●羅玥佶 李妍 湯婷

委陵菜屬藥用植物三萜類(lèi)化合物的提取分離

●羅玥佶 李妍 湯婷

目的：研究委陵菜屬藥用植物三萜類(lèi)化合物的提取工藝條件。方法：采用微波萃取法，通過(guò)單因素試驗(yàn)對(duì)提取工藝條件進(jìn)行了優(yōu)化，比較不同因素對(duì)三萜化合物的提取效率的影響。結(jié)果：微波萃取法的最佳提取條件為:乙醇濃度70%，提取時(shí)間10min，提取溫度50℃，料液比1∶25(g/ml)結(jié)論：微波萃取法具有試劑用量少、時(shí)間短和提取效率高的優(yōu)點(diǎn)，是三萜類(lèi)化合物的最佳提取方法。

委陵菜；三萜類(lèi)化合物；微波萃取

委陵菜屬Potentilla L.藥用植物廣布北溫帶，全球有500余種，我國(guó)86種，全國(guó)各省均有分布[1]，在祖國(guó)傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中占有一定地位,是一種常見(jiàn)中草藥,《 中國(guó)藥典》2005年版收載。委陵菜性寒,味苦,具有清熱解毒,涼血止痢的作用。常用于赤痢腹痛、久痢不止、痔瘡出血、癰腫瘡毒等[2,3]。委陵菜的化學(xué)成分研究較少,文獻(xiàn)報(bào)道從委陵菜中分離得到的化合物主要有兒茶素,烏蘇酸,絲石竹皂苷元等化合物[4]。三萜類(lèi)化合物( triterpeno , ds)是由30個(gè)碳原子構(gòu)成的萜類(lèi)化合物,由6個(gè)異戊二烯單位連接而成,是類(lèi)異戊二烯代謝途徑的重要產(chǎn)物之一[5-6]。近年來(lái),由于色譜等分離技術(shù)、波譜測(cè)定技術(shù)等分析手段的迅速發(fā)展,使三萜類(lèi)化合物的提取分離及測(cè)定方法取得了可喜的研究展。本文將對(duì)委陵菜屬藥用植物三萜類(lèi)化合物的提取分離進(jìn)行研究。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

供試材料均經(jīng)湖南師范大學(xué)生命科學(xué)院劉克明教授鑒定。隨機(jī)選取5株以上成熟植株，取幼嫩葉片帶回實(shí)驗(yàn)室，80℃超低溫保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 實(shí)驗(yàn)儀器與試劑

主要儀器：TU-1901紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)；MAS-Ⅱ微波萃取儀;MODEL HH1006超聲波清洗器；RE52CS-2旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀；DHG-9246電熱恒鼓風(fēng)干燥箱；BS224S電子天平；數(shù)顯恒溫水浴鍋等。

主要藥品與試劑：齊墩果酸標(biāo)準(zhǔn)品、無(wú)水乙醇、冰醋酸、香草醛、高氯酸、乙酸乙酯均為分析純。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

(1)樣品的預(yù)處理。將試樣在40℃下烘干，得干燥樣品，24h后粉碎，過(guò)60目篩備用。

(2)標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備。精密稱取17.0mg齊墩果酸標(biāo)準(zhǔn)品，置于100ml容量瓶中，加無(wú)水乙醇溶解，定容，即得。

(3)測(cè)定波長(zhǎng)的選擇[7]。取齊墩果酸標(biāo)準(zhǔn)溶液1ml于具塞試管中，在60℃水浴上揮干乙醇，加入一定量新配制的濃度5%香草醛－冰醋酸溶液和高氯酸，搖勻，置于60℃水浴中反應(yīng)20min，取出，冰水浴冷卻后，加5ml冰醋酸，振蕩，靜置22min，以試劑溶液為空白，在490～600nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描，選擇最佳測(cè)定波長(zhǎng)。

(4)線性關(guān)系的考察。精確吸取齊墩果酸標(biāo)準(zhǔn)溶液0．2、0．4、0．6、0．8、1．0和1．2ml于6支試管中，按“1.3.3”方法操作在545 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。以齊墩果酸濃度(μg/ml)為橫坐標(biāo)，吸光度值為縱坐標(biāo)，計(jì)算回歸方程。

(5)樣品的含量測(cè)定。精確吸取齊墩果酸標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣品溶液適量，于具塞試管中，按“1.3.3” 方法操作，以試劑空白為參比液測(cè)定吸光度，以回歸方程計(jì)算含量。

