李田田， 花朋朋， 黃梓芮， 潘雨陽， 賈瑞博， 陳弘培， 劉 斌，2

（1. 福建農(nóng)林大學(xué)食品科學(xué)學(xué)院，海洋研究中心，福建福州 350002；2. 國家菌草工程技術(shù)研究中心，福建福州 350002）

頂空固相微萃取結(jié)合氣質(zhì)聯(lián)用分析樹舌靈芝的化學(xué)成分

李田田1， 花朋朋1， 黃梓芮1， 潘雨陽1， 賈瑞博1， 陳弘培1，*劉 斌1，2

（1. 福建農(nóng)林大學(xué)食品科學(xué)學(xué)院，海洋研究中心，福建福州 350002；2. 國家菌草工程技術(shù)研究中心，福建福州 350002）

采用頂空固相微萃取-氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)對樹舌靈芝子實(shí)體進(jìn)行化學(xué)成分的分析鑒定，經(jīng)質(zhì)譜計(jì)算機(jī)系統(tǒng)檢索及核對Nist2008標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜圖，用峰面積歸一化法測定了各成分的相對百分含量，并對其主要成分進(jìn)行分類和分析。結(jié)果表明，共鑒定出相對含量≥0.06的化學(xué)成分60種，占總量的93.4%，包括醇類12種（占76.834%）、醛酮類8種（占7.849%）、烴類及其衍生物18種（占4.775%）、酸類12種（占2.658%）、脂類6種（占1.154%）、其他類化合物2種（0.128%）。

樹舌靈芝；子實(shí)體；頂空固相微萃取-氣質(zhì)聯(lián)用；化學(xué)成分分析

（1. Marine Research Center， College of Food Science， Fujian Agriculture and Forestry University， Fuzhou， Fujian 350002，China； 2. National Engineering Technology Research Center of JUNCAO，F(xiàn)uzhou， Fujian 350002， China）

樹舌靈芝（Ganoderma applanatumn） 別名樹舌、樹舌扁靈芝、扁目靈芝，屬真菌門、擔(dān)子菌亞門、層菌綱、多孔菌科、靈芝屬[1]。樹舌靈芝在我國分布十分廣泛，主要在東北、西北、華東、華南、西南各個(gè)省區(qū)[2]。研究表明，樹舌靈芝具有抗癌、抗腫瘤、抗氧化、防衰老、調(diào)節(jié)免疫力、消炎抗菌、降血糖和保肝等生物活性[3-4]。但目前研究主要圍繞樹舌靈芝的部分活性物質(zhì)[5-7]，而關(guān)于樹舌靈芝子實(shí)體化學(xué)成分分析的研究報(bào)道較少。試驗(yàn)以樹舌靈芝子實(shí)體為研究對象，采用頂空固相微萃取-氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)對樹舌靈芝的化學(xué)成分進(jìn)行研究，旨在為樹舌靈芝在保健食品及生物醫(yī)藥等領(lǐng)域的進(jìn)一步開發(fā)利用提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。固相微萃取技術(shù)與蒸餾萃取法[8]、超臨界流體萃取[9]等傳統(tǒng)的風(fēng)味抽提技術(shù)[10]相比，操作簡便、敏捷，能減少試劑消耗，可直接聯(lián)用氣質(zhì)色譜，極大地提高萃取效率[11]。固相微萃取包括直接固相微萃取（DI-SPME） 和頂空固相微萃?。℉S-SPME），而應(yīng)用最廣的當(dāng)屬HS-SPME。HSSPME技術(shù)是將萃取頭置供試品上方的蒸氣相中萃取、吸附組分，較DI-SPME的優(yōu)勢在于[12]以下3點(diǎn)：①能消除靜態(tài)水層對萃取的影響而使被測物的分散能力大大提高；②避免將水蒸氣帶入色譜柱，延長其使用壽命；③能使SPME技術(shù)應(yīng)用到組成較為復(fù)雜的樣本中去，更適于分析氣態(tài)、液態(tài)和固態(tài)樣品中的揮發(fā)性成分。

1 材料與方法

樹舌靈芝子實(shí)體，華益靈芝生物科技開發(fā)有限公司提供，經(jīng)福建農(nóng)林大學(xué)國家菌草工程技術(shù)研究中心鑒定為樹舌靈芝，在40 ℃條件下烘干，粉碎后得到樹舌靈芝細(xì)粉，備用；酒石酸、無水乙醇為國藥分析純化學(xué)試劑；2 -辛醇（內(nèi)標(biāo)）、丁酸乙酯、乙酸異戊酯、異戊醇、辛酸乙酯、癸酸乙酯和乙酸苯乙酯7種標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)為色譜純化學(xué)標(biāo)樣，美國Sigma公司提供。

