一種反式脂肪酸的檢測方法

反式脂肪酸是一種具有反式結(jié)構(gòu)的不飽和脂肪酸，食品中的反式脂肪酸會加速動脈硬化，導(dǎo)致心血管病。反式脂肪酸危害性大，已經(jīng)引起各國的注意。丹麥政府是世界上第一個對食品中反式脂肪酸含量進行限制的國家。2003年7月9日，美國食品藥品管理局正式公布規(guī)章：自2006年1月1日起，食品營養(yǎng)標簽中必須標注產(chǎn)品的飽和脂肪酸含量及反式脂肪酸的含量，建議每日反式脂肪酸攝取量在每日總攝取能量的1%以下。

目前國內(nèi)外檢測反式脂肪酸的方法主要有紅外光譜法、毛細管電泳法、銀離子高效色譜法、反相高效液相色譜法、氣相色譜法、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法等。其中氣相色譜法最常用，例如應(yīng)用在GB/T 22110-2008食品中反式脂肪酸的測定。與固體提取出來的脂肪不一樣，液態(tài)的植物油含有大量的順式飽和脂肪酸，嚴重干擾反式脂肪酸的測定。國內(nèi)外文獻報道排除順式和反式飽和脂肪酸干擾的主要方法是銀離子固相萃取法，利用Ag+與順式脂肪酸雙鍵間存在微弱的作用力，從而預(yù)分離順式脂肪酸，但此操作增加了實驗的復(fù)雜度。因此,建立氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法測定反式脂肪酸的新檢測方法具有重要意義。

材料、試劑、儀器與方法

材料、試劑、儀器：檢測的樣品為液態(tài)植物油（食用油等）。異辛烷；甲醇；氫氧化鉀；標準物質(zhì)十三烷酸甲酯（C13：0）、反 -9- 十八碳烯酸甲酯（C18：1-9t）、反-9,12-十八碳二烯酸甲酯（C18：2-9t,12t）、順-9,12,15-十八碳三烯酸甲酯（C18：3-9c,12c,15c）≥99%。氣相質(zhì)譜儀；電子天平；旋渦混合器。

方法：氣相質(zhì)譜條件。色譜柱：Aglient HP-88柱(100m x 0.25mm x 0.20μm)；程序升溫條件：初始溫度60℃，停留5min，以5℃/min升溫至165℃，停留1min，再以2℃/min升溫至225℃，保留17min；總運行時間：74min；載氣：高純氮氣，流量1.2mL/min；進樣口溫度：240℃；進樣量：1μL；進樣方式：不分離進樣。質(zhì)譜條件。離子源：電子轟擊源，70Ev；掃描方式：全掃描，50-1000u；離子源溫度：280℃；標準物質(zhì)十三烷酸甲酯（C13：0）、反-9-十八碳烯酸甲酯（C18：1-9t）、反-9,12-十八碳二烯酸甲酯（C18：2-9t,12t）、順-9,12,15-十八碳三烯酸甲酯（C18：3-9c,12c,15c）的定量離子、定性離子為：十三烷酸甲酯，228，143，87，74；反-9-十八碳烯酸甲酯，296，264，222，97；反-9,12-十八碳二烯酸甲酯，294，263，95，67；順-9,12,15-十八碳三烯酸甲酯，292，261，108，79。

樣品處理

樣品處理：準確稱取約60mg植物油于10ml離心管中，加入0.5ml 100mg/L內(nèi)標物質(zhì)十三烷酸甲酯溶液，0.2ml 2mol/L氫氧化鉀-甲醇溶液，用異辛烷定容到5ml。在旋渦混合器上劇烈震蕩2-3min，加入1g一水合硫酸氫鈉。在旋渦混合器上劇烈震蕩0.5min后取上清液待氣相色譜—質(zhì)譜儀測定。

標準曲線配制：稱取適量標準物質(zhì)十三烷酸甲酯（C13：0）、反-9-十八碳烯酸甲酯（C18：1-9t）、反-9,12-十八碳二烯酸甲酯（C18：2-9t,12t）、順-9,12,15-十八碳三烯酸甲酯（C18：3-9c,12c,15c），用異辛烷配備成各種標準物質(zhì)濃度均為10mg/ L的標準儲備溶液。

結(jié)果與討論

色譜分離：順式，反式脂肪酸在物理和化學(xué)性質(zhì)上很相似，選用常用的柱子，例如HP-5MS(30m x 0.25mm x 0.25μm)等無法將其分離。需用特殊的柱子Aglient HP-88柱(100m x 0.25mm x 0.20μm)才能過獲得滿意的分離效果。典型的樣品色譜圖見圖1。

圖1 脂肪酸甲酯的總離子流色譜圖

不同脂肪酸質(zhì)譜圖特征：反-9-十八碳烯酸甲酯（C18：1-9t）的分子量為296，反-9,12-十八碳二烯酸甲酯（C18：2-9t,12t）分子量為294，順-9,12,15-十八碳三烯酸甲酯（C18：3-9c,12c,15c）分子量為292，為其特征離子峰。反式十八碳二烯酸甲酯包含反-9,12-十八碳二烯酸甲酯（C18：2-9t,12t）等多種同分異構(gòu)體,其分子量均為294，共同的碎片離子為m/z 263, m/z67。反式十八碳三烯酸甲酯包含多種同分異構(gòu)體，其分子量與順-9,12,15-十八碳三烯酸甲酯（C18：3-9c,12c,15c）相同，均為292，共同的碎片離子為m/z 261。

在氣相質(zhì)譜儀中按照上述離子進行離子搜索，在樣品中并沒有發(fā)現(xiàn)反式脂肪酸的存在。

定量分析：用面積歸一化法測定出各反式脂肪酸的相對含量。

□ 潘金銅 浙江海洋大學(xué)

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