高玉蓮，陳麗君，方明，徐亞吉，蘇雙，譚雅麗，梅雪然，李經(jīng)中

不同批次四川栽培白芍藥材的質(zhì)量分析研究

高玉蓮1，陳麗君1，方明1，徐亞吉1，蘇雙1，譚雅麗1，梅雪然1，李經(jīng)中2

目的：通過對不同批次四川渠縣栽培白芍進行薄層、水分、總灰分、浸出物、重金屬及有害元素（鉛、砷、汞、銅、鉻）檢驗，及芍藥苷含量測定，以評價藥材質(zhì)量。方法：選取10批次四川渠縣栽培白芍藥材，參照2015年版《中國藥典》一部項下檢驗方法，對其主要指標成分芍藥苷的含量，以及薄層、水分、總灰分、浸出物、重金屬及有害元素（鉛、砷、汞、銅、鉻）等檢查項進行檢驗。結果：白芍樣品中芍藥苷的含量為3.67±0.45%，水分的含量為12.78±0.82%，總灰分的含量為2.93±0.52%, 浸出物的含量為24.32±1.96%，均在標準范圍內(nèi)，且重金屬含量均低于其限量值。結論：四川栽培白芍中芍藥苷含量，以及薄層、水分、總灰分、浸出物、重金屬及有害元素（鉛、砷、汞、銅、鉻）等檢查項均符合2015年版《中國藥典》規(guī)定，質(zhì)量合格。

白芍；高效液相色譜法；芍藥苷；重金屬

白芍來源于毛茛科植物芍藥Paeonia lactifloria Pall.的干燥根[1]，具有養(yǎng)血調(diào)經(jīng)、斂陰止汗、平抑肝陽之效，常用于血虛萎黃，月經(jīng)不調(diào)，自汗，盜汗，脅痛，腹痛，四肢攣痛，頭痛眩暈[1]。其主要有效成分芍藥苷為解痙[2]、鎮(zhèn)痛[3]、抗炎[4,5]的活性成分。藥材白芍主產(chǎn)于浙江、安徽、四川、貴州、山東等地，均系栽培品。其中四川地區(qū)為三大栽培主產(chǎn)區(qū)之一，以中江所產(chǎn)白芍品質(zhì)最佳，渠縣、達州、廣安等地亦有大面積栽培[6]?，F(xiàn)階段，四川渠縣栽培白芍相關質(zhì)量分析研究鮮有報道。因此，本試驗參照《中華人民共和國藥典》（2015年版一部）所載白芍藥材質(zhì)量控制標準，對10批次四川渠縣栽培白芍藥材進行測定，研究結果可為完善四川栽培白芍質(zhì)量控制研究，以及川產(chǎn)白芍的臨床合理應用提供數(shù)據(jù)參考。

1 儀器與試藥

Waters 2695高效液相色譜儀（HPLC），包括4元泵系統(tǒng)、全自動脫氣單元、VWD檢測器單元和Waters 2695色譜工作站等（Waters Techology，USA）；SB-100 DT型超聲波清洗機（寧波新芝生物科技股份有限公司）；UPT-II-10T型超純水器（成都超純科技有限公司）；FA2004N型電子分析天平（上海精密科學儀器有限公司）。

栽培白芍藥材購自四川省達州市渠縣，經(jīng)成都大學醫(yī)學院鑒定為毛茛科植物芍藥（Paeonia lacti fl ora Pall.）的干燥根。芍藥苷對照品購自中國食品藥品檢定研究院。乙腈、磷酸為色譜純，水為超純水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 薄層色譜鑒別

取10批次栽培白芍藥材，粉碎，過40目篩，混勻。分別稱取約0.5 g，置于具塞三角瓶中，加乙醇10 mL，振搖5分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙醇l mL使溶解，作為供試品溶液。另取芍藥苷對照品，加乙醇制成每l mL含l mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法（2015年版《中國藥典》四部項下通則0502）試驗，吸取供試品溶液和芍藥苷對照品溶液各10 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（40：5：10：0.2）為展開劑，置展開缸中，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，于105℃加熱至斑點顯色清晰。置可見光下觀察，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色斑點，色譜圖見圖1。

圖1 栽培白芍藥材薄層色譜鑒別

2.2 水分、總灰分及浸出物檢查

2.2.1 水分 取10批次栽培白芍藥材，粉碎，過24目篩，混勻。照水分測定法（2015年版《中國藥典》四部項下通則0832第二法），分別稱取約2～5 g，精密稱定，平鋪于干燥至恒重的扁形稱量瓶中，厚度不超過5 mm，疏松供試品不超過10 mm，開啟瓶蓋在100～105℃干燥5 h，將瓶蓋蓋好，移置干燥器中，放冷30 min，精密稱定，再在上述溫度干燥1 h，放冷，稱重，連續(xù)兩次稱重的差異不超過5 mg為止。并根據(jù)減失的重量，計算供試品中含水量（%）。

