陳標, 雷小婷, 卓瑞群, 向文洲, 潘慶,*

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兩種微藻對凡納濱對蝦幼體成活率的影響

陳標1, 雷小婷1, 卓瑞群1, 向文洲2, 潘慶1,*

1. 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)海洋學(xué)院, 廣州 510642 2. 中國科學(xué)院南海海洋研究所熱帶海洋生物資源與生態(tài)重點實驗室(LMB), 廣州 510301

試驗旨在研究鈍頂螺旋藻()和sp兩種微藻培育凡納濱對蝦()幼體效果, 為開發(fā)凡納濱對蝦開口餌料提供參考依據(jù)。實驗對照組D0投喂商品螺旋藻粉, 實驗組D1、D2分別投喂鈍頂螺旋藻和sp., 每組3個重復(fù),每個重復(fù)2萬尾凡納濱對蝦幼體, 在300 L育苗桶中飼養(yǎng)七天。結(jié)果表明, D0和D1組間凡納濱對蝦存活率無顯著差異(＞0.05), 但兩組極顯著高于D2組(＜0.01)。在凡納濱對蝦育苗過程中, 水體總氨氮濃度小于50 umol·L-1、亞硝酸鹽氮濃度小于2 umol·L-1。鈍頂螺旋藻可以保證較高的幼體變態(tài)存活率, 可以作為凡納濱對蝦開口餌料新資源開發(fā)利用。

鈍頂螺旋藻;sp.; 凡納濱對蝦; 幼體; 存活率; 氨氮

1 前言

微藻是一類分布廣泛、營養(yǎng)豐富的自養(yǎng)生物, 通常含有30%—40%蛋白質(zhì)、10%—20%脂肪酸、5%—15%碳水化合物[1-2], 富含EPA、ARA和DHA等多不飽和脂肪酸[3], 對幼苗變態(tài)發(fā)育具有重要作用, 在魚、蝦、蟹、貝等水產(chǎn)動物育苗中不可或缺[4]。常用餌料微藻約有40多種, 包括綠藻門、硅藻門、金藻門和藍藻門等多個門類[5]。鈍頂螺旋藻屬于藍藻門, 含有豐富蛋白質(zhì)、維生素、脂肪酸和礦物質(zhì)[6], 在飼料中添加螺旋藻能顯著促進對蝦生長發(fā)育和免疫力[7]。sp.為綠藻門、四胞藻綱、屬藻類, 不僅蛋白質(zhì)含量高, 氨基酸組成合理, 而且脂肪的含量豐富, 占干重的20%—25%[8]。

凡納濱對蝦, 俗稱南美白對蝦, 又稱白腳蝦或白肢蝦。具有生長快, 適應(yīng)性強, 離水存活時間長, 耐鹽范圍廣, 雜食性等優(yōu)點, 是世界上養(yǎng)殖產(chǎn)量最高的三大對蝦品種之一[9]。氨氮為凡納濱對蝦育苗過程中水體普遍存在的有害物質(zhì)[10?11]。當氨氮濃度超過臨界值, 會導(dǎo)致對蝦幼體或仔蝦大量死亡[12?13]。育苗過程中使用營養(yǎng)均衡, 適口性好的餌料, 將提高仔蝦生長率, 存活率, 免疫力和抗病力。本試驗利用商品螺旋藻, 鈍頂螺旋藻和sp.為凡納濱對蝦開口餌料, 分析投喂不同種微藻對凡納濱對蝦幼體成活率、變態(tài)時間及水體氨、亞硝酸鹽氮含量影響, 以期為微藻在對蝦育苗中應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)。

2 材料方法

2.1 實驗設(shè)計與餌料

本試驗于廣東省湛江粵海東海島種苗基地開展。對照組D0投喂商品螺旋藻粉(100%藻粉, 云南某公司), 實驗組D1、D2分別投喂中國科學(xué)院南海海洋研究所提供的鈍頂螺旋藻()和sp.。鈍頂螺旋藻脂肪酸組成較為簡單, 棕櫚酸C16:0、亞油酸C18:2n-6和亞麻酸C18: 3n-3占80%以上, 飽和脂肪酸和不飽和脂肪酸比例接近1:1;sp.藻株以不飽和脂肪酸為主, 飽和脂肪酸和不飽和脂肪酸比例接近1:3, 其中亞麻酸相對含量高達34% (中國科學(xué)院熱帶海洋生物資源與生態(tài)重點實驗室測定)。每個處理設(shè)三個平行, 每個平行凡納濱對蝦幼體2萬尾, 育苗水體為300 L, 試驗周期為七天(168 h)。

