王靈敏 孟小莽 唐榮芳

（河北省石家莊市種子管理站，石家莊 050051）

海南玉米種子純度田間種植鑒定技術(shù)要點(diǎn)

王靈敏 孟小莽 唐榮芳

（河北省石家莊市種子管理站，石家莊 050051）

隨著種子管理工作的加強(qiáng)，石家莊市已經(jīng)把玉米種子純度海南種植鑒定作為雜交玉米種子質(zhì)量管理的重要措施，于2015年在海南省三亞市檳榔村建成農(nóng)作物種子海南種植鑒定基地，并連年在基地安排玉米種子純度海南種植鑒定工作。就玉米種子純度海南種植鑒定工作談幾點(diǎn)技術(shù)要點(diǎn)。

海南；玉米種子；樣品；種植鑒定

新《種子法》第四十七條規(guī)定：“農(nóng)業(yè)、林業(yè)主管部門(mén)可以采用國(guó)家規(guī)定的快速檢測(cè)方法對(duì)生產(chǎn)經(jīng)營(yíng)的種子品種進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果可以作為行政處罰依據(jù)。”[1]這一條是對(duì)快速檢測(cè)方法法律地位的肯定。但是，這不意味著玉米種子純度田間小區(qū)種植鑒定方法不重要、過(guò)時(shí)了。理由一，當(dāng)對(duì)采用國(guó)家規(guī)定的SSR和SNP分子標(biāo)記快速檢測(cè)法的檢測(cè)結(jié)果產(chǎn)生異議時(shí)，仍須用田間種植鑒定法進(jìn)行復(fù)檢。理由二，國(guó)家規(guī)定的快速檢測(cè)方法SSR和SNP分子標(biāo)記技術(shù)的應(yīng)用受到設(shè)備、技術(shù)、人員等因素的影響，還達(dá)不到全面普及。在這種情況下田間種植鑒定法仍是目前應(yīng)用最普遍、最準(zhǔn)確、最權(quán)威的純度鑒定方法。以下就海南玉米種子純度田間種植鑒定的技術(shù)要點(diǎn)進(jìn)行介紹。

1 對(duì)供檢樣品登記、排序

根據(jù)品種名稱(chēng) 、種子來(lái)源（生產(chǎn)商及經(jīng)銷(xiāo)商、經(jīng)營(yíng)門(mén)市等）、檢測(cè)日期、種子批號(hào)、種子質(zhì)量指標(biāo)標(biāo)注值進(jìn)行登記，為便于同一品種不同樣品間的比較，按品種排序，使同一品種的樣品鄰近種植，依據(jù)此排序號(hào)編寫(xiě)試樣編號(hào)。

2 收集品種特征特性的描述

按農(nóng)作物種子檢驗(yàn)規(guī)程來(lái)講，應(yīng)該把親本及雜交種的標(biāo)準(zhǔn)樣品作為對(duì)照。但是因標(biāo)準(zhǔn)樣品的局限性，市級(jí)種子管理站鑒定的主要依據(jù)是品種審定公告，需要收集品種特征特性相關(guān)資料，包括葉鞘顏色、葉緣色、葉形、株型、株高、穗位高、花絲顏色、雄穗及分枝多少、花藥顏色、全株葉片數(shù)、穗型、穗軸顏色、穗長(zhǎng)、穗行數(shù)、禿頂度、粒形、粒色、千粒重及抗逆性等相關(guān)描述。

3 確定種植樣品的粒數(shù)

在石家莊市多年的同步種植鑒定試驗(yàn)中，純度標(biāo)注值為96.0%的樣品播種110粒，在花期鑒定時(shí)據(jù)統(tǒng)計(jì)每年或多或少會(huì)出現(xiàn)個(gè)別樣品植株數(shù)量不足100株。這些樣品的鑒定株數(shù)就不能滿(mǎn)足GB/T3543.5檢驗(yàn)規(guī)程上規(guī)定的4N原則。

為保證種植株數(shù)符合4N原則，種植樣品粒數(shù)應(yīng)為4N/發(fā)芽率。因鑒定的樣品量較多，每個(gè)樣品發(fā)芽率不一，按4N/發(fā)芽率計(jì)算的每個(gè)樣品需要播種粒數(shù)就不盡相同，發(fā)芽率越高種植粒數(shù)相應(yīng)變少。為便于播種和管理，在純度標(biāo)注值一致的情況下將種植鑒定樣品播種數(shù)量統(tǒng)一，以種子樣品中需要播種最多的粒數(shù)作為種植鑒定樣品最低播種數(shù)量。按發(fā)芽率標(biāo)注最低值85%[2]，如果樣品中純度標(biāo)注值為96.0%，4N為100，4N/發(fā)芽率為118粒，建議播種120粒；純度標(biāo)注值為97.0%，4N為134，4N/發(fā)芽率為158粒，建議播種180粒；純度標(biāo)注值為98.0%，40N為200，4N/發(fā)芽率為236粒，建議播種240粒；純度標(biāo)注值為99.0%，4N為400，4N/發(fā)芽率為471粒，建議播種480粒。

