孫晶，常會(huì)忠，張立群，張小蕾＊

（1.山西省長(zhǎng)治市人民醫(yī)院，山西 長(zhǎng)治 046000；2.貴州醫(yī)科大學(xué)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)學(xué)院，貴州 貴陽(yáng) 550025）

枸杞多糖對(duì)甲醛致小鼠睪丸組織氧化損傷和酶活性的影響

孫晶1，常會(huì)忠1，張立群1，張小蕾2＊

（1.山西省長(zhǎng)治市人民醫(yī)院，山西 長(zhǎng)治 046000；2.貴州醫(yī)科大學(xué)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)學(xué)院，貴州 貴陽(yáng) 550025）

目的觀察枸杞多糖（LBP）對(duì)甲醛（FA）致雄性小鼠睪丸組織氧化損傷和酶活性的影響。方法健康雄性昆明種小鼠96只，隨機(jī)分為8組，F(xiàn)A低、中、高［0.2 mg/(kg.d)、2.0 mg/(kg.d)、20 mg/(kg.d)］劑量組，LBP低、中、高［50 mg/(kg.d)、100 mg/(kg.d)、200 mg/(kg.d)］劑量拮抗組，陽(yáng)性對(duì)照組［環(huán)磷酰胺50 mg/(kg.d)］和陰性對(duì)照組（生理鹽水）。FA染毒組和陰性對(duì)照組腹腔注射，每天1次，連續(xù)14 d，陽(yáng)性對(duì)照組腹腔注射，隔天1次，共14 d。LBP拮抗組腹腔注射高劑量FA，同時(shí)灌胃LBP溶液，每天1次，連續(xù)14 d。給藥結(jié)束后，處死小鼠，測(cè)定小鼠睪丸組織超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）含量、葡萄糖6磷酸脫氫酶（G-6-PD）和山梨醇脫氫酶（SDH）活性。結(jié)果FA染毒組睪丸組織SOD下降，MDA含量增高，LBP組較FA染毒組SOD升高，MDA含量下降；FA染毒組睪丸組織G-6-PD、SDH活性降低，LBP中、高劑量組均明顯增高。結(jié)論FA染毒雄性小鼠致睪丸組織氧化損傷和標(biāo)志酶活性下降，LBP可能通過(guò)抗氧化作用減輕睪丸組織氧化損傷，提高標(biāo)志酶活性。

甲醛；枸杞多糖；雄性小鼠；生殖毒性；氧化損傷

枸杞子是我國(guó)的傳統(tǒng)中藥材，LBP是枸杞子的主要功能成分之一，具有較強(qiáng)的生理活性[1-5]。前期研究證實(shí)，LBP可明顯改善小鼠的精子數(shù)量，活動(dòng)率和畸形率，也可改善小鼠體內(nèi)性激素水平。本實(shí)驗(yàn)主要研究枸杞多糖對(duì)小鼠睪丸組織氧化損傷和酶活性的影響。

1 材料與方法

1.1 主要試劑與儀器 甲醛（重慶江川化工）、LBP（湖北遠(yuǎn)成藥業(yè)）、環(huán)磷酰胺（江蘇恒瑞醫(yī)藥）、考馬斯亮蘭試劑盒、超氧化物歧化酶試劑盒、丙二醛試劑盒（南京建成生物工程研究所），葡萄糖6磷酸脫氫酶試劑盒、山梨醇脫氫酶試劑盒（美國(guó)Rapidbio(RB)公司），主要儀器有低速多管架自動(dòng)平衡離心機(jī)（長(zhǎng)沙邁佳森）、721型分光光度計(jì)（山東高密彩虹）、自動(dòng)平衡微型離心機(jī)（德國(guó)）、低溫離心機(jī)（sigma公司）、酶標(biāo)儀（芬蘭）。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及處理 由貴州醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物中心提供的6周齡-8周齡健康雄性昆明種小鼠96只，體質(zhì)量30 g-35 g，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，隨機(jī)分為8組，F(xiàn)A低、中、高［0.2 mg/(kg.d)、2.0 mg/(kg.d)、20 mg/(kg.d)］劑量組，LBP低、中、高［50 mg/(kg.d)、100 mg/(kg.d)、200 mg/(kg.d)］劑量拮抗組，陽(yáng)性對(duì)照組［環(huán)磷酰胺50 mg/(kg.d)］和陰性對(duì)照組（生理鹽水）。甲醛染毒組和陰性對(duì)照組腹腔注射，每天1次，連續(xù)14 d，陽(yáng)性對(duì)照組腹腔注射，隔天1次，共14 d。LBP拮抗組腹腔注射高劑量甲醛，同時(shí)灌胃LBP溶液，每天1次，連續(xù)14 d。給藥體積為0.05 mL/g體質(zhì)量，小鼠給藥期間，自由飲食飲水。染毒結(jié)束后，禁食24 h，眼球取血，脫臼處死。取一側(cè)睪丸，制備睪丸勻漿，按說(shuō)明書(shū)操作測(cè)定睪丸SOD、MDA和G-6-PD、SDH活性[6]。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料采用率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（Mean±SD）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組睪丸組織SOD、MDA結(jié)果比較 FA染毒組SOD降低，LBP中、高劑量組與FA高劑量組比較，SOD增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01）。FA中、高劑量組MDA增高，LBP低、中、高劑量拮抗組與FA高劑量組比較，MDA降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。見(jiàn)表1。

3.2 各組睪丸組織G-6-PD、SDH結(jié)果比較 FA組G-6-PD下降，LBP中、高劑量組與FA高劑量組比較，G-6-PD增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。FA各組SDH活性下降，LBP低、中、高劑量組SDH升高，與FA高劑量組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），見(jiàn)表2。

表1 各組睪丸組織SOD、MDA結(jié)果比較（Mean±SD）

表2 各組睪丸組織G-6-PD、SDH結(jié)果比較（Mean±SD）

3 討論

本研究中，隨LBP拮抗劑量的增高，SOD活性逐漸升高，MDA含量逐漸下降，與高劑量FA染毒組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。這與國(guó)內(nèi)學(xué)者的結(jié)論是一致的。LBP拮抗甲醛氧化損傷的途徑可能有兩種：一是LBP直接清除體內(nèi)過(guò)多的自由基；二是通過(guò)提高抗氧化酶活力的間接作用來(lái)清除過(guò)多自由基。而且有學(xué)者指出，LBP清除自由基的能力與LBP濃度成正相關(guān)性[7]。

G-6-PD可作為反映睪丸間質(zhì)細(xì)胞功能的標(biāo)志酶，SDH可作為睪丸成熟、精子功能成熟和形態(tài)完善的標(biāo)志酶。本研究中，F(xiàn)A染毒組G-6-PD、SDH活力顯著下漸，提示睪丸和精子功能成熟障礙，這與謝穎等的結(jié)果是一致的。LBP各組，G-6-PD、SDH均升高，表明LBP可以提高睪丸細(xì)胞標(biāo)志酶活性，減輕FA對(duì)睪丸功能的損害。其具體機(jī)制尚有待于進(jìn)一步研究。

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