陳惠芹

（廈門大學(xué)附屬第一醫(yī)院杏林分院病理科，福建 廈門 361002）

腫瘤為臨床常見疾病，近年來人們生活習(xí)慣不斷改變，飲食結(jié)構(gòu)逐漸調(diào)整，不良行為習(xí)慣逐漸暴露，導(dǎo)致患病人數(shù)越來越多，且呈現(xiàn)出年輕化趨勢。本病早期癥狀不典型，確診后多數(shù)為中晚期，導(dǎo)致最佳治療時(shí)機(jī)被錯(cuò)過。臨床診斷腫瘤的主要方法為病理診斷，如活檢穿刺診斷，此為金標(biāo)準(zhǔn)，雖然可以明確病灶分期與類型等，但該方法具備有創(chuàng)傷性，導(dǎo)致患者痛苦感明顯，有較差的依從性，因此臨床迫切尋找一種理想的診斷方法。磁共振、CT為臨床常用診斷方法，雖然可以確診但是有較高概率導(dǎo)致漏診或誤診。近年來臨床大量實(shí)踐證實(shí)免疫組化技術(shù)病理診斷腫瘤臨床價(jià)值較高[1-3]，且該技術(shù)將抗原修復(fù)技術(shù)、敏感檢測系統(tǒng)及自動免疫染色系統(tǒng)等充分融合，故而廣受臨床關(guān)注。另有文獻(xiàn)稱該技術(shù)聯(lián)合特殊染色病理診斷腫瘤臨床價(jià)值更高，便于臨床制定診治方案[4]?；诖诉x取70例患者，詳述特殊染色聯(lián)合免疫組化技術(shù)病理診斷腫瘤的臨床價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料：選取2016年8月至2017年8月于我院就診的腫瘤患者70例，均經(jīng)影像學(xué)檢查、手術(shù)病理等確診為惡性腫瘤。其中男性39例，男性31例，年齡為36～78歲，平均年齡為（49.2±8.3）歲；腫瘤類型：轉(zhuǎn)移性腫瘤35例，原發(fā)性肝癌15例，血管瘤8例，內(nèi)膽管瘤12例。

1.2 方法：所有患者先行活檢穿刺診斷，結(jié)合病灶位置與類型開展針對性穿刺活檢，于超聲引導(dǎo)下開展，將病變組織取出后比較于標(biāo)準(zhǔn)組織，而后使用免疫組化技術(shù)聯(lián)合PAS特殊染色、網(wǎng)狀纖維染色：①免疫組化技術(shù)：試劑主要有中性福爾馬林固定液、脫水液、透明液、浸蠟液、MaxVisionTM試劑盒、DAB試劑盒。取組織塊大小2 cm×1.5 cm×（0.2～0.3 cm）。加固定液固定6～8 h，過度固定可降低抗原的活性。經(jīng)脫水、透明、浸蠟包埋過程，切片厚度為2～3 μm，應(yīng)用防脫載玻片。特殊染色組織只需用普通載玻片。免疫組化染色處理切片組織，常規(guī)切片脫蠟后用檸檬酸抗原修復(fù)液高壓抗原修復(fù)法修復(fù)，將配制好的檸檬酸抗原修復(fù)液加入壓力鍋中，放置于電磁爐上大功率加熱至沸騰，將切片至于耐高溫深色架上，放入已沸修復(fù)液中，蓋鍋蓋，扣壓力閥，繼續(xù)加熱至壓力閥開始噴氣，計(jì)時(shí)2 min，而后將壓力鍋移離電磁爐，室溫自然冷卻。PBS沖洗2×3 min，加入Glypican-3抗體，室溫孵育60 min，PBS沖洗3×4 min，除去PBS液滴加1滴即用型MaxVisionTM試劑，室溫孵育15 min后PBS沖洗3×3 min，除去PBS液滴加DAB顯色液，顯微鏡下觀察3 min，水洗，水沖返藍(lán)，酒精透明，用樹膠封固。同時(shí)開展特殊染色處理，二甲苯脫蠟至水處理切片組織，分別行PAS特殊染色、網(wǎng)狀纖維染色。

1.3 判定標(biāo)準(zhǔn)：免疫組化技術(shù)處理后用GLypican-3判定結(jié)果，陽性標(biāo)準(zhǔn)為染色成棕黃色。特殊染色陽性標(biāo)準(zhǔn)按照陽性細(xì)胞數(shù)目與染色強(qiáng)度之乘積，前者＜1%為0分，1%～9%為1分，10%～33%為2分，34%～66%為3分，＞66%為4分；后者主要依據(jù)陽性細(xì)胞染色強(qiáng)度，無為0分，弱為1分，中等強(qiáng)度為2分，強(qiáng)著色為3分。得出乘積后按照如下標(biāo)準(zhǔn)判定：0分為陰性，1～4分為1+，5～8分為2+，9～12分為3+[5]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：應(yīng)用軟件SPSS19.0對上述數(shù)據(jù)開展統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，[n（%）]表示計(jì)數(shù)資料，卡方檢驗(yàn)開展樣本率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義用P＜0.05表示。