4 隨機(jī)數(shù)取種植樣品并編號(hào)

從供檢樣品中隨機(jī)數(shù)取種植鑒定試樣，依據(jù)供檢樣品的排序號(hào)編寫(xiě)試樣編號(hào)。為使有限數(shù)量的種子有較好的代表性，每份必須按試驗(yàn)設(shè)計(jì)所規(guī)定粒數(shù)隨機(jī)、精確數(shù)取種子。如果數(shù)取的種子粒數(shù)多于規(guī)定的播種粒數(shù)，在點(diǎn)播的過(guò)程中會(huì)挑肥揀瘦，剩下瘦小的種子，甚至播種粒數(shù)多于規(guī)定的粒數(shù)，造成人為誤差。種植鑒定可以不設(shè)重復(fù)，為了增加鑒定的可靠性和準(zhǔn)確性，增加1次重復(fù)。

5 選擇地塊，精細(xì)整地

為保證氣候環(huán)境條件適宜植株性狀正常發(fā)育，鑒定地塊要平坦向陽(yáng)、土壤均勻、肥力一致、有排灌條件且不宜低洼，前茬無(wú)同類(lèi)作物和無(wú)病蟲(chóng)害及雜草[3]。

播前整地：海南降雨量偏多，為防止多雨澇災(zāi)，采用起壟種植模式。壟寬130cm，溝寬30cm，溝深20～30cm。在1月上中旬進(jìn)行精細(xì)整地，每667m2施底肥史丹利17-17-17復(fù)合肥50kg，并澆足底墑水。

6 播種

6.1 播種期一般在1月下旬進(jìn)行播種。由于農(nóng)民的消費(fèi)觀念的改變，已經(jīng)由春節(jié)前備足種子變成4-5月為購(gòu)買(mǎi)玉米種子高峰期，因此企業(yè)備種時(shí)間相應(yīng)延后，大部分企業(yè)在11月底至次年1月上中旬回收運(yùn)輸加工玉米種子，又考慮到錯(cuò)開(kāi)春節(jié)時(shí)間，鑒于這種情況監(jiān)督抽樣時(shí)間多在1月18日之前完成。海南播期為1月20日左右，使花期鑒定在3月下旬4月初完成，趕在購(gòu)買(mǎi)玉米種子高峰期之前，這樣可以對(duì)有問(wèn)題的種子及時(shí)采取措施，保證優(yōu)質(zhì)種子入地。

6.2 種子處理播前應(yīng)對(duì)種子進(jìn)行晾曬，促進(jìn)種子發(fā)芽。對(duì)極個(gè)別未包衣種子樣品應(yīng)進(jìn)行藥劑拌種等處理，防止蟲(chóng)害與鼠害，確保一次全苗。

6.3 規(guī)格播種采用壟上雙行南北行向種植。其雙行的行距為100cm，作為觀測(cè)道，壟上種植行距壟邊10～15cm，株距30～40cm，每行播種60粒。純度標(biāo)注值為96.0%的樣品種植2行，純度標(biāo)注值為97.0%的樣品種植3行，純度標(biāo)注值為98.0%的樣品種植4行，純度標(biāo)注值為99.0%的樣品種植8行，并在當(dāng)天完成播種，試驗(yàn)四周設(shè)4～5行保護(hù)行。如果設(shè)有重復(fù)并需2d播完，每重復(fù)應(yīng)在同一天播完。每個(gè)重復(fù)按小區(qū)設(shè)計(jì)方案和種植圖在種植行的行頭插好樣品的唯一性標(biāo)識(shí)牌，然后擺放已數(shù)好粒數(shù)的種子樣品，經(jīng)核查擺放的位置無(wú)誤后開(kāi)始播種。采用單粒穴播，播種深度3～5cm。用竹桿或PVC管標(biāo)記，在長(zhǎng)竹桿或PVC管上按固定的株距量好位置，用記號(hào)筆標(biāo)記作為點(diǎn)播的位點(diǎn)；或用無(wú)彈性塑料繩標(biāo)記，在塑料繩上按固定的株距量好位置，用不同顏色線(xiàn)繩捆綁作記號(hào)，作為點(diǎn)播的位點(diǎn)。用竹桿或PVC管和塑料繩作為標(biāo)尺，使株距均勻一致，并且株行豎直，保證每棵植株有均等的生長(zhǎng)空間。播種深度、覆土厚度及按壓力度要一致。

