周恒+宋揚(yáng)+胡勝甜+吳計劃+王芬

摘 要：目的：分析不同產(chǎn)地不同年份不同規(guī)格丹皮的質(zhì)量。方法：測定不同產(chǎn)地不同年份丹皮的水分，HPLC法測定丹皮中丹皮酚的含量。結(jié)果：丹皮酚作為有效成分評價，其含量最高為2.90%，最低為1.78%。結(jié)論：不同產(chǎn)地年份及規(guī)格的質(zhì)量差異較大，銅陵GAP基地丹皮質(zhì)量為優(yōu)。

關(guān)鍵詞：丹皮；丹皮酚；質(zhì)量分析；評價

中圖分類號 R282.71 文獻(xiàn)標(biāo)識碼 A 文章編號 1007-7731（2017）24-0106-03

Abstract：Objective：To analyze the quality of Cortex Moudan which grew for 3～6 years from main planting parts in Anhui Province. Methods：Using toluene to test the content of moisture and using HPLC method to test the content of paeonol.Results：Paeonol content of Cortex Moutan collected from main planting parts in Anhui Province was from 1.78% to 2.90%.Conclusion：There is diversity between the various places of Anhui Province，according to the content of paeonol，the quality of Cortex Moutan from the Good Agricultural Practice（GAP） of Tongling is the best of all.

Key words：Cortex Moudan；Paeonol；Quality analysis；Evaluation

牡丹皮，又名丹皮，為毛茛科芍藥屬植物牡丹（Paeonia suffruticosa Andr.）的干燥根皮。秋季采挖根部，除去細(xì)根，剝?nèi)「ぃ瑫窀啥谩，F(xiàn)代中藥藥理研究表明，丹皮含有丹皮酚、芍藥苷等多種活性成分[1]，丹皮酚是丹皮中重要的有效成分，具有清熱涼血，活血祛瘀的功效[2]，還具有抗腫瘤的作用[3]，通常以丹皮酚含量作為質(zhì)量控制的主要指標(biāo)[4]。丹皮主產(chǎn)于安徽、陜西、山東等地，以安徽亳州量最大，其次為銅陵鳳凰山一帶，因而對安徽丹皮的質(zhì)量分析顯得尤為重要。為此，本實(shí)驗(yàn)對2大產(chǎn)地10個地區(qū)31批次丹皮進(jìn)行了質(zhì)量分析，通過HPLC法測定丹皮中主成分丹皮酚的含量，為安徽丹皮質(zhì)量控制提供參考。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 儀器設(shè)備 Agilent高效液相色譜系統(tǒng)（1260 Infinity II，VWD Detector，ChemStation色譜工作站）；OHAUS EX125D 電子分析天平（1/100000）；超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；電熱套等。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)品及試劑 丹皮酚對照品（Sigma-ALDRICH，STBF-4379V）；甲醇（HPLC級，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；超純水。其余試劑為分析純。

1.3 實(shí)驗(yàn)樣品 31批次丹皮分別采自銅陵GAP基地、銅陵聽泉居、銅陵示范園、銅陵繆村、南陵丫山西小、南陵丫山龍朱、亳州五馬、亳州譙東、亳州大寺，規(guī)格按粗細(xì)劃分為一條和二條。采集時間為2017年9月，遵從不同產(chǎn)地丹皮傳統(tǒng)采收期。鮮樣亦按統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)由同樣人員進(jìn)行處理。

2 研究方法

2.1 水分的測定方法 取樣品適量（約相當(dāng)于含水量1～4mL），精密稱定，置圓底燒瓶中，加甲苯約200mL。水分測定儀各部分連接，自冷凝管頂端加入甲苯，至充滿水分測定管的狹細(xì)部分，將圓底燒瓶置電熱套中或用其他適宜方法緩緩加熱，待甲苯開始沸騰時，調(diào)節(jié)溫度，使每秒鐘餾出2滴。待水分完全餾出，即測定管刻度部分的水量不再增加時，將冷凝管內(nèi)部先用甲苯?jīng)_洗，再用飽蘸甲苯的長刷或其他適宜方法，將管壁上附著的甲苯推下，繼續(xù)蒸餾5min，放冷至室溫，檢讀水量。

2.2 丹皮酚含量的分析方法

2.2.1 色譜條件 色譜柱：Agilent ZORBAX SB-C18（4.6mm×150mm，5μm）；流動相：甲醇-水（45：55）；檢測波長274nm；柱溫30℃；流量1.0mL/min；在此色譜條件下，理論板數(shù)按丹皮酚峰計算大于9000，其色譜圖見圖1。

2.2.2 對照品溶液制備 精密稱取適量丹皮酚對照品，加甲醇制成每1mL含0.02mg、0.2mg丹皮酚的溶液，即得。

2.2.3 供試品溶液制備 樣品粉碎，通過24目和65目篩，精密稱取65目篩面上的粉末0.5g，加入甲醇，搖勻后稱定重量，超聲處理（功率300W，頻率50kHz）30min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻過濾。精密取續(xù)濾液1mL，置10mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用注射器吸取稀釋液，通過0.22μm針頭過濾器，即得。其色譜圖見圖2。

