董一蕾，許嘯，張旭，高同雨，劉勇，王加利，姬瑞芳，全慶華，武雅娟，劉永剛*

(1.北京中醫(yī)藥大學(xué)，北京 100102；2.北京市門頭溝區(qū)國家生態(tài)修復(fù)科技綜合示范基地，北京 102300)

·基礎(chǔ)研究·

HPLC測定北京妙峰山玫瑰花中蘆丁的含量△

董一蕾1，許嘯1，張旭1，高同雨2，劉勇1，王加利1，姬瑞芳1，全慶華1，武雅娟2，劉永剛1*

(1.北京中醫(yī)藥大學(xué)，北京 100102；2.北京市門頭溝區(qū)國家生態(tài)修復(fù)科技綜合示范基地，北京 102300)

目的采用高效液相色譜法測定北京妙峰山玫瑰花中蘆丁的含量。方法超聲提取法，色譜柱為Agilent zorbax SB-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)，檢測波長為310 nm，柱溫為25 ℃，流動相為0.2%冰醋酸-乙腈(90∶10)，流速為0.8 mL·min-1。結(jié)果北京妙峰山玫瑰花中蘆丁的含量為1.254 9 mg·g-1。結(jié)論該方法簡便、快速、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，適用于玫瑰花中蘆丁的含量測定。

高效液相色譜；蘆?。幻倒寤?；妙峰山

玫瑰Rosarugosa是薔薇科植物，小灌木，高1～2 m，其花朵中含有多種生物活性成分，是民間常用的中藥材，其藥理作用有理氣調(diào)經(jīng)、鎮(zhèn)靜安神、和血養(yǎng)血等[1-3]。北京妙峰山的玫瑰花以其花朵飽滿、顏色艷麗、香氣濃郁而獨(dú)特，在國內(nèi)外享有較高名譽(yù)，妙峰山玫瑰產(chǎn)于北京市門頭溝區(qū)的妙峰山，此處海拔高、氣候涼爽、晝夜溫差大，自然條件得天獨(dú)厚，具有500多年的玫瑰花栽培歷史，玫瑰花已成為北京特色植物資源[4-6]。

研究表明，玫瑰花中主要活性成分為黃酮，黃酮類成分是具有開發(fā)前景的天然抗氧化劑，但是目前對玫瑰花中黃酮類具體成分的研究報(bào)道較少[7]，本文以蘆丁為指標(biāo)，建立了用高效液相色譜法測定妙峰山玫瑰花中蘆丁含量的方法，為北京市特色農(nóng)業(yè)——妙峰山玫瑰的發(fā)展提供了參考，也為玫瑰藥物的深度開發(fā)提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 儀器與試劑

1.1 材料與試劑

北京市門頭溝區(qū)妙峰山玫瑰種植地干燥玫瑰花花瓣，經(jīng)北京中醫(yī)藥大學(xué)教授劉勇鑒定為玫瑰花RosarugosaThunb.；乙腈(色譜純)、冰醋酸(色譜純)、甲醇(分析純)，由北京高華偉業(yè)食品添加劑有限公司提供；蘆丁對照品(中國食品藥品檢定研究院)，純度>98%；去離子水。

1.2 儀器

日本島津公司20A系列高效液相色譜儀；LC solution工作站；KQ-100型超聲波清洗儀。

2 樣品測定

2.1 色譜條件

Agilent zorbax SB-C18色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，柱溫：25 ℃，流動相為0.2%冰醋酸-乙腈(90∶10)，檢測波長為310 nm，流速為0.8 mL·min-1，進(jìn)樣量為10 μL。

2.2 供試品溶液的制備

取妙峰山干燥玫瑰花瓣1 g，精密稱定，精密加入甲醇50 mL，超聲處理40 min，提取蘆丁，搖勻，過濾，取濾液，用0.45 μm微孔濾膜過濾，即得。色譜圖見圖1。

圖1 玫瑰花HPLC圖

2.3 對照品溶液的制備

精密稱取2.030 mg蘆丁對照品，置于10 mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容，得到0.203 mg·mL-1對照品溶液。色譜圖見圖2。

圖2 蘆丁HPLC圖

2.4 線性關(guān)系考察

在2.1色譜條下依次進(jìn)樣1、2、5、10、20 μL蘆丁對照品溶液。以蘆丁峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，進(jìn)行回歸計(jì)算，得蘆丁回歸方程，Y=1 001 639X-58 394，r=0.999 9。結(jié)果表明，在給定的范圍內(nèi)，蘆丁線性關(guān)系良好。

2.5 精密度試驗(yàn)

精密吸取對照品，在2.1色譜條件下重復(fù)進(jìn)樣5次，每次10 μL，計(jì)算得到蘆丁峰面積RSD=0.89%，說明精密度良好。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn)