2.2 實驗動物與飼養(yǎng)管理

本實驗所用親蝦為國外良種場引進, 根據(jù)GB/T 15101.1—1994檢驗合格, 不攜帶特定病原。雄蝦10-12月大, 體長>15 cm, 凈重>35—40 g; 雌蝦10—12月大, 體長>15 cm, 凈重>35—40 g。選用親蝦催產(chǎn)孵化出來的活動能力強, 附肢劃動有力的無節(jié)幼體發(fā)育為溞狀幼體, 開始餌料投喂實驗。溞狀幼體培育條件及投喂策略見表1。其中, 溞Ⅰ期藻粉和蝦片用300目篩網(wǎng)搓洗投喂, 溞Ⅱ期藻粉和蝦片用250目篩網(wǎng)搓洗投喂, 溞Ⅲ期藻粉和蝦片用200目篩網(wǎng)搓洗投喂。每天早上于7:30測量水體溫度及對蝦幼體密度, 并根據(jù)幼體密度調(diào)整投餌量。溞Ⅰ期(Z1)水體溫度為28.0—30.0 ℃, 微弱充氣; 溞Ⅱ期(Z2)水體溫度為30.5—31.0 ℃, 充氣量為微波狀; 溞Ⅲ期(Z3) 水體溫度為30.5—31.0 ℃, 充氣量為沸騰狀。

2.3 樣品采集及測定方法

每天分別于7:00和19:00各取一次水樣, 分別取上中下層水混合樣品, 測定水中氨氮、亞硝酸鹽等水質(zhì)因子。每天16:00取一定數(shù)量幼體進行鏡檢, 并記錄幼體發(fā)育變態(tài)時間及幼體數(shù)量變化情況。

水中氨氮采用奈氏試劑法測定, 亞硝酸鹽氮采用重氮-偶氮比色法測定, 鹽度使用鹽度計測量, 幼體密度采用水體比例法進行估算。

2.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與處理

試驗數(shù)據(jù)用平均值±標準誤表示, 采用SPSS 20.0版軟件進行分析和統(tǒng)計, 先對數(shù)據(jù)作單因素方差分析(One-way ANOVA), 若組間差異顯著, 再采用Duncan’s多重比較, 顯著性水平為0.05。

3 試驗結(jié)果

3.1 微藻對凡納濱對蝦幼體存活率影響

隨兩種微藻培育凡納濱對蝦時間增加, 各組凡納濱對蝦存活率逐漸降低。7天后, D0、D1和D2組凡納濱對蝦幼體存活率分別為51.51%±5.86%, 51.52%±1.24%, 2.88%±2.25%。其中, D2組凡納濱對蝦幼體存活率極顯著低于D0組和D1組 (＜0.01), 后兩者無顯著差異(＞0.05)(表2)。

表1 凡納濱對蝦溞狀幼體各期投喂量

注: *投喂量初期為0.60 g/萬尾·天, 水體計數(shù)法估量幼體變態(tài)發(fā)育到下一期占半數(shù)時調(diào)整為1.00 g/萬尾·天, 下同。

表2 各餌料組凡納濱對蝦幼體7天的存活率(%)

注: 數(shù)據(jù)肩標字母不同表示差異顯著(<0.05)。

3.2 微藻對凡納濱對蝦幼體各期變態(tài)率影響

微藻對凡納濱對蝦幼體各期變態(tài)率的影響見表3。兩種微藻培育第三天時, 各實驗組Z2均多于Z1; 培育第四天時, D0和D1組Z2少于Z3, 而D2組Z2多于Z3且Z3多余Z1; 培育第五天時, D0和D1組均為Z3, D2組Z2多于Z3且Z3多余Z1; 培育第六天和第七天時, D0和D1組Z3多于M1, D2組Z2多于Z3。經(jīng)過7天培育, D2組未能順利完成退殼幾乎停留在Z2, D1組比D0組溞狀幼體從第Ⅲ期到糠蝦幼體第Ⅰ期順利蛻殼比例相對較高。

