高智濤，張巍，郭興，王洪剛

(黑龍江省伊春林業(yè)科學(xué)院，黑龍江 伊春 153000)

高寒地區(qū)幾種漿果資源成分分析比對(duì)

高智濤，張巍，郭興，王洪剛

(黑龍江省伊春林業(yè)科學(xué)院，黑龍江 伊春 153000)

對(duì)小興安嶺寬葉藍(lán)靛果、野生藍(lán)靛果、藍(lán)鳥(niǎo)、蓓蕾、野生篤斯5種寬葉藍(lán)靛果果肉、果皮中的總糖、黃酮、單寧、SOD含量進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果表明，野生篤斯果皮中總糖含量最高達(dá)1.72mg/g；蓓蕾果皮中黃酮含量最高達(dá)1.88mg/g；野生藍(lán)靛果果皮中單寧含量最高0.144mg/g；蓓蕾果肉中SOD含量最高達(dá)1903.921U/g。

寬葉藍(lán)靛果；總糖；單寧；黃酮；SOD

藍(lán)靛果(LoniceracaeruleaL. var.edulisTurcz. ex Herd.)是忍冬科，忍冬屬藍(lán)果忍冬的變種。藍(lán)靛果中含有豐富的功能性物質(zhì)，但是每個(gè)品種藍(lán)靛果以及果皮、果肉中功能性物質(zhì)的含量都有不相同[1]。本實(shí)驗(yàn)針對(duì)4種藍(lán)靛果、野生篤斯等5種漿果的果皮、果肉中總糖、黃酮[2]、單寧、SOD含量進(jìn)行分析[3]，得出總糖、黃酮、單寧、SOD含量最高的漿果品種。

1 試驗(yàn)材料

1.1 果實(shí)

野生寬葉藍(lán)靛果，種源地為帶嶺林業(yè)局大青山海拔1200m；野生藍(lán)靛果，種源地為五營(yíng)林業(yè)局海拔400m；野生篤斯越桔采自紅星林業(yè)局，庫(kù)斯特林場(chǎng)。藍(lán)鳥(niǎo)、蓓蕾為人工栽培品種。

1.2 試劑

蒽酮；蘆??；無(wú)水乙醇；無(wú)水甲醇；無(wú)水葡萄糖；濃硫酸；鎢酸鈉；鉬酸鈉；磷酸；鹽酸；硫酸鋰；溴水；無(wú)水碳酸鈉；一水合沒(méi)食子酸。

1.3 儀器

水浴鍋；離心機(jī)；紫外分光光度計(jì)；電爐；超聲波破碎儀。

2 試驗(yàn)方法

2.1 試驗(yàn)材料采摘及處理

果實(shí)采摘后放入塑封袋中帶回，并放入冰箱中冷凍儲(chǔ)藏，分析時(shí)將果實(shí)自然解凍，分離果皮及果肉并稱(chēng)重。

2.2 成分分析方法

總糖采用硫酸蒽酮法；黃酮采用蘆丁法；單寧采用比色法；SOD采用雙抗體夾心法。

2.2.1 硫酸蒽酮法

樣品處理：取果皮、肉2g準(zhǔn)確稱(chēng)量，加水100mL，進(jìn)行超聲波破碎處理，時(shí)間6s，間隔4s，總時(shí)間30min，功率250W，最后定容至100mL，取0.1mL樣品蒸餾水定容至1mL，加入硫酸蒽酮試劑4mL，封口，準(zhǔn)確煮沸10min，用流水冷卻，室溫放置10min，于620nm處比色，純水空白對(duì)照。

硫酸蒽酮試劑制備：取2g蒽酮溶于1L濃硫酸中?，F(xiàn)用現(xiàn)配，放置在棕色瓶中。

2.2.2 蘆丁法測(cè)定黃酮

樣品處理：取果皮、肉2g準(zhǔn)確稱(chēng)量，無(wú)水乙醇定容25mL，超聲波破碎處理，時(shí)間6s，間隔4s，總時(shí)間20min，功率400W，超聲完成靜止30min，取上清液1.0mL，水浴揮去乙醇，加甲醇定容至25mL，于360nm處測(cè)定吸光度值。

蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線制備：取蘆丁5.0mg加甲醇定容100mL既得濃度50μg/mL標(biāo)準(zhǔn)液。

2.2.3 單寧含量測(cè)定

樣品處理：取果皮、肉2.0g準(zhǔn)確稱(chēng)量，用80mL純水洗入100mL容量瓶中，放入沸水浴中提取30min，冷卻定容，吸取2.0mL樣品提取液，8000r/min離心4min，取上清液備用。吸取1.0mL式樣提取液加水5.0mL、1.0mL鎢酸鈉-鉬酸鈉混合液和3.0mL碳酸鈉，靜止顯色2h。

