胥亞云，吳建蘭，曹新梅，陳玲玲，高梟穎(聯(lián)合國南通農(nóng)藥劑型開發(fā)中心，江蘇南通 226006)

35%氟唑·嘧菌酯微囊懸浮-懸浮劑高效液相色譜分析

胥亞云，吳建蘭，曹新梅，陳玲玲，高梟穎
(聯(lián)合國南通農(nóng)藥劑型開發(fā)中心，江蘇南通 226006)

采用高效液相色譜法，以色譜柱ZORBAX SB-C18(4.6×l50 mm，5 μm)為固定相，以甲醇和水為流動(dòng)相，用二極管陣列檢測器(DAD)，在225 nm，同時(shí)測定35%氟唑·嘧菌酯微囊懸浮-懸浮劑中的有效成分。結(jié)果表明，氟環(huán)唑和嘧菌酯的線性相關(guān)系數(shù)分別為0.999 7、0.999 6，標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.027、0.18，變異系數(shù)分別為0.53%、0.60%，平均回收率分別為99.8%、99.5%。

氟環(huán)唑；嘧菌酯；高效液相色譜；分析

氟環(huán)唑(epoxiconazo1e)屬內(nèi)吸型三唑類殺菌劑，兼具保護(hù)和治療作用，其作用機(jī)理是抑制病菌甾醇的合成，從而使病菌細(xì)胞壁的形成受到阻礙[1]。嘧菌酯(azoxystrobin)是內(nèi)吸型甲氧基丙烯酸酯類農(nóng)藥，能夠抑制真菌線粒體的呼吸作用來阻止其能量的合成，能夠有效防治白粉病、葉斑病、霜霉病等病害，被廣泛應(yīng)用于稻谷、果蔬等農(nóng)作物，且對(duì)作物安全性高[1]。二者合用，氟環(huán)唑?qū)︵拙シ乐嗡炯y枯病有明顯的增效作用[2]。35%氟唑·嘧菌酯微囊懸浮-懸浮劑為南通聯(lián)農(nóng)佳田作物科技有限公司的產(chǎn)品，主要用于小麥紋枯病、稻瘟病、稻曲病的防治。目前氟環(huán)唑和嘧菌酯單劑的分析方法已有報(bào)道[3,4]，但尚未見該復(fù)配制劑分析方法公開報(bào)道。本文采用液相色譜法同時(shí)測定試樣中氟環(huán)唑和嘧菌酯的含量，方法簡便、準(zhǔn)確，適用于農(nóng)藥制劑質(zhì)量控制。

1 試驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

儀器：安捷倫1200高效液相色譜儀；二極管陣列檢測器(DAD)；色譜柱：Agilent ZORBAX SB-C18(4.6×l50 mm，5 μm)，不銹鋼柱；過濾器：濾膜孔徑約0.45 μm。

水：新蒸二次蒸餾水；甲醇：色譜級(jí)；氟環(huán)唑標(biāo)樣：已知質(zhì)量分?jǐn)?shù)98.6%(上海市農(nóng)藥研究所)，嘧菌酯標(biāo)樣：已知質(zhì)量分?jǐn)?shù)98.2%(上海市農(nóng)藥研究所)；試樣：35%氟唑·嘧菌酯微囊懸浮-懸浮劑(南通聯(lián)農(nóng)佳田作物科技有限公司)。

1.2 色譜條件

流動(dòng)相：甲醇/水=63/37(體積比)；流速：1.0 mL/min；柱溫：室溫；檢測波長：225 nm；進(jìn)樣體積：5 μL。保留時(shí)間：嘧菌酯約為5.3 min，氟環(huán)唑約為11.4 min。

1.3 測定步驟

1.3.1 標(biāo)樣溶液的配制

稱取氟環(huán)唑標(biāo)樣0.04 g和嘧菌酯標(biāo)樣0.24 g (均精確至0.000 2 g)，置于50 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容，作為標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液。準(zhǔn)確移取上述溶液10 mL于另一50 mL容量瓶中，以流動(dòng)相定容，搖勻，過濾，備用。

1.3.2 試樣溶液的配制

稱取試樣0.8 g(精確至0.000 2 g)，置于50 mL容量瓶中，用甲醇超聲溶解10 min，冷卻后用甲醇定容。準(zhǔn)確移取上述溶液10 mL于另一50 mL容量瓶中，以流動(dòng)相定容，搖勻，過濾，備用。

1.3.3 測定

在上述色譜條件下，待儀器基線穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針標(biāo)樣溶液，計(jì)算各針峰面積的變化率，直至相鄰2針峰面積變化≤1.0%后，方可進(jìn)行樣品分析。進(jìn)樣順序?yàn)椋簶?biāo)樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)樣溶液。典型色譜圖見圖1、2。

圖1 氟環(huán)唑和嘧菌酯標(biāo)樣色譜圖

圖2 35%氟唑·嘧菌酯微囊懸浮-懸浮劑色譜圖

1.3.4 計(jì)算

將測得的2針試樣溶液以及試樣前后2針標(biāo)準(zhǔn)溶液中氟環(huán)唑(或嘧菌酯)的峰面積分別平均，試樣中氟環(huán)唑(或嘧菌酯)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)W(%)按下式進(jìn)行計(jì)算：