2.2.2 總灰分 取10批次栽培白芍藥材，粉碎，過24目篩，混勻。照總灰分測定法（2015年版《中國藥典》四部項下通則2302），分別稱取約2～3 g，置熾灼至恒重的坩堝中，稱定重量，緩緩熾熱至完全炭化時，逐漸升高溫度至500～600℃，使完全灰化并至恒重，并根據(jù)殘渣重量，計算供試品中總灰分的含量（%）。

2.2.3 浸出物 取10批次栽培白芍藥材，粉碎，過24目篩，混勻。照水溶性浸出物測定法（2015年版《中國藥典》四部項下通則2201），分別稱取約4 g，精密稱定，置250 mL的錐形瓶中，精密加水100 mL，密塞，冷浸，于前6 h內(nèi)不斷振搖，再靜置18 h，用干燥濾器迅速濾過，精密量取續(xù)濾液20 mL，置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3 h，置干燥器中冷卻30 min，迅速精密稱定重量，并以干燥品計算供試品中水溶性浸出物的含量（%）。

上述三項檢查結果表明10批次栽培白芍藥材中水分、總灰分、浸出物含量均符合規(guī)定，見表2。

表2 10批次栽培白芍藥材中水分、總灰分及浸出物的含量測定結果

2.3 重金屬與有害元素檢查

參照2015年版《中國藥典》一部項下白芍藥材重金屬及有害元素測定方法，照電感耦合等離子體質(zhì)譜法（通則0412）測定。

2.3.1 標準品溶液的制備 分別精密量取鉛、砷、鎘、汞、銅單元素標準溶液適量，用10%硝酸溶液稀釋制成每1 mL分別含鉛、砷、鎘、汞、銅為1 μg、0.5 μg、1 μg、1 μg、10 μg的溶液，即得標準品貯備溶液。

精密量取鉛、砷、鎘、銅標準品貯備液適量，用10%硝酸溶液稀釋制成每1 mL含鉛、砷0 ng、1 ng、5 ng、10 ng、20 ng，含鎘0 ng、0.5 ng、2.5 ng、5 ng、10 ng，含銅0 ng、50 ng、100 ng、200 ng、500 ng的系列濃度混合溶液。另精密量取汞標準品貯備液適量，用10%硝酸溶液稀釋制成每1 mL分別含汞0 ng、0.2 ng、0.5 ng、1 ng、2 ng、5 ng的溶液，即得標準品溶液。

2.3.2 內(nèi)標溶液的制備 精密量取鍺、銦、鉍單元素標準溶液適量，用水稀釋制成每1 mL各含1 μg的混合溶液，即得內(nèi)標溶液。

2.3.3 供試品溶液的制備 取10批次栽培白芍藥材于60℃干燥2 h，粉碎成粗粉，取約0.5 g，精密稱定，置耐壓耐高溫微波消解罐中，加硝酸5～10 mL，密閉并進行消解。消解完全后，消解液冷卻至60℃以下，放冷，將消解液轉入50 mL量瓶中，用少量水洗滌消解罐3次，洗液合并于量瓶中，加入金單元素標準溶液（1 μg﹒mL-1）200 μg，用水稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。

2.3.4 樣品測定 測定時，63Cu、75As以72Ge作為內(nèi)標，114Cd以115In作為內(nèi)標，202Hg、208Pb以209Bi作為內(nèi)標，分別對各個濃度的標準液溶液進行測定，并計算得到樣品中鉛、砷、鎘、汞、銅5種元素的含量。結果表明10批次栽培白芍藥材中重金屬及有害元素含量均低于規(guī)定限度，符合標準，見表3。

表3 10批次栽培白芍藥材中重金屬及有害元素的含量測定結果

2.4 含量測定

參照2015年版《中國藥典》一部項下白芍藥材含量測定方法，采用高效液相色譜法（通則0512）測定。

2.4.1 色譜條件 色譜柱，Kromasil C18色譜柱（5 μm，250×4.6 mm）；流動相：乙腈-0.1%磷酸溶液（14：86）；流速：1.0 mL﹒min-1；柱溫：30℃；檢測波長：230 nm；進樣量：10 μL。

2.4.2 對照品溶液的制備 稱取芍藥苷對照品適量，精密稱定，加甲醇溶液制成每1 mL含60 μg的對照品溶液。

2.4.3 供試品溶液的制備 分別取10批不同批號（S1—S10）的栽培白芍藥材，粉碎，過40目篩，取0.1 g，精密稱定，置50 mL容量瓶，精密加入稀乙醇35 mL，超聲處理30 min（45 kHz），放冷，加稀乙醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，分別取1 mL樣品溶液過0.45 μm微孔濾膜，即得供試品溶液。