3.3 微藻對凡納濱對蝦育苗期間水體氨氮含量影響

兩種微藻對凡納濱對蝦育苗期間水體氨氮含量影響見表4。投喂微藻后72小時內(nèi)各組氨氮含量均呈現(xiàn)為上升趨勢, 72小時各實驗組氨氮含量分別到達(40.39±0.97) μmol·L-1, (33.42±0.44) μmol·L-1和(27.93±1.15) μmol·L-1。隨后各組氨氮含量均在一定范圍內(nèi)呈現(xiàn)波動變化趨勢, 168小時各組氨氮含量分別為(44.81±0.91) μmol·L-1, (44.81±0.91) μmol·L-1和(24.00±1.67) μmol·L-1。

3.4 微藻對凡納濱對蝦育苗期間水體亞硝酸鹽氮含量影響

兩種微藻對凡納濱對蝦育苗期間水體亞硝酸鹽氮的影響見表5。凡納濱對蝦育苗期間各組水體亞硝酸鹽氮含量均呈現(xiàn)緩慢上升趨勢。兩種微藻培育凡納濱對蝦168小時期間各組亞硝酸鹽氮含量無顯著差異(＞0.05)。其中, 經(jīng)過培育168小時, D0組水體亞硝酸鹽氮含量為(1.50±0.10) μmol·L-1, D1組水體亞硝酸鹽氮含量為(1.35±0.07) μmol·L-1, D2組水體亞硝酸鹽氮含量為(1.50±0.10) μmol·L-1。

表3 各餌料組凡納濱對蝦幼體在微藻飼養(yǎng)7天中所處的變態(tài)期

注: *Z1代表溞狀幼體第Ⅰ期, Z2代表溞狀幼體第Ⅱ期, Z3代表溞狀幼體第Ⅲ期, M1代表糠蝦幼體第Ⅰ期。

表4 育苗水體中氨氮含量 (umol·L-1)

Tab.4 The content of ammonia nitrogen in seed rearing water (umol·L-1)

表5 投喂微藻餌料后育苗水體中亞硝酸鹽氮含量 (umol·L-1)

4 討論

4.1 投喂不同微藻對凡納濱對蝦幼體存活率及變態(tài)率的影響

凡納濱對蝦繁殖周期長, 生長快, 疾病抵抗能力強, 在我國沿海區(qū)域廣泛養(yǎng)殖。凡納濱對蝦蛋白質(zhì)需要量為30%, 脂類需要量為6%—7.5%[14-15]。在水產(chǎn)動物育苗過程中, 餌料不合適或者營養(yǎng)不足會影響幼體存活率和變態(tài)[16]。微藻含有豐富蛋白質(zhì)、脂肪、維生素及微量元素等。其中, 螺旋藻富含蛋白質(zhì)(60%—70%), 多不飽和脂肪酸和礦物質(zhì)[17],sp脂肪含量為干重的33.04%[18]。營養(yǎng)豐富的微藻是貝類、魚蝦等經(jīng)濟水產(chǎn)養(yǎng)殖動物的良好天然餌料[19]。

在本試驗條件下, 綜合育苗過程中幼體生長、變態(tài)、發(fā)育和最終存活率等指標表明, 投喂商品螺旋藻和鈍頂螺旋藻的凡納濱對蝦幼體存活率相對較好, 能較為順利變態(tài)到下一期, 并且投喂商品螺旋藻粉的溞狀幼體Ⅲ期發(fā)育到糠蝦幼體Ⅰ期時間更短。相似研究結(jié)果已有報道, 劉惠芳等發(fā)現(xiàn)螺旋藻可以替代傳統(tǒng)的蛋黃、黃豆?jié){及鹵蟲幼蟲來投喂幼蝦, 并且能更好地促進其生長發(fā)育[20]。劉立鶴等認為, 螺旋藻能促進凡納濱對蝦生長, 提高飼料消化利用率[21]。何金星等通過對飼料添加螺旋藻對克氏原螯蝦生長性能的影響研究結(jié)果表明, 適量螺旋藻能促進螯蝦生長, 其中, 2%螺旋藻添加量對成蝦增重率和不同蝦齡螯蝦的含肉率明顯提升[22]。在凡納濱對蝦育苗過程中, 螺旋藻粉能有效保證對蝦幼體存活率, 一定程度上能促進其變態(tài)發(fā)育, 是凡納濱對蝦開口餌料的資源微藻之一。

