孫小娟+李彬+余丹純+黃耀星

【摘要】 目的 探討β防御素-2（HBD-2）在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)與樹(shù)突狀細(xì)胞（DCs）浸潤(rùn)的相關(guān)性。方法 30例結(jié)腸腺癌以及結(jié)腸腺瘤患者作為研究組， 30例正常健康者作為對(duì)照組。運(yùn)用免疫組化法檢測(cè)HBD-2和S100蛋白在兩組人員結(jié)腸黏膜組織中的表達(dá)情況， 計(jì)算陽(yáng)性率， 分析HBD-2與DCs浸潤(rùn)的相關(guān)性。結(jié)果 研究組患者結(jié)腸黏膜組織中HBD-2和S100蛋白表達(dá)的陽(yáng)性率分別為73.33%和80.00%， 其中結(jié)腸腺癌患者中HBD-2和S100蛋白表達(dá)的陽(yáng)性率分別為78.26%和82.61%， 結(jié)腸腺瘤患者分別為57.14%和71.43%；對(duì)照組結(jié)腸黏膜組織中HBD-2和S100蛋白表達(dá)的陽(yáng)性率分別為23.33%和16.67%， 觀(guān)察組與對(duì)照組比較， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；HBD-2表達(dá)與DCs浸潤(rùn)呈顯著的正相關(guān)（r=0.742， P<0.05）。結(jié)論 HBD-2和S100蛋白在結(jié)腸腺癌和結(jié)腸腺瘤組織中的表達(dá)水平顯著高于正常結(jié)腸組織；HBD-2表達(dá)與DCs浸潤(rùn)有呈著的正相關(guān)。

【關(guān)鍵詞】 結(jié)腸癌；β防御素-2 ；樹(shù)突狀細(xì)胞；相關(guān)性

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2017.26.058

結(jié)腸癌是危害人體身心健康的常見(jiàn)惡性腫瘤， 近年來(lái)， 其發(fā)病率和死亡率已高居惡性腫瘤的第二位[1]。HBD-2和DCs分別為重要的內(nèi)源性抗菌肽和抗原呈遞細(xì)胞， 兩者均能影響腫瘤的發(fā)生發(fā)展， 其中， 最主要的作用是激活免疫細(xì)胞， 發(fā)揮對(duì)抗腫瘤的活性， 一直是國(guó)內(nèi)外研究的重點(diǎn)[2-4]。由于S100蛋白特異性表達(dá)于腫瘤浸潤(rùn)的DCs中， 可用來(lái)衡量DCs的浸潤(rùn)程度[5]。目前對(duì)于HBD-2 在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)及與DCs浸潤(rùn)相關(guān)性的研究鮮有報(bào)道。本文收集結(jié)腸腺癌與結(jié)腸腺瘤患者和健康人群各30例， 通過(guò)檢測(cè)HBD-2的表達(dá)水平及DCs浸潤(rùn)程度， 探討在結(jié)腸腺癌和結(jié)腸腺瘤組織中兩者的相關(guān)性， 以及結(jié)腸癌與患者體內(nèi)的免疫反應(yīng)之間的關(guān)聯(lián)， 以期為結(jié)腸癌的免疫療法提供一定的理論依據(jù)。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選取2014年2月～2016年2月在本院檢查又經(jīng)病理科確診的23例結(jié)腸腺癌患者、7例結(jié)腸腺瘤患者作為研究組， 男18例、女12例， 年齡18～70歲， 平均年齡（50.34±8.98）歲。所有患者無(wú)其他器質(zhì)性疾病， 且均未接受相應(yīng)的臨床治療。另選取同期30例在本院檢查結(jié)腸未見(jiàn)異常、無(wú)腫瘤、無(wú)炎癥性疾病史的正常健康者作為對(duì)照組， 男17例、女13例， 年齡18～70歲， 平均年齡（51.67±7.35）歲。兩組年齡、性別等一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）， 具有可比性。