固相微萃取裝置、50/30 μm DVB/CAR/PDMS（二乙烯基苯/碳分子篩/聚二甲基硅氧烷） 萃取頭、20 mL頂空鉗口樣品瓶，美國SUPELCO公司產(chǎn)品；電熱磁力攪拌器，日本島津公司產(chǎn)品；7890A/5975MSD型氣質(zhì)聯(lián)用儀、DB-5MS型彈性石英毛細(xì)管管柱（30 m×0.25 mm，膜厚度0.25 μm），美國Agilent公司產(chǎn)品；EO2140型電子分析天平，賽多利斯科學(xué)儀器北京有限公司產(chǎn)品；電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱，蘇州德瑞普烘箱制造有限公司產(chǎn)品；臺式高速冷凍離心機(jī)，凱特試驗(yàn)儀器有限公司產(chǎn)品；KQ-500VDE型超聲波清洗儀，昆山舒美超聲儀器有限公司產(chǎn)品；TYPEFDU-1000型冷凍干燥機(jī)，上海億培實(shí)業(yè)有限公司產(chǎn)品。

1.2.1 樹舌靈芝子實(shí)體的提取

取樹舌靈芝子實(shí)體磨粉，稱30 g加入到20倍體積的生理鹽水溶液中，超聲（時(shí)間30 min，溫度60 ℃，功率300 W）提取，經(jīng)離心、抽濾、濃縮和凍干制備， 待用[13]。

1.2.2 頂空固相微萃取方法

取樣前先將固相微萃取頭在氣相色譜進(jìn)樣口老化1 h，老化溫度250 ℃。取1.5 g用無菌水定容至6 mL，迅速將其裝入20 mL的鉗口樣品瓶中，2.0 g NaCl，5 μL內(nèi)標(biāo)溶液（2 -辛醇濃度為1 mg/L） 上部留有約2.5 cm 左右的空間，用封蓋器封好。于40 ℃磁力攪拌器上加熱平衡15 min后，將老化好的萃取頭插入樣品瓶頂空部分，于40 ℃條件下萃取40 min[14-17]。

1.2.3 GC-MS分析

將萃取頭抽出插入氣相色譜儀進(jìn)樣口，于240 ℃解析2 min，進(jìn)行GC-MS檢測分析。氣相色譜-質(zhì)譜條件：采用載氣為高純氦氣，流速為1 mL/min；程序升溫：起始溫度為40 ℃，以每分鐘5 ℃升溫到150 ℃，保持3 min，再以每分鐘5 ℃升溫到250 ℃，進(jìn)樣口溫度250 ℃。質(zhì)譜條件：EI離子源，電子能量70 eV，質(zhì)量范圍35～350 amu。由GC-MS得到的譜圖，經(jīng)計(jì)算機(jī)在NIST 2005標(biāo)準(zhǔn)譜庫的檢索，并結(jié)合人工圖譜解析及保留指數(shù)資料的查詢，對樹舌靈芝的主要化學(xué)成分進(jìn)行鑒定，同時(shí)采用內(nèi)標(biāo)法進(jìn)行定量，得到各組分的質(zhì)量濃度。

2 結(jié)果與分析

按照上述條件對樹舌靈芝提取樣品進(jìn)行分析，獲得其樹舌靈芝子實(shí)體提取物總離子圖?？傠x子流圖中每一個(gè)峰表示樣品的一個(gè)組分，由每個(gè)峰可以得到相應(yīng)化合物的質(zhì)譜圖，對圖1中各峰經(jīng)質(zhì)譜計(jì)算機(jī)系統(tǒng)檢索及核對Nist 2008標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜圖，結(jié)合保留時(shí)間和MS分別對各峰加以確認(rèn)，鑒定出其中的60種化合物，用峰面積歸一化法測定了各化學(xué)成分相對的百分含量（組分峰面積占總峰面積的百分比），鑒定的化合物占總成分的93.4%。

樹舌靈芝子實(shí)體樣品總離子流色譜見圖1，樹舌靈芝子實(shí)體的化學(xué)成分見表1。

圖1 樹舌靈芝子實(shí)體樣品總離子流色譜

由表1和表2可知，該樣品化合物類型涉及醇類、醛酮類、烴類及其衍生物、酸類、脂類和其他類等多種化合物。其中，醇類化合物有12種（占76.834%），醛酮類、烴類及其衍生物、酸類、脂類和其他類化合物分別有8種（占7.849%）、18種（占4.775%）、 12種（占2.658%）、 6種（占1.154%）、 2種（0.128%）。

樹舌靈芝子實(shí)體的主要成分分析見表2。

3 結(jié)論

采用峰面積歸一化法測定了各化學(xué)成分相對的百分含量（組分峰面積占總峰面積的百分比）后，在樹舌靈芝子實(shí)體中鑒定出主要的60種化合物，總量占樹舌靈芝子實(shí)體總化學(xué)成分的93.4%。經(jīng)分類得，該60種化合物類型涉及醇類、醛酮類、烴類及其衍生物、酸類、脂類和其他類等多種化合物，其含量占總量的比例分別為76.834%，7.849%，4.775%，2.658%，1.154%，0.128%，說明樹舌靈芝是極具開發(fā)潛力的寶貴資源，為進(jìn)一步研究樹舌靈芝提供了根據(jù)。

表1 樹舌靈芝子實(shí)體的化學(xué)成分

表2 樹舌靈芝子實(shí)體的主要成分分析

[1]劉中華，黃桃閣，胡炳義，等.樹舌靈芝菌絲體多糖提取條件的研究 [J].食品研究與開發(fā)，2010，31（5）：48-51.