7 田間管理

鑒定田的栽培管理要及時(shí)到位，保證小區(qū)內(nèi)植株正常發(fā)育，使典型性狀充分表現(xiàn)出來(lái)，避免因管理不善造成過(guò)多的弱小苗。并且自播種之日起出入鑒定田時(shí)一定要及時(shí)關(guān)閉圍欄大門(mén)，防止牲畜為害及外來(lái)人員的踩踏，并在四周撒放鼠藥防止鼠害，以免影響鑒定。

7.1 中耕除草玉米苗期怕澇不怕旱，輕度的干旱利于根的下扎和發(fā)育，而澇害輕則影響生長(zhǎng)，重則死苗。全生育期至少中耕2次，尤其是在下雨之后，及時(shí)松土，防止土壤板結(jié)，保證出全苗，絕不能補(bǔ)苗、間苗、勻苗。第1次中耕通常在苗期5～6葉時(shí)進(jìn)行，耕深3～4cm；第2次在拔節(jié)后封壟前進(jìn)行。也可在出苗后至4～5片葉時(shí)噴施玉米苗后專(zhuān)用除草劑1次，在12片葉時(shí)再使用滅生性除草劑定向噴霧1次。

7.2 澆水施肥排灌施肥要均勻，澆水建議采用噴灌或者用帶子澆灌；在可見(jiàn)葉為10～11片葉時(shí)進(jìn)行追肥，結(jié)合澆水每667m2施尿素20kg。在抽雄前要澆透水，灌漿前澆1次水以增加子粒飽滿(mǎn)度。澆水時(shí)間及次數(shù)根據(jù)氣候及植株生長(zhǎng)等情況而定。2016年年初海南氣溫偏高，本站鑒定試驗(yàn)田在出苗后至花期鑒定之前共澆6水，其中前4水間隔15d左右，后2水間隔10d左右。

7.3 防治病蟲(chóng)害植株生長(zhǎng)期間要及時(shí)防治粘蟲(chóng)、玉米螟、蚜蟲(chóng)、地下害蟲(chóng)，以及黑粉病、病毒病等病害。本站在2016年1月18日播種后，害蟲(chóng)為害較早（1葉1心期），并且病害嚴(yán)重，播種后到花期鑒定之前共噴藥防治9次，前4次基本間隔4d，中間2次間隔7d，后3次間隔10d左右。

8 鑒定

8.1 鑒定性狀不同玉米品種，植株性狀、雄穗性狀、雌穗性狀和子粒性狀不同。因缺少標(biāo)準(zhǔn)樣品，通常以品種的審定公告描述的性狀作為標(biāo)準(zhǔn)逐株鑒定。在眾多性狀中，應(yīng)抓住主要性狀和特殊性狀，必要時(shí)考慮次要性狀和易變性狀。玉米品種所固有的主要性狀為軸色、花絲顏色等不易變化的明顯性狀；而次要性狀就是細(xì)小、不易觀察的性狀，如花粉育性、葉鞘茸毛、小穗護(hù)穎等；易變性狀就是容易隨外界條件的變化而變化的性狀，如株高、莖粗等；特殊性狀就是某些品種所特有的性狀，如花絲遺跡明顯與否、苞葉頂端有無(wú)小葉等等。依據(jù)品種間性狀的差異鑒別異型植株，從而鑒定品種純度。對(duì)于鄰近種植的相同品種，相互對(duì)照比較，觀察其特征特性是否一致，與品種審定公告相符則品種真實(shí)，否則便是假種子。

8.2 鑒定時(shí)期通常在玉米花期植株性狀表現(xiàn)最明顯時(shí)期鑒定1次，但是目前玉米品種數(shù)量多，僅就2016年本站海南鑒定139個(gè)樣品就涉及71個(gè)品種。這些品種在很多性狀上相同，故應(yīng)改變海南單一在花期鑒定的問(wèn)題，增加苗期和成熟期鑒定，利用3個(gè)時(shí)期的特征特性綜合判定，以確保鑒定結(jié)果客觀、準(zhǔn)確。鑒定現(xiàn)場(chǎng)如實(shí)填寫(xiě)品種真實(shí)性與純度田間小區(qū)種植鑒定的詳細(xì)信息，包括種植地點(diǎn)、試樣編號(hào)、小區(qū)號(hào)、品種名稱(chēng)、鑒定日期、鑒定生育期、供檢株數(shù)、本品種株數(shù)、異品種株數(shù)、異作物株數(shù)、品種真實(shí)性、病害危害株數(shù)、雜草株數(shù)，并有檢驗(yàn)員簽字。