1. 2 方法 兩組均采用腸鏡活檢取材， 組織標(biāo)本采用多聚甲醛固定， 石蠟包埋處理。運(yùn)用免疫組化EnVision二步法， 檢測(cè)兩組結(jié)腸組織中HBD-2 和S100 蛋白的表達(dá)情況， 主要步驟如下：收集標(biāo)本-切片-脫蠟和水化處理-室溫孵育-PBS沖洗-滴加一抗（兔抗人HBD-2 多克隆抗體、兔抗人S100 多克隆抗體）-室溫孵育-PBS緩沖液浸泡-滴加ChemMate Envision+/HRP-室溫孵育-PBS緩沖液浸泡-滴加DAB顯色劑-室溫孵育-蒸餾水沖洗-蘇木素復(fù)染-蒸餾水洗滌-各級(jí)酒精脫水-二甲苯浸泡-封片膠封片；陰性對(duì)照為PBS， 陽(yáng)性對(duì)照為已知陽(yáng)性片。分別以細(xì)胞漿、細(xì)胞核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒染色作為判斷HBD-2、S100蛋白陽(yáng)性表達(dá)的依據(jù)， 在每一切片中觀(guān)察30個(gè)高視野（×400）， 均為陽(yáng)性細(xì)胞最多區(qū)域， 將每一個(gè)高視野中的陽(yáng)性細(xì)胞個(gè)數(shù)<5個(gè)記為陰性（-），≥5 個(gè)記為陽(yáng)性（+）[5]。

1. 3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ x-±s）表示， 采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)；相關(guān)性采用Spearman法分析。P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2. 1 兩組HBD-2表達(dá)水平對(duì)比結(jié)果 研究組患者結(jié)腸黏膜組織中HBD-2和S100蛋白表達(dá)的陽(yáng)性率分別為73.33%和80.00%， 其中結(jié)腸腺癌患者中HBD-2和S100蛋白表達(dá)的陽(yáng)性率分別為78.26%和82.61%， 結(jié)腸腺瘤患者分別為57.14%和71.43%；對(duì)照組結(jié)腸黏膜組織中HBD-2和S100蛋白表達(dá)的陽(yáng)性率分別為23.33%和16.67%， 觀(guān)察組與對(duì)照組比較， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=15.0167、24.0934， P<0.05）。見(jiàn)表1。

2. 2 研究組腸組織HBD-2 和S100 陽(yáng)性DCs相關(guān)性分析 在研究組患者中， HBD-2 表達(dá)與和S100陽(yáng)性DCs浸潤(rùn)呈正相關(guān)（r=0.742， P<0.05）。見(jiàn)表2。

3 討論

抗菌肽是生物體內(nèi)存在的重要的免疫活性物質(zhì)， 主要參與黏膜免疫反應(yīng)， 防御素家族是目前存在于人體中的兩大類(lèi)抗菌肽之一， 其中β防御素是該家族中的重要分支[4]。HBD-2一般廣泛表達(dá)于黏膜上皮細(xì)胞， 具有廣譜抗菌、抗病毒等生理活性， 正常狀態(tài)時(shí)表達(dá)較少， 但當(dāng)機(jī)體受到炎癥刺激時(shí)， 能夠大量表達(dá)， 進(jìn)而發(fā)揮重要的免疫防御作用[6]。近年來(lái)研究表明， HBD-2是機(jī)體免疫細(xì)胞的趨化因子， 能夠趨化誘導(dǎo)多種免疫細(xì)胞， 對(duì)DCs也具有較強(qiáng)的趨化作用， DCs在機(jī)體的免疫反應(yīng)中主要發(fā)揮呈遞抗原的作用， 通過(guò)激活機(jī)體T細(xì)胞對(duì)抗腫瘤傷害， 因此DCs的浸潤(rùn)可以用來(lái)標(biāo)記腫瘤的發(fā)生發(fā)展， 其浸潤(rùn)程度可通過(guò)檢測(cè)S100蛋白的表達(dá)情況進(jìn)行標(biāo)明[7， 8]。

