技術(shù)出版社, 2010:394?398.

［4］Quinlivan ML,Ayres KL,Kelly PJ,et al.Persistence of varicella?zoster virus viraemia in patients with herpes zoster［J］.J Clin Virol,2011,50（2）:130?135.DOI:10.1016∕j.jcv.2010.10.014.

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［6］Undén J,Ingebrigtsen T,Romner B.Management of minor head injuries with the help of a blood test.S100B analysis can reduce the number of CT examinations and patient admissions［J］. Lakartidningen,2008,105（24?25）:1846?1848.

《中國(guó)皮膚性病學(xué)書(shū)目提要及著者傳略》征文及研修班招生

為了系統(tǒng)總結(jié)我國(guó)皮膚性病學(xué)文獻(xiàn)及介紹做出重要貢獻(xiàn)的著者，廖萬(wàn)清院士、禤國(guó)維國(guó)醫(yī)大師領(lǐng)銜編輯《中國(guó)皮膚性病學(xué)書(shū)目提要及著者傳略》。凡為該書(shū)提供書(shū)目及著者傳略者、向籌建的中國(guó)皮膚科博物館贈(zèng)送文物者，可獲贈(zèng)《中國(guó)皮膚科學(xué)史》（600元）1冊(cè)。

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Correlation of plasma levels of S100β protein and neuron?specific enolase with viral load in vesicle fluid and peripheral blood of patients with herpes zoster

Zhang Xinyue,Zhong Tingting,Zhong Jianqiao,Xu Yang
Department of Dermatology,The Affiliated Hospital of Southwest Medical University,Luzhou 646000, Sichuan,China（the current affiliation of the first author was Department of Dermatology,University?Town Hospital of Chongqing Medical University,Chongqing 401331,China）

Xu Yang,Email:xxff2007@163.com

Objective To detect the varicella?zoster virus（VZV）DNA load in vesicle fluid and peripheral blood,as well as plasma levels of S100β protein and neuron?specific enolase（NSE）in patients with herpes zoster before and after treatment,and to explore their correlations.Methods Vesicle fluid samples were collected before treatment,and peripheral blood samples before and after treatment from 50 inpatients with acute herpes zoster in the Department of Dermatology of the Affiliated Hospital of Southwest Medical University,and peripheral blood samples were also obtained from 20 healthy controls.Real?time fluorescence?based quantitative PCR（qRT?PCR）was performed to determine the viral load in the vesicle fluid and peripheral blood samples,and enzyme?linked immunosorbent assay（ELISA）to detect the plasma levels of S100β protein and NSE.Results VZV DNA was present in all the vesicle fluid samples,as well as in peripheral blood samples from 18 patients before treatment and 5 patients after treatment,but not found in any of the healthy controls.Positive correlation was found between the viral load in vesicle fluid and plasma levels of S100β protein and NSE（r=0.535,0.430,respectively,both P＜0.05）in the patients with acute herpes zoster.Before treatment,patients with VZV DNA in peripheral blood showed significantly increased plasma levels of S100β protein and NSE compared with those without（both P＜0.05）,and the viral load in peripheral blood was positively correlated with plasma levels of S100β protein and NSE（r= 0.711,0.645,respectively,both P＜0.05）.Conclusion VZV DNA is present in some patients with herpes zoster,and increased VZV DNA loads in the vesicle fluid and peripheral blood are related to elevated plasma levels of S100β protein and NSE before treatment.

Herpes zoster;Viral load;S100 proteins;Phosphopyruvate hydratase;Nerve injury; S100β

許飏，Email：xxff2007@163.com

10.3760∕cma.j.issn.0412?4030.2017.02.009

四川省衛(wèi)生計(jì)生委科研課題（16PJ556）；西南醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院課題（12306）

Fund programs:Scientific Research Project of Health and Family Planning Commission of Sichuan Province（16PJ556）;Project of the Affiliated Hospital of Southwest Medical University（12306）

2016?03?18）

（本文編輯：尚淑賢）