精密稱取妙峰山玫瑰花5份，按2.2項(xiàng)下方法制備供試品，按2.1項(xiàng)下色譜條件依次進(jìn)行測定，計(jì)算得到蘆丁平均含量的RSD=2.25%，說明本實(shí)驗(yàn)重復(fù)性良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一供試品，分別在0、2、4、6、8 h進(jìn)樣10 μL，測定蘆丁峰面積，結(jié)果得到蘆丁峰面積的RSD=2.30%，說明本實(shí)驗(yàn)穩(wěn)定性較好。

2.8 加樣回收率試驗(yàn)

取已知含量的與重復(fù)性試驗(yàn)同一批的玫瑰花9份，每份0.50 g，精密稱定，加入蘆丁對照品適量，按照2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按照2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，以外標(biāo)法計(jì)算蘆丁的量，見表1。

表1 蘆丁加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.9 樣品測定結(jié)果

取妙峰山干燥玫瑰花花瓣3批，按2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，以外標(biāo)法計(jì)算含量，結(jié)果3批樣品中的蘆丁含量分別為1.25、1.23、1.26 mg·g-1。

3 結(jié)論

3.1 檢測波長的選擇

本實(shí)驗(yàn)選擇310 nm作為檢測波長，在該波長下色譜峰對稱、干擾少。

3.2 蘆丁提取方法的選擇

對黃酮成分的提取方法有加熱回流提取法[8]和超聲波提取法[9-12]，超聲波提取法與加熱回流提取法所得的蘆丁含量相當(dāng)。但采用超聲波法從玫瑰花中提取蘆丁，無需加熱，樣品處理方法簡單、快速，大大縮短了提取時間。故本文采用加入甲醇超聲處理40 min的提取方法。

4 討論

文獻(xiàn)報(bào)道，玫瑰花中主要含黃酮類成分，具有廣泛的藥理活性，有預(yù)防心血管疾病、防癌、抗癌、調(diào)節(jié)免疫、抗衰老、抗菌殺菌、抗病毒、抗糖尿病、吸收紫外輻射、止咳、祛痰、瀉下、解痙、提高記憶力、抗過敏、活血化疲、利膽及肝臟保護(hù)等諸多藥理作用及功效[1，7]。關(guān)于黃酮類指標(biāo)性成分的篩選報(bào)道相對較少，目前，通常采用紫外分光光度計(jì)法來測定玫瑰花中黃酮的含量[8]，尚未見對妙峰山玫瑰花中黃酮含量測定的報(bào)道。故本課題選擇蘆丁作為指標(biāo)成分，對妙峰山玫瑰花進(jìn)行指標(biāo)性成分控制研究，為進(jìn)一步研究提供參考。

本實(shí)驗(yàn)通過甲醇超聲波提取法提取北京妙峰山干燥玫瑰花花瓣中蘆丁成分，并采用高效液相色譜法檢測其中蘆丁含量，具有提取完全、效率高、能耗低、所需時間短、待測成分損失少、測定結(jié)果準(zhǔn)確等特點(diǎn)。方法準(zhǔn)確可靠，重現(xiàn)性好，可用于玫瑰花中蘆丁含量測定，具有很好的實(shí)用價值，對促進(jìn)該藥材的進(jìn)一步推廣具有重大意義。

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DeterminationofContentofRutininRoseFlowersofMiaofengMountaininofBeijingbyHPLC

DONG Yilei1，XU Xiao1，ZHANG Xu1，GAO Tongyu2，LIU Yong1，WANG Jiali1，JI Ruifang1，QUAN Qinghua1，WU Yajuan2，LIU Yonggang1*

(1.BeijingUniversityofChineseMedicine，Beijing100102，China；2.TheScienceandTechnologyofEcologyRestorationStateComprehensiveModelBaseofBeijingMentougouDistrict,Beijing102300，China)

Objective：To determine the content of rutin in rose flowers of Miaofeng Mountain in Beijing by HPLC.MethodsThe samples were extracted by ultrasonic，column chromatography of Agilent Zorbax SB-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm) was used in the study，the detection wavelength was 310 nm，the column temperature was 25 degrees，the mobile phase was 0.2% acetic acid acetonitrile (90∶10)，elution rate was 0.8 mL·min-1.ResultsThe content of rutin in rose flowers of Miaofeng Mountain in Beijing was 1.254 9 mg·g-1.ConclusionThe method is simple，rapid，accurate and reproducible.So it is suitable for the determination of the content of rutin in rose flowers.

HPLC；rutin；rose flowers；Miaofeng Mountain

北京市科委課題(Z151100001415009)；北京中醫(yī)藥大學(xué)大學(xué)生教育課題(BJGJ1633)

*

劉永剛，副教授，研究方向：中藥物質(zhì)基礎(chǔ)研究及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；E-mail：liuyg0228@163.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2017.10.011

2017-02-28)