1.3.6 微波萃取法

（1）乙醇濃度對(duì)提取效率的影響。稱取3g委陵菜粉末，固定提取功率，在料液比1∶25(g/ml)、提取時(shí)間10min和提取溫度為50℃的條件下，分別用濃度為40%、50%、60%、70%、80%的乙醇進(jìn)行提取，測(cè)定三萜含量，計(jì)算提取率。（2）提取時(shí)間對(duì)提取效率的影響。稱取3g委陵菜粉末，固定提取功率，在料液比1∶25(g/ml)、乙醇濃度 70% 和提取溫度為50℃的條件下，分別提取5、10、15、20和25min，然后測(cè)定三萜的含量，計(jì)算提取率。（3）提取溫度對(duì)提取效率的影響。稱取3g委陵菜粉末，固定提取功率，在料液比1∶25( g/ml)，乙醇濃度70%和提取時(shí)間10min的條件下，選擇溫度分別為30、40、50、60、70℃進(jìn)行提取，然后測(cè)定三萜化合物的含量，計(jì)算提取率。（4）料液比對(duì)提取效率的影響。稱取3g委陵菜粉末，固定提取功率，在乙醇濃度70%、提取溫度50℃和提取時(shí)間10 min的條件下，選擇料液比分別為1∶15、1∶20、1∶25、1∶30和1∶35(g/ml)進(jìn)行提取，然后測(cè)定三萜化合物含量，計(jì)算提取效率。

2 結(jié)果與分析

（1）測(cè)定波長(zhǎng)的選擇試驗(yàn)結(jié)果表明，齊墩果酸在545nm波長(zhǎng)處有最大吸收，且空白無(wú)干擾，故選545nm為測(cè)定波長(zhǎng)。（2）線性關(guān)系的考察計(jì)算得回歸方程,吸光度值與齊墩果酸濃度的線性關(guān)系良好。（3）乙醇濃度對(duì)提取效率的影響。隨著乙醇濃度的增加，提取率先增大后減小,當(dāng)乙醇濃度為70%時(shí)，提取率最大，故選擇最佳乙醇濃度70%。（見(jiàn)表1）（4）提取時(shí)間對(duì)提取效率的影響。當(dāng)提取時(shí)間超過(guò)10min后，隨著提取時(shí)間的增加，提取效率增加不明顯，故選擇10 min為最佳提取時(shí)間。（見(jiàn)表1）（5）提取溫度對(duì)提取效率的影響。溫度對(duì)提取效率影響較大，當(dāng)提取溫度為50℃時(shí)，提取率最高。故選擇50℃為最佳提取溫度。（見(jiàn)表1）（6）料液比對(duì)提取效率的影響。提取效率隨著料液比的增大而增大，當(dāng)料液比大于1∶25(g/ml)后，三萜的提取率增加趨勢(shì)減緩。為節(jié)省溶劑，便于回收，故選擇1∶25(g/ml)為最佳料液比。（見(jiàn)表1）。

表1 各單因素實(shí)驗(yàn)對(duì)委陵菜屬藥用植物三萜含量的影響

3 結(jié)論

微波萃取法提取委陵菜屬藥用植物三萜化合物具有提取時(shí)間短、節(jié)省溶劑用量少和提取效率高的優(yōu)點(diǎn)。微波萃取法提取委陵菜屬藥用植三萜化合物的最佳提取條件為∶乙醇濃度70%，提取溫度50℃，提取時(shí)間10 min，料液比1∶25( g /ml);在此條件下，委陵菜屬藥用植物三萜化合物的平均提取率為0.455%。

（作者單位：長(zhǎng)沙醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院）

[1]中國(guó)科學(xué)院《中國(guó)植物志》編輯委員會(huì).中國(guó)植物志(第三十七卷)[M].北京:科學(xué)出版社,1985.

[2]江蘇新醫(yī)學(xué)院.中藥大辭典[M].上海:上海科學(xué)技術(shù)出版社,1975:1369.

[3]中國(guó)藥典[S].一部.2005:149.

[4]陳芳群.委陵菜化學(xué)成分研究[J].華西藥學(xué)雜志,1989,4(1):6

[5]高錦明.植物化學(xué)[M].北京:科學(xué)出版社,2003,255-281.

[6]郝宏曹,朱旭芬,曾云中.類(lèi)異戊二烯的生物合成及調(diào)控[J].浙江大學(xué)學(xué)報(bào):農(nóng)業(yè)與生命科學(xué)版,2002,28(2):224-230.

[7]林倩倩，趙淑杰，朱 鶴.樹(shù)舌靈芝中三萜類(lèi)化合物的提取工藝研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué):2012，40(18):9669－9671，9804.

湯婷

湖南省教育廳科研項(xiàng)目（湘財(cái)教[2015]54號(hào)15C0154、湘財(cái)教[2014]85號(hào)14C0130）