本試驗中投喂螺旋藻的凡納濱對蝦幼體存活率顯著高于投喂sp.的凡納濱對蝦幼體存活率, 該現(xiàn)象可能是由于sp.細胞壁較堅固[23], 凡納濱對蝦攝食sp.后, 不易消化, 幼體營養(yǎng)吸收不足, 不能順利變態(tài)發(fā)育到下一階段所致。目前, 未見sp.在凡納濱對蝦培育中應(yīng)用的相關(guān)報道, 尚有待進一步深入研究。而螺旋藻含有豐富蛋白質(zhì)、維生素、脂肪酸和礦物質(zhì), 在飼料中添加螺旋藻能顯著提高對蝦存活率并促進變態(tài)發(fā)育[6-7]。因此, 螺旋藻可以作為凡納濱對蝦開口餌料新資源開發(fā)利用。

4.2 投喂不同微藻對凡納濱對蝦育苗期間氨氮含量及亞硝酸鹽氮含量的影響

氨氮及亞硝酸鹽氮均是對蝦育苗過程中重要水質(zhì)污染因素, 主要由對蝦殘餌、排泄物及未能清出死蝦苗等有機物分解產(chǎn)生[24-26]。研究表明, 當養(yǎng)殖水體中的亞硝酸鹽氮進入對蝦血淋巴后, 能夠使得氧合血藍蛋白轉(zhuǎn)化為脫氧血藍蛋白, 以至于血淋巴對氧的親和性降低, 降低機體的輸氧能力, 對機體產(chǎn)生毒害作用[27-28]。

凡納濱對蝦幼蝦水體中總氨氮及亞硝酸鹽氮的安全濃度分別為56.21 μmol·L-1、136.43 μmol·L-1[10],在本試驗條件下, 各組水中的總氨氮和亞硝酸鹽氮含量均在安全濃度范圍內(nèi)(總氨氮(非離子氨氮)<50 μmol·L-1、亞硝酸鹽氮<2 μmol·L-1)?？偘钡臐舛入S著培育時間延長而呈明顯上升趨勢, 這是由于試驗過程中不換水, 對蝦育苗過程中氨氮濃度持續(xù)上升, 而且上升速度越來越快。該現(xiàn)象與餌料和糞便被微生物分解產(chǎn)氨及對蝦本身排泄氨等有關(guān)[29-30]。本試驗中盡管總氨氮濃度和亞硝酸鹽氮的濃度都在安全濃度范圍內(nèi), 但幼蝦成活率還是呈下降趨勢, 說明即使在安全濃度的氨氮和亞硝酸鹽氮, 含量偏高對幼體成活率、變態(tài)率和生產(chǎn)效益仍有一定負面影響。

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Effects of two microalgae on the survival rate oflarvae

CHEN Biao1, LEI Xiaoting1, ZHUO Ruiqun1, XIANG Wenzhou2, PAN Qing1,*

1. College of Marine Sciences,South China Agricultural University,Guangzhou510642, China 2.Key Laboratory of Tropical Marine Bio-resources and Ecology (LMB), South China Sea Institute of Oceanology, Guangzhou 510301, China

The feeding trial was conducted to compare the effects ofandsp. on the survival rate oflarvae and provide the theoretical basis for shrimp’s start-feed. Three experimental groups in triplicate were designed and 20 thousand nauplius in each 300L tank were fed with commercial Sprinulian (D0),(D1) andsp.(D2), separately, for 7 days. The results showed that the survival rates of D0 and D1 were significantly higher than those of D2 (<0.01), while there was no significant difference between D0 and D1 (>0.05). The contents of ammonia nitrogen and nitrite nitrogen were below 50 μmol·L-1and 2 μmol·L-1respectively during shrimp larvae culture. The results indicated thatcould ensure higher survival rate in metamorphosis and be used as a new resource in shrimp’s start-feed.

;sp;; survival rate; larvae; ammonia nitrogen

10.14108/j.cnki.1008-8873.2017.06.011

S963.73

A

1008-8873(2017)06-078-05

2016-09-22;

2016-11-07

廣東省漁港建設(shè)與漁業(yè)產(chǎn)業(yè)發(fā)展專項(A201601A13); 中國科學(xué)院海洋生物資源可持續(xù)利用重點實驗室開放基金（LMB17011008）

陳標(1987—), 男, 河北保定人博士研究生, 主要從事水產(chǎn)經(jīng)濟動物營養(yǎng)代謝, E-mail: chenbiao11@mails.ucas.ac.cn

潘慶(1969—), 女, 教授, 主要從事水產(chǎn)經(jīng)濟動物營養(yǎng)飼料, E-mail: qpan@scau.edu.cn