常倫勝+李向軍+王強(qiáng)+陳亞茹

摘要：在自然條件下，很多青飼料如白菜、甜菜等在硝化細(xì)菌的作用下極易還原為亞硝酸鹽，造成牛、羊、豬等家畜中毒。對(duì)中毒動(dòng)物胃腸內(nèi)容物提取常采用水浸法，當(dāng)檢材色素較嚴(yán)重或黏稠時(shí)，用水浸法不理想，可用透析法提取，透析法所得被檢液是澄清的。透析法是利用低分子化合物的細(xì)小分子或離子在溶液中可以自由通過(guò)半透膜，而一些大分子、結(jié)構(gòu)龐大的化合物如脂肪、蛋白質(zhì)等不能通過(guò)而得以分離。

關(guān)鍵詞：亞硝酸鹽；中毒；透析法

中圖分類號(hào)：S859.81 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B 文章編號(hào)：1007-273X（2017）11-0020-01

在自然條件下，亞硝酸鹽是硝酸鹽在硝化細(xì)菌的作用下還原為氨過(guò)程中的中間產(chǎn)物，故亞硝酸鹽的產(chǎn)生取決于硝酸鹽的數(shù)量與硝化菌的活躍程度這兩個(gè)條件。很多青飼料如白菜、青菜、圓白菜、甜菜及其葉含硝酸鹽，甜菜的干物質(zhì)中含硝酸鉀1.32%～3.13%，施用硝化鹽化肥或2，4-D除草劑的甜菜含量最高。這些蔬菜在大量使用氮肥及除草劑時(shí)其硝酸鹽含量更高，造成牛、羊、豬等家畜中毒。對(duì)中毒動(dòng)物胃腸內(nèi)容物提取常采用水浸法，當(dāng)檢材色素較嚴(yán)重或黏稠時(shí)，用水浸法不理想，可用透析法提取，透析法所得被檢液是澄清的。透析法是利用低分子化合物的細(xì)小分子或離子在溶液中可以自由通過(guò)半透膜，而一些大分子、結(jié)構(gòu)龐大的化合物如脂肪、蛋白質(zhì)等不能通過(guò)而得以分離?，F(xiàn)對(duì)透析法的材料及方法介紹如下，供參考。

1 半透膜制作

取火棉膠數(shù)毫升，倒入潔凈干燥的小燒杯中，迅速轉(zhuǎn)動(dòng)燒杯，使火棉膠均勻地分布在燒杯內(nèi)壁上，形成一層薄膜，待薄膜干燥后，輕輕用刀尖將邊緣剝離，向薄膜與內(nèi)壁間輕輕吹氣，注入冷水，即可完整的取下，檢查是否完整無(wú)損。

2 檢材提取步驟

（1）將檢材切細(xì)，輕輕裝入已做好的半透膜中，用線將膜口系在玻管的一端。

（2）把盛有檢材的半透膜浸入較大的燒杯中，浸入深度應(yīng)使檢材與蒸餾水保持在同一水平線上。

（3）用滴管在玻璃管上口向半透膜內(nèi)滴加蒸餾水，使成粥狀。

（4）透析1 h左右，取出膜外透析液進(jìn)行檢驗(yàn)。

3 格林試劑配制

對(duì)氨基苯磺酸1.0 g，甲萘胺（α-萘胺）0.1 g，酒石酸8.9 g，混合研磨均勻，儲(chǔ)于棕色廣口瓶?jī)?nèi)，避光保存，備用。

4 亞硝酸鹽標(biāo)準(zhǔn)紙片的制備

取濾紙剪成1 cm2大小。取亞硝酸鈉（鉀）溶液，其含量為600 mg/mL。用0.25 mL移液器往每張濾紙片上各滴0.005 mL亞硝酸鹽溶液（0.005 mL中含3 μg亞硝酸鹽），使之自然干燥、備用。

從制成的紙片中任選10片分別置于10支試管中，分別取亞硝酸鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液0、0.25、0.50、1.00、2.00 mL于另外5支試管中（作為標(biāo)準(zhǔn)比色列）。以上各管均加水至5 mL，再加格林試劑0.1 g，混勻，放置5～10 min，然后比色，若有半數(shù)未達(dá)到2.5～5.0 μg（即未達(dá)到比色列的第2至3管的顏色深度），則所做紙片全部不能用，應(yīng)另做。若達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)，則將紙片裝入棕色廣口瓶中備用。

5 樣品檢測(cè)方法

取小試管3支，一管加被檢液2.5 mL為樣品管，一管加亞硝酸鹽紙片1片，為標(biāo)準(zhǔn)管，另一管為空白管。3管分別加水至5 mL。各管加格林試劑0.1 g，混勻，放置5～10 min。

結(jié)果判定：若樣品管與標(biāo)準(zhǔn)管顏色相近或深于標(biāo)準(zhǔn)管，則有亞硝酸鹽中毒的可能；若樣品管的顏色淺于標(biāo)準(zhǔn)管，則亞硝酸鹽中毒的可能性不大；若樣品管顏色很深或呈磚紅色并產(chǎn)生沉淀，說(shuō)明亞硝酸鹽的含量很高。

此法便于現(xiàn)場(chǎng)檢查，但要求標(biāo)準(zhǔn)試紙精確可靠。endprint