8.2.1 苗期鑒定在5葉1心期，以幼苗葉鞘顏色、葉形、葉色、葉緣顏色、光澤作為苗期純度鑒定所依據(jù)的典型性狀，并對(duì)懷疑植株用標(biāo)簽或塑料牌作出標(biāo)記。

8.2.2 花期鑒定花期是品種特征特性表現(xiàn)最明顯時(shí)期，依據(jù)株型、株高、莖稈粗細(xì)、葉形、葉色、葉上絨毛有無(wú)、葉脈顏色、葉耳形狀、雄穗形狀和分枝多少及分枝松散緊湊程度、護(hù)穎顏色、花藥顏色、花絲顏色、葉片張開(kāi)角度、葉片數(shù)及穗位高、節(jié)間長(zhǎng)度等性狀進(jìn)行鑒定，對(duì)苗期懷疑植株重點(diǎn)觀察鑒定。雖然有些品種苗期芽鞘顏色的差異明顯，但為了更加準(zhǔn)確鑒定品種純度及真實(shí)性，在花期必須進(jìn)行鑒定。

8.2.3 成熟期鑒定以穗型、穗位高低、果穗苞葉長(zhǎng)度、雙穗率、粒形、粒色、子粒大小和穗軸顏色結(jié)合抗逆性、生育期進(jìn)行鑒定。根據(jù)果穗性狀對(duì)前期懷疑植株進(jìn)一步觀察鑒定。各個(gè)生育期鑒定后再綜合判定，如果仍覺(jué)得似是非是的植株應(yīng)按本品種計(jì)數(shù)。

8.3 鑒定人員田間種植鑒定必須由2名以上農(nóng)作物種子田間檢驗(yàn)員共同完成。田間檢驗(yàn)員要有豐富的實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)，既要熟悉被檢品種的特征特性，能正確鑒別植株是屬于本品種還是變異株，并能區(qū)分變異株是遺傳變異而不是受海南特殊環(huán)境影響所引起的變異，還要把雜交1代小苗與自交苗區(qū)分開(kāi)來(lái)[3]。田檢員必須對(duì)品種多觀摩，熟悉和掌握本地所推廣品種及新品種的典型特征特性，提高田間純度鑒定技能，確保鑒定結(jié)果的準(zhǔn)確性，避免海南鑒定質(zhì)量事故的發(fā)生。

9 結(jié)果計(jì)算與容許差距

9.1 計(jì)算公式品種純度（%）=本品種株數(shù)/鑒定株數(shù)×100%；異品種純度（%）=異品種株數(shù)/鑒定株數(shù)×100%；異作物純度（%）=異作物株數(shù)/鑒定株數(shù)×100%；雜草率（%）=雜草株數(shù)/鑒定株數(shù)×100%。

9.2 容許差距與數(shù)字修約品種純度計(jì)算結(jié)果未達(dá)到標(biāo)注值時(shí)，使用《GB/T3543.5》規(guī)定的容許差距。也可用下式進(jìn)行計(jì)算容許差距[4]。

p為品種純度標(biāo)注值，q=100-p，N為種植株數(shù)。鑒定結(jié)果以苗期為參考，以植株性狀表現(xiàn)最完全、最明顯的花期和成熟期為主，以2次重復(fù)的平均值表示，保留1位小數(shù)。數(shù)字修約執(zhí)行《GB8170-2008數(shù)字修約規(guī)則》。各種成分的百分率總和必須為100.0%。

[1] 王海陽(yáng)，劉彩霞，孫淑珍．論完善種子企業(yè)植物新品種權(quán)保護(hù)的對(duì)策[J]．中國(guó)種業(yè)，2016（12）：19-24

[2] 中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局，中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)．GB4404．1-2008糧食作物種子第一部分：禾谷類(lèi)[M]．北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2008

[3] 王靈敏，孟小莽，許豫南，等．淺議種子真實(shí)性與品種純度鑒定方法的適用范圍與優(yōu)劣[J]．種子科技，2016，34（8）：33-34

[4] 潘顯政，支巨振，梁志杰，等．農(nóng)作物種子檢驗(yàn)員考核學(xué)習(xí)讀本[M]．北京：中國(guó)工商出版社，2006：273-274

孟小莽

2017-08-22）