鎢酸鈉-鉬酸鈉混合液配置：50.0g鎢酸鈉，12.5g鉬酸鈉，用350mL純水溶解到1000mL回流瓶中，加入25mL磷酸，50mL鹽酸混勻，小火回流2h，在加入75g硫酸鋰，25mL蒸餾水(滴入3～5滴溴水)，繼續(xù)沸騰15min至溴水完全揮發(fā)，冷卻后，轉(zhuǎn)入500mL容量瓶定容，過(guò)濾置棕色瓶中保存，使用時(shí)稀釋1倍，室溫可保存半年。

碳酸鈉溶液制備：稱(chēng)取37.5g無(wú)水碳酸鈉溶于250mL溫水中混勻冷卻，稀釋至500mL，過(guò)濾到儲(chǔ)液瓶中備用。

沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)液：準(zhǔn)確稱(chēng)取0.1100g一水合沒(méi)食子酸，溶解并定容至100mL，此溶液為沒(méi)食子酸濃度為1000mg/L，在冰箱中2～3℃可保存5天。

2.2.4 超氧化物歧化酶(SOD)測(cè)定

樣品前處理：取果皮、肉1g精確稱(chēng)量，研磨，放入離心管中，定容10mL，4000r/min離心10min，取上清液備用。

加樣：分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同)、待測(cè)樣品孔。在待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液 40μL，然后再加待測(cè)樣品10μL(樣品最終稀釋度為 5 倍)。

加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 100μL，空白孔除外。

配液：將 20 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 20 倍稀釋后備用。

洗滌：小心棄去液體，甩干，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置 30s后棄去，如此重復(fù) 5 次，拍干。

顯色：每孔先加入顯色劑 A50μL，再加入顯色劑 B50μL，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色 15 min。

終止：每孔加終止液 50μL，終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。

測(cè)定：以空白孔調(diào)零，450nm 波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD 值)。測(cè)定應(yīng)在加終止液后 15 min以?xún)?nèi)進(jìn)行。

3 結(jié)果分析

3.1 總糖含量

以葡糖糖標(biāo)準(zhǔn)液的濃度(C)為橫坐標(biāo)，吸光度值(A)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(圖1)，得出回歸方程。

圖1 藍(lán)靛果總糖測(cè)量標(biāo)準(zhǔn)曲線

Abs = K1×(C) + K0

K0=0.0091 K1=0.00673 R2=0.9995

圖2 5種漿果果皮果肉總糖含量

將測(cè)定的藍(lán)靛果吸光度值帶入回歸方程，經(jīng)過(guò)計(jì)算得出5種藍(lán)靛果的果皮中總糖含量(圖2)依次為篤斯1.72mg/g>蓓蕾0.8mg/g>藍(lán)鳥(niǎo)0.65mg/g>野生藍(lán)靛果0.06mg/g>寬葉藍(lán)靛果0.54mg/g；5種藍(lán)靛果果肉中總糖含量依次為篤斯0.9mg/g>蓓蕾0.7mg/g>藍(lán)鳥(niǎo)0.6mg/g>寬葉藍(lán)靛果0.4mg/g>野生0.11mg/g。

3.2 黃酮含量

以蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液的濃度(C)為橫坐標(biāo)，吸光度值(A)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(圖3)，得出回歸方程。

圖3 藍(lán)靛果黃酮含量測(cè)量標(biāo)準(zhǔn)曲線

Abs = K1×(C) + K0

K0=0.09933 K1=0.2988 R2=0.9998

圖4 5種漿果果皮果肉黃酮含量

將測(cè)定的藍(lán)靛果吸光度值帶入回歸方程，經(jīng)過(guò)計(jì)算得出5種藍(lán)靛果的果皮中黃酮含量(圖4)依次為蓓蕾1.88mg/g>野生藍(lán)靛果1.46mg/g>寬葉藍(lán)靛果1.36mg/g>藍(lán)鳥(niǎo)1.35mg/g>篤斯1.29mg/g；5種藍(lán)靛果果肉中黃酮含量依次為野生藍(lán)靛果1.05mg/g>篤斯0.8mg/g>寬葉藍(lán)靛果0.79mg/g>蓓蕾0.689mg/g>藍(lán)鳥(niǎo)0.53mg/g。

3.3 單寧含量

以沒(méi)食子酸濃標(biāo)準(zhǔn)液濃度(C)為橫坐標(biāo)，吸光度值(A)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖3，得出回歸方程。