本研究結(jié)果表明， 研究組患者結(jié)腸黏膜組織中HBD-2和S100蛋白表達(dá)的陽(yáng)性率分別為73.33%和80.00%， 其中結(jié)腸腺癌患者中HBD-2和S100蛋白表達(dá)的陽(yáng)性率分別為78.26%和82.61%， 結(jié)腸腺瘤患者分別為57.14%和71.43%；對(duì)照組結(jié)腸黏膜組織中HBD-2和S100蛋白表達(dá)的陽(yáng)性率分別為23.33%和16.67%， 觀(guān)察組與對(duì)照組比較， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；HBD-2表達(dá)與DCs浸潤(rùn)呈顯著的正相關(guān)（r=0.742， P<0.05）。提示結(jié)腸腺癌和結(jié)腸腺瘤患者在未經(jīng)治療時(shí)， 機(jī)體已經(jīng)啟動(dòng)免疫防御機(jī)制， 且DCs浸潤(rùn)程度越高， HBD-2表達(dá)陽(yáng)性率越高， 此時(shí)機(jī)體防御能力越強(qiáng)， 對(duì)腫瘤的對(duì)抗作用越顯著。本研究結(jié)果， 與文獻(xiàn)報(bào)道相一致[3， 9]。

綜上所述， 結(jié)腸腺癌和結(jié)腸腺瘤組織中HBD-2和S100蛋白表達(dá)相對(duì)于正常結(jié)腸組織顯著增高， 結(jié)腸腺癌和結(jié)腸腺瘤患者通過(guò)增加HBD-2的表達(dá)和DCs浸潤(rùn)共同參與對(duì)癌腫的免疫反應(yīng)， 且DCs的浸潤(rùn)能增強(qiáng)HBD-2的表達(dá)。

參考文獻(xiàn)

[1] 姜毅楠， 蔡遜， 馬丹丹， 等. 趨化因子受體1在人結(jié)腸癌中的表達(dá)及其與腫瘤移的相關(guān)性研究. 華中科技大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版）， 2014， 43（4）：427-430.

[2] 田豐， 周凱， 王龍信. 樹(shù)突狀細(xì)胞亞群與腫瘤免疫治療. 醫(yī)學(xué)綜述， 2015（11）：1967-1969.

[3] 周海， 衛(wèi)麗， 馬萍. 人β-防御素-2的研究進(jìn)展. 重慶醫(yī)學(xué)， 2014（11）：1386-1387.

[4] 馬丹， 楊帆， 方軍，等. 腸道菌群及防御素在結(jié)直腸癌發(fā)病中的作用. 世界華人消化雜志， 2015（33）：5275-5281.

[5] 張子杰. 結(jié)腸癌組織VEGF表達(dá)與樹(shù)突狀細(xì)胞浸潤(rùn)的臨床意義及與血清VEGF濃度及其活化水平的相關(guān)性. 中國(guó)免疫學(xué)雜志， 2015（9）：1257-1261.

[6] 拜明軍， 藍(lán)程， 韓向陽(yáng). 人β防御素-2（HBD-2）及LL-37在潰瘍性結(jié)腸炎中的表達(dá). 結(jié)直腸肛門(mén)外科， 2016， 22（S1）：14-15.

[7] 王濤， 王爭(zhēng)霞. 新輔助治療對(duì)直腸癌腫周?chē)?rùn)淋巴細(xì)胞和樹(shù)突狀細(xì)胞水平的影響及意義. 中華腫瘤防治雜志， 2016， 23（S2）：202-203.

[8] 葉衛(wèi)華， 焦榮紅， 韓若凌， 等. 直腸腔內(nèi)超聲評(píng)價(jià)新輔助治療對(duì)直腸癌浸潤(rùn)分期的影響. 臨床超聲醫(yī)學(xué)雜志， 2013， 15（5）：355-356.

[9] 陳楚杰. 細(xì)胞周期相關(guān)蛋白在人結(jié)腸癌組織中的表達(dá)及其臨床意義的探討. 廣西醫(yī)科大學(xué)， 2017.

[收稿日期：2017-07-27]endprint