2.4.4 樣品測定 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，測定，記錄色譜圖，色譜峰見圖2，含量測定結果見表4。

表4 10批次栽培白芍藥材中芍藥苷的含量測定結果

圖2 栽培白芍藥材（S1）和芍藥苷對照品（St）的HPLC色譜圖

3 分析與討論

本文采用2015年版《中國藥典》一部項下對白芍藥材的質(zhì)量檢查方法對10批次四川達州市渠縣的栽培白芍進行品質(zhì)評價研究，結果表明其質(zhì)量控制成分芍藥苷的含量為3%～5%，是藥典中所規(guī)定的含量限度的2倍以上，10批次樣品的薄層色譜鑒別以及水分、總灰分、浸出物、重金屬及有害元素等檢查項均符合藥典規(guī)定，其中重金屬及有害元素（鉛、砷、鎘 、汞、銅）含量明顯低于藥典規(guī)定限度，具有較好藥材質(zhì)量和較高安全性，可用于藥物制劑的臨床應用。含量測定結果亦顯示栽培白芍以2～3年生長年限較為適宜，其主要有效成分芍藥苷含量較高。本試驗研究結果可為進一步完評價完善栽培白芍藥材質(zhì)量控制標準及其栽培技術發(fā)展，開展中藥臨床療效評價等研究提供依據(jù)。

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2015版一部[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社,2015,(1)：105.

[2] 彭珍香,黃海定,鄧時貴.芍藥苷對大鼠離體胸主動脈血管環(huán)的作用及其機制[J].中國實驗方劑學雜志,2011,17(7)：190-193.

[3] Yu H Y,Mu D G,Chen J,et al. Suppressive effects of intrathecal paeoni fl orin on bee venom- induced pain- related behaviors and spinal neuronal activation [J].Pharmacology,2011,88(3/4)：159.

[4] 劉玲,李瑞芳,王等,等.芍藥苷減輕LPS致小鼠急性腦損傷的抗炎機制[J].中藥材,2016,39(2)：411-414.

[5] 汪斌,朱向東,段永強,等.芍藥苷對潰瘍性結腸炎大鼠結腸組織病理形態(tài)及血清抗炎和促炎因子平衡的影響[J].中國中西醫(yī)結合消化雜志,2013,21(1)：1-4.

[6] 李遠志.川西地區(qū)芍藥資源與品質(zhì)評價[D].四川：四川大學,2006：11-17.

Quality analysis of cultivated Paeoniae Radix Alba in Sichuan/

GAO Yu-lian1, CHEN Li-jun1, FANG Ming1, XU Ya-ji1,SU Shuang1, TAN Ya-li1, MEI Xue-ran1, LI Jing-zhong2//(1.Metabonomics Synergy Innovation Laboratory, School of medicine of Chengdu University, Chengdu,610106, Sichuan; 2. Quxian Xinshi Gonghe Chinese Herbal Medicine Farmers' Professional Cooperatives, Dazhou 635200, Sichuan)

Objective: To evaluate the quality of different batches of cultivated Paeoniae Radix Alba in Sichuan by thin layer chromatography and investigating moisture, total ash, extract, the heavy metals and harmful elements . Method: The quality control methods of Chinese Pharmacopeias (2015) were used to test the contents of paeoni fl orin, moisture, total ash, extract, the heavy metals and harmful elements(lead, arsenic, mercury, copper and chromium) in 10 batches of samples. Result: The contents of paeoni fl orin, moisture, total ash, extract in samples were 3.67±0.45%, 12.78±0.82%, 2.93±0.52%, 24.32±1.96%, respectively,which were in the standard range And the heavy metals and harmful elements contents were lower than the limits prescribed in pharmacopoeia. Conclusion: All the quality inspection items of Paeoniae Radix Alba cultivated in Sichuan conform to the standards in Pharmacopeias of China(2015). The results show the quality of cultivated paeoniae Radix Alba in Sichuan is good.

Paeoniae Radix Alba; HPLC; paeoni fl orin; heavy metal

R282.2

A

1674-926X(2017)04-002-03

四川省科技廳科技支撐計劃項目（2014SZ0132）

1. 成都大學醫(yī)學院代謝組學協(xié)同創(chuàng)新實驗室，四川 成都 610106; 2. 渠縣新市貢和中草藥農(nóng)民專業(yè)合作社，四川 達州 635200

高玉蓮，女，臨床醫(yī)學本科在讀

Email：1436513052@qq.com

方明，男，講師，從事生理學教學科研工作

Email：383962472@qq.com

2016-09-26

（責任編輯：胡慧玲）