[2]劉英杰，翟鳳艷，宋慧，等.樹舌靈芝菌絲體不皂化物GC-MS分析 [J].資源開發(fā)與市場，2011，27（1）：4-5.

[3]張文彭，陳康林.藥用真菌治腫瘤 [M].北京：中國中醫(yī)藥出版社，2014：39-41.

[4]M S Shiao.Natural products of the medicinal fungus Ganoderma lucidum： occurrence， biological activities， and pharmacological functions[J].Chemical Record， 2003（3）： 172-173.

[5]劉海良.樹舌靈芝活性物質(zhì)提取及抗腫瘤活性研究 [D].青島：青島農(nóng)業(yè)大學(xué)，2009.

[6]周忠波，馬紅霞，圖力古爾，等.樹舌靈芝化學(xué)成分的初步研究 [J].塔里木大學(xué)學(xué)報(bào)，2006，18（4）：74-75.

[7]馬述清.樹舌靈芝部分提取物的分離及其藥理活性研究 [D].長春：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)，2008.

[8]羅凱，朱琳，闞建全.水蒸汽蒸餾、溶劑萃取、同時(shí)蒸餾萃取法提取花椒揮發(fā)油的效果比較 [J].食品科技，2012（10）： 234-236.

[9]周永生，顧浩.超臨界CO2萃取-氣相色譜法測定膨化食品中反式脂肪酸 [J].分析科學(xué)學(xué)報(bào)，2017，33（1）：126-130.

[10]陳體強(qiáng)，吳錦忠，徐潔，等.靈芝孢子油脂肪酸組分的分析 [J].菌物研究，2005（2）：35-38.

[11]郝紅梅，張生萬，郭彩霞，等.頂空固相微萃取-氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法分析山楂果醋易揮發(fā)成分 [J].食品科學(xué)， 2016， 37（2）： 138-141.

[12]劉源，周光宏，徐幸蓮.固相微萃取及其在食品分析中的應(yīng)用 [J].食品與發(fā)酵工業(yè)，2003，29（7）：83-87.

[13]賈瑞博，趙慧，劉凱麗，等.樹舌靈芝總?cè)铺崛」に噧?yōu)化及其抗氧化作用研究 [J].應(yīng)用化工，2016（6）：1 030-1 035.

[14]蔣雅君，呂旭聰，鄭亞鳳，等.紅曲黃酒傳統(tǒng)釀造用曲的特征揮發(fā)性成分分析 [EB/OL].北京：中國科技論文在線[2017-01-26].http://www.paper.edu.cn/releasepaper/content/201701-304.

[15]韓艾利，李立祥，徐小倩，等.安茶品質(zhì)與化學(xué)成分分析 [J].茶業(yè)通報(bào)，2016，38（2）：79-83.

[16]冉堅(jiān)強(qiáng)，金軍，李麗君，等.黔產(chǎn)香料三柰石油醚部位化學(xué)成分的GC-MS分析 [J].中國調(diào)味品，2017（5）：111-114.

[17]劉盼盼，鄭鵬程，龔自明，等.青磚茶的香氣成分分析 [J].食品科學(xué)，2017，38（8）：164-170.

[18]謝煥山，張俊鵬，范景皓，等.鴉膽子揮發(fā)油化學(xué)成分的GC-MS分析 [J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2017，13（8）：29-30.

[19]卜慶華，羅奇，程永現(xiàn)，等.樹舌靈芝的化學(xué)成分及新化合物的絕對構(gòu)型測定 [J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2016（5）： 650-654.◇

S718.43

A

10.16693/j.cnki.1671-9646（X）.2017.10.011

1671-9646（2017） 10a-0037-04

2017-08-05

福建省科技重大專項(xiàng)（2014NZ2002-1）；福建省海洋與漁業(yè)廳（閩海洋高新[2014]17號）；福建省高水平大學(xué)建設(shè)項(xiàng)目（612014043）；國家科技支撐計(jì)劃 （2014BAD15B01）。

李田田（1994— ），女，在讀碩士，研究方向?yàn)槭称飞锛夹g(shù)。

*通訊作者：劉 斌（1969— ），男，博士，教授，博士生導(dǎo)師，研究方向?yàn)槭称飞锛夹g(shù)。