式中：A1為標(biāo)樣溶液中氟環(huán)唑(或嘧菌酯)峰面積的平均值；A2為試樣溶液中氟環(huán)唑(或嘧菌酯)峰面積的平均值；m1為氟環(huán)唑(或嘧菌酯)標(biāo)樣的質(zhì)量，g；m2為試樣的質(zhì)量，g；p為氟環(huán)唑(或嘧菌酯)標(biāo)樣的質(zhì)量百分含量，%。

2 結(jié)果與討論

2.1 檢測波長的選擇

檢測波長直接影響峰面積的大小，選擇任一濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)樣，通過DAD檢測器，在190～400 nm范圍內(nèi)進(jìn)行光譜掃描，得到氟環(huán)唑和嘧菌酯的紫外吸收光譜圖(圖3、4)。從圖可以看出，二者的最大吸收波長分別為205 nm和201 nm，考慮到甲醇的截止波長為205 nm，為了避免溶劑的干擾，選擇225 nm作為檢測波長。

圖3 氟環(huán)唑光譜圖

圖4 嘧菌酯光譜圖

2.2 流動(dòng)相的選擇

為了得到較好的峰形、合適的保留時(shí)間及較高的分離度，首先選擇甲醇-水體系作為流動(dòng)相。在Agilent ZORBAX SB-C18(4.6×l50 mm，5 μm)色譜柱上比較不同體積配比甲醇-水流動(dòng)相的洗脫能力，發(fā)現(xiàn)甲醇/水體積比為63/37時(shí)，2種物質(zhì)分離度良好，峰形對(duì)稱，且保留時(shí)間適當(dāng)。因此選擇甲醇/水=63/37(體積比)作為流動(dòng)相。

2.3 方法的線性相關(guān)性測定

用移液管分別移取1.3.1中的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液1.0、2.0、5.0、8.0、10.0 mL于5個(gè)25 mL容量瓶中，用甲醇稀釋，定容至刻度搖勻，制成系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。在上述色譜條件下測其峰面積。分別以濃度和峰面積為X軸和Y軸，繪制線性關(guān)系曲線(圖5、6)，得到回歸方程，分別為y氟環(huán)唑=5 949x+5.233 3，y嘧菌酯=15 197x+233.31，相關(guān)系數(shù)分別為R氟環(huán)唑=0.999 7，R嘧菌酯=0.999 6。

2.4 方法精密度試驗(yàn)

對(duì)同一樣品進(jìn)行5次平行測定。統(tǒng)計(jì)結(jié)果為：氟環(huán)唑的含量平均值為5.03%，標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.027，變異系數(shù)為0.53%；嘧菌酯的含量平均值為30.23%，標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.18，變異系數(shù)為0.60% (表1)。

表1 方法精密度試驗(yàn)

圖5 氟環(huán)唑線性關(guān)系圖

圖6 嘧菌酯線性關(guān)系圖

2.5 方法準(zhǔn)確度試驗(yàn)

在已知含量的5個(gè)平行樣品中，分別加入1.3.1中的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液1、2、3、4、5 mL，按照上述色譜條件和操作方法進(jìn)行分析，測得加標(biāo)回收結(jié)果(表2)。結(jié)果顯示，氟環(huán)唑的回收率為97.55%～100.63%，平均回收率為99.8%；嘧菌酯的回收率為98.37%～100.62%，平均回收率為99.5%。

表2 準(zhǔn)確度試驗(yàn)

2.6 結(jié)論

試驗(yàn)結(jié)果表明，本方法可以測定35%氟唑·嘧菌酯微囊懸浮-懸浮劑中2種有效成分的含量。方法線性關(guān)系良好，精密度和準(zhǔn)確度高，操作簡便、快捷，是一種較為實(shí)用的分析方法。

[1] 劉長令. 世界農(nóng)藥大全:殺菌劑卷[M]. 北京: 化學(xué)工業(yè)出版社,2006:122－126,286.

[2] 李陽,俞永健,鄭仕華,等. 氟環(huán)唑?qū)︵拙シ乐嗡炯y枯病的增效作用[J]. 浙江農(nóng)業(yè)科學(xué),2014,(8): 1222－1224.

[3] 陳振山,王素麗,劉豐茂. 氟環(huán)唑高效液相色譜分析[J]. 農(nóng)藥,2004,43(12): 557－558.

[4] 于康平,李澤方,徐韶康,等. 嘧茵酯的高效液相色譜分析[J]. 農(nóng)藥,2008,47(4): 275－276.

HPLC analysis of Epoxiconazo1e·Azoxystrobin 35% ZC

XU Yayun,WU Jianlan,CAO Xinmei,CHEN Lingling,GAO Xiaoying
(UN Nantong Pesticide Formulation Development Center,Nantong 226006,Jiangsu. China)

A method was established for the separation and determination of epoxiconazo1e and azoxystrobin in epoxiconazo1e·azoxystrobin 35% ZC by HPLC using methanol and water as mobile phase,ZORBAX SB-C18column as stainless steel pillar stuffed,DAD,and 225 nm wavelength. The results showed that the linear correlation coeficients for epoxiconazo1e and azoxystrobin were 0.999 7 and 0.999 6,the standard deviations were 0.027 and 0.18，the variation coeffients were 0.53% and 0.60%,the average recovery was 99.8% and 99.5% respectively.

epoxiconazo1e; azoxystrobin; HPLC; analysis

10.16201/j.cnki.cn31-1827/tq.2017.06.12

TQ450.7

A

1009-6485(2017)06-0056-03

胥亞云，Tel: 0513-83538462，E-mail: nantongxyy@163.com。

2017-09-05。