2.2.4 線性范圍考察 精密量取濃度為0.2mg·mL-1的丹皮酚對照品溶液0.2，0.6，1.0，1.4，1.8mL，分別定容到10mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。5個不同濃度的對照品分別進(jìn)樣2次，每次20μL，以峰面積為Y軸，對照品進(jìn)樣量為X軸，繪制散點(diǎn)圖，得回歸方程為Y=2061.5X+15.74，γ=0.9994，丹皮酚在0.8～7.2μg線性關(guān)系良好。見圖3。

2.2.5 精密度試驗(yàn) 取上述濃度為0.02mg·mL-1的丹皮酚對照品溶液，連續(xù)重復(fù)進(jìn)樣5次，每次進(jìn)樣20μL，按上述色譜條件測定，計算RSD=1.16%，表明精密度良好。endprint

2.2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取供試品溶液分別在0，2，4，6，8，12h測定，丹皮酚峰面積RSD=1.69%，表明丹皮酚在12h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.2.7 重現(xiàn)性試驗(yàn) 精密稱取同一批（26號）丹皮樣品5份，按2.2.3制成供試品溶液，測得丹皮酚平均含量為2.11%，RSD=1.27%，重現(xiàn)性良好。

2.2.8 回收率試驗(yàn) 采取加樣回收的方法，精密稱取0.5g已知丹皮酚含量的丹皮樣品，分別精密加入丹皮酚對照品，按2.2.3制成供試品溶液，測得結(jié)果見表1，表明加樣回收符合規(guī)定。

2.2.9 樣品含量測定 上機(jī)測定，對照品及供試品溶液進(jìn)樣量均為20μL，以外標(biāo)法計算，樣品的測定結(jié)果見表2。

3 結(jié)果與分析

3.1 不同產(chǎn)地丹皮酚測定結(jié)果分析 從不同產(chǎn)地丹皮酚含量測定結(jié)果可以看出，安徽鳳凰山一帶為牡丹皮的道地產(chǎn)區(qū)，含量普遍較高，符合文獻(xiàn)報道結(jié)果，其中以北京同仁堂安徽中藥材有限公司GAP種植基地的最高（達(dá)2.90%），表明實(shí)施了標(biāo)準(zhǔn)化的GAP種植基地，對提高和穩(wěn)定丹皮的質(zhì)量意義重大。亳州丹皮酚含量相對較低，與當(dāng)?shù)刈匀画h(huán)境及土壤條件等多種因素有關(guān)，具體情況有待進(jìn)一步研究。見圖4。

3.2 同一產(chǎn)地不同生長年限的丹皮酚含量分析 對同一產(chǎn)地不同年限采收的丹皮酚含量進(jìn)行比較，隨著年限增加丹皮酚含量逐漸升高，見圖5，其原因是丹皮為多年生木本植物，丹皮酚儲于韌皮部薄壁組織細(xì)胞中[5]，隨著生長年限增加，丹皮酚會逐漸積累。但推遲采挖年限會導(dǎo)致產(chǎn)量下降，應(yīng)從產(chǎn)量和含量角度綜合考慮，確定適宜的種植年限。

3.3 同一產(chǎn)地相同生長年限的丹皮酚含量分析 對同一產(chǎn)地相同生長年限采收的丹皮酚含量進(jìn)行比較，一條含量高于二條，見圖6，其原因是劃分規(guī)格時，較粗壯的一條多為主根皮，二條則多為側(cè)根皮，主根生長年限較側(cè)根更長，符合3.2的預(yù)期。由上述結(jié)果可以為丹皮質(zhì)量等級細(xì)分提供參考依據(jù)。

3.4 丹皮酚含量的置信區(qū)間分析 根據(jù)概率論與數(shù)理統(tǒng)計有關(guān)理論，實(shí)驗(yàn)測量結(jié)果符合正態(tài)分布，95%的置信度接受實(shí)驗(yàn)結(jié)果的取值范圍為：A±1.96C，其中A為平均值，C為標(biāo)準(zhǔn)方差。由表2數(shù)據(jù)得出鳳丹地理標(biāo)識產(chǎn)區(qū)（銅陵鳳凰山及南陵丫山一帶）丹皮酚含量以95%置信度可接受的取值范圍為：（2.15±0.52）%，亳州地區(qū)丹皮酚含量以95%置信度可接受的取值范圍為：（1.81±0.10）%。中國藥典規(guī)定丹皮酚含量不得少于1.2%，是全面考慮了產(chǎn)地、氣候、貯存及試驗(yàn)方法等眾多因素的影響，給出了較為寬泛的要求。針對道地產(chǎn)區(qū)藥材活性成分實(shí)際情況，可制定更為嚴(yán)格的地方標(biāo)準(zhǔn)，確保藥品的質(zhì)量。

參考文獻(xiàn)

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（責(zé)編：張宏民）endprint