2 結(jié) 果

兩種方法診斷結(jié)果比較及聯(lián)合診斷陽性率分析，見表1。

表1 兩種方法診斷結(jié)果比較及聯(lián)合診斷陽性率分析（n=70）

3 討 論

免疫組化技術(shù)類似于特殊染色與電鏡觀察，在診斷疑難病例時(shí)該技術(shù)應(yīng)用廣泛。免疫組化染色對腫瘤患者開展病理診斷的基礎(chǔ)在于HE切片，需前面細(xì)致觀察HE切片后結(jié)合抗體條件與實(shí)驗(yàn)室實(shí)際需求篩查實(shí)驗(yàn)期間所需抗體，以準(zhǔn)確診斷。在光鏡缺乏的情況下需深入觀察HE切片以了解腫瘤組織，若僅依靠免疫組化技術(shù)病理診斷腫瘤則可能導(dǎo)致誤診。在判定結(jié)果時(shí)要基于細(xì)胞形態(tài)學(xué)，但不能忽視臨床醫(yī)師的工作經(jīng)驗(yàn)。比如在診斷淋巴瘤時(shí)強(qiáng)調(diào)免疫組化、臨床資料及形態(tài)學(xué)特征的融合，免疫組化技術(shù)的使用目的在于補(bǔ)充形態(tài)學(xué)價(jià)值，但無法取代形態(tài)學(xué)作用，一般而言免疫組化主要是用來明確細(xì)胞來源及分化程度，而臨床診斷腫瘤的重要指標(biāo)為形態(tài)學(xué)[6-7]。

在實(shí)驗(yàn)室病理診斷期間還要合理選擇抗體，一般實(shí)驗(yàn)室抗體主要有上皮類、軟組織類、神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞類、淋巴細(xì)胞類等抗體，在選擇時(shí)要盡量節(jié)約成本，結(jié)合實(shí)際要求合理選擇。人體腫瘤類型較多且形態(tài)各異，結(jié)合腫瘤大小與形態(tài)有上皮樣細(xì)胞、多形性腫瘤細(xì)胞、大細(xì)胞、梭形細(xì)胞等類型，因此在選擇抗體時(shí)還需與腫瘤類型相結(jié)合。在判定診斷結(jié)果時(shí)要注意的是各種抗體均可能出現(xiàn)異樣表達(dá)現(xiàn)象，因此要結(jié)合影像學(xué)檢查、臨床癥狀及醫(yī)師經(jīng)驗(yàn)等合理診斷。本組結(jié)果表明免疫組化診斷陽性率為92.8%，陽性率較高，但還是存在無法明確判斷腫瘤具體病理狀況的現(xiàn)象，為提高診斷準(zhǔn)確率臨床還會與特殊染色聯(lián)合使用。如網(wǎng)狀纖維染色，機(jī)體各個(gè)器官組織中均存在網(wǎng)狀纖維，通過染色可對病變組織網(wǎng)狀纖維疏密、數(shù)量、粗細(xì)及是否塌陷、斷裂等變化予以觀察，有利于臨床判斷疾病程度、性質(zhì)及發(fā)展情況，還有利于評估治療轉(zhuǎn)歸[8]。本組結(jié)果表明PAS特殊染色為2.0%，網(wǎng)狀纖維染色為91.4%，聯(lián)合檢測為100.0%，說明特殊染色聯(lián)合免疫組化技術(shù)病理診斷腫瘤準(zhǔn)確率高，有推廣價(jià)值。

[1] 李瑞珍,韓慶功,梁瑩瑩,等.特殊染色對犬惡性纖維組織細(xì)胞瘤的鑒別診斷[J].河南農(nóng)業(yè)科學(xué),2015,44(7)：139-142.

[2] 付璐璐,谷春會,張靜文,等.宮頸癌病理診斷的免疫組化技術(shù)的最新研究進(jìn)展[J].中國婦幼保健,2014,29(36)：6176-6178.

[3] 羅教秀,儲兵,曹曉珊,等.原位雜交與免疫組化技術(shù)用于評價(jià)化療后結(jié)直腸癌患者M(jìn)LH1、MSH2和hMSH6表達(dá)水平的對比研究[J].中南醫(yī)學(xué)科學(xué)雜志,2017,45(2)：150-152,164.

[4] 郭琦,余英豪.前列腺癌中TMPRSS2-ERG融合基因和ERG蛋白表達(dá)及其意義[J].臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志,2014,30(10)：1099-1103.

[5] 孫玉倩,李瑞珍,宋高杰,等.特殊染色法對仔豬先天性黑色素瘤的鑒別[J].動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,2015,36(5)：128-131.

[6] 王曉燕,高俊巖,王艷霞,等.網(wǎng)狀纖維染色在臨床病理診斷中的應(yīng)用及技術(shù)[J].中國醫(yī)藥導(dǎo)報(bào),2016,13(9)：72-75.

[7] 聶艷紅,王紅霞,劉慧,等.網(wǎng)狀纖維染色及P504S在胰腺實(shí)性假乳頭狀瘤鑒別診斷中的價(jià)值[J].臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志,2016,32(7)：799-801.

[8] 楊偉平,吳文喬,鄒宗楷,等.快速網(wǎng)狀纖維染色在術(shù)中快速冷凍切片病理診斷中的應(yīng)用[J].臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志,2016,32(10)：1181-1182.