圖5 藍(lán)靛果單寧含量測(cè)量標(biāo)準(zhǔn)曲線

Abs = K1×(C) + K0

K0=-0.16649 K1=0.1432 R2=0.9995

圖6 5種漿果果皮果肉單寧含量

將測(cè)定的藍(lán)靛果吸光度值帶入回歸方程，經(jīng)過(guò)計(jì)算得出5種藍(lán)靛果的果皮中單寧含量(圖6)依次為野生藍(lán)靛果0.144mg/g>蓓蕾0.141mg/g>篤斯0.139mg/g>藍(lán)鳥(niǎo)0.127mg/g>0.119 mg/g>寬葉藍(lán)靛果0.119mg/g；5種藍(lán)靛果果肉中單寧含量依次為野生藍(lán)靛果0.110mg/g>篤斯0.105mg/g>蓓蕾0.084mg/g>寬葉藍(lán)靛果0.071mg/g>藍(lán)鳥(niǎo)0.067mg/g。

3.4 SOD含量

以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD 值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖4，得出歸回方程。

y=127.79x-2.9408

R2=0.9901

根據(jù)樣品的 OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與 OD 值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的 OD 值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度，經(jīng)過(guò)計(jì)算得出5種藍(lán)靛果果皮中SOD含量(圖8)依次為篤斯1348.053U/g>蓓蕾1296.939 U/g>寬葉藍(lán)靛果1284.160 U/g>藍(lán)靛果1162.764 U/g>藍(lán)鳥(niǎo)964.696 U/g。5種藍(lán)靛果果肉中SOD含量依次為蓓蕾1903.921U/g>藍(lán)鳥(niǎo)1756.968U/g>寬葉藍(lán)靛果1750.578 U/g>篤斯1622.793 U/g>藍(lán)靛果1526.953 U/g。

圖7藍(lán)靛果SOD含量測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線

圖8 5種漿果果皮果肉SOD含量

4 結(jié)論

大多數(shù)果實(shí)的果皮跟果肉中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的含量都不相同，通過(guò)此次分析可以明顯看出藍(lán)靛果果實(shí)中果皮、果肉的總糖、黃酮、單寧、SOD含量分布差異較大。5種漿果果皮中總糖含量最高為篤斯1.72mg/g，果肉中總糖含量最高為篤斯0.9mg/g；5種漿果果皮中黃酮含量最高為蓓蕾1.88mg/g,果肉中黃酮含量最高為野生藍(lán)靛果1.05mg/g；5種漿果果皮中單寧含量最高為野生藍(lán)靛果0.144mg/g，5種漿果果肉中單寧含量最高為野生藍(lán)靛果0.11mg/g；5種漿果果皮中SOD含量最高為篤斯1348.053U/g，5種漿果果肉中SOD含量最高為蓓蕾1903.921 U/g。

[1]王華，徐蓉，李娜.集中小漿果生物活性物質(zhì)研究進(jìn)展[J].北方園藝,2011(8)：198-203.

[2]顏承云，谷繼偉.藍(lán)靛果忍冬果實(shí)黃酮類(lèi)成分總含量的動(dòng)態(tài)分析[J].中國(guó)野生植物資源,2004(4)：51-52.

[3]高暢，程大海.藍(lán)莓果渣提取物總酚含量及抗氧化活性研究[J].植物研究,2010(2).

AnalysisandComparisonofSeveralKindsofBerryResourcesinAlpineRegion

Gao Zhitao，Zhang Wei，Guo Xing，Wang Honggang

(Heilongjiang Academy of Forestry,Yichun,Heilongjiang 153000)

The small Xingan mountain broad leaf of Lonicera edulis,wild,blue bird,bud,wild uliginosum five broad leaf and fruit peel of indigo fruit total sugar,flavonoids,tannin and SOD content were detected. The results showed that wild Benedict total sugar content in peel was up to 1.72mg/g; bud peel flavonoids content up to 1.88mg/g; the highest 0.14405mg/g tannin content in the pericarp of local wild fruit bud; SOD content of up to 1903.921 U/g.

The broad leaf of Lonicera edulis;Total sugar;Tannin;Flavone; Superoxide dismutase

2017-08-30

黑龍江省森工總局科技支撐項(xiàng)目(sgzjy2014024)

高智濤(1983-)，男，工程師，從事食用菌、森林食品等方面研究，E-mail：gaozhitao2484@163.com。

DOI.:10.13268/j.cnki.fbsic.2017.06.009

S759.83

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