□ 馬 巍 長(zhǎng)春市食品藥品檢驗(yàn)中心

蜂膠有潤(rùn)膚生肌、消炎止痛的功效，可治療胃潰瘍、口腔潰瘍、燒燙傷、皮膚裂痛及防輻射等病癥[1]。在我國(guó)，楊樹(shù)和其雜交屬的芽苞分泌物是蜂膠的主要植物來(lái)源。楊樹(shù)膠與楊樹(shù)型蜂膠提取物在感官和理化指標(biāo)上非常相似，而楊樹(shù)膠的價(jià)格卻只是蜂膠的1/3。在利益驅(qū)使下，蜂膠市場(chǎng)上以楊樹(shù)膠冒充蜂膠或在蜂膠中摻雜楊樹(shù)膠（楊樹(shù)芽提取物）的現(xiàn)象肆意橫行。目前，我國(guó)尚無(wú)嚴(yán)格鑒別蜂膠與楊樹(shù)膠的行業(yè)或產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)，使得質(zhì)量監(jiān)管部門(mén)及蜂產(chǎn)品企業(yè)無(wú)法通過(guò)有效監(jiān)管及控制來(lái)確保蜂膠的生產(chǎn)與流通。因此，目前我國(guó)蜂膠業(yè)最急迫的任務(wù)就是高效、準(zhǔn)確鑒別蜂膠質(zhì)量及真?zhèn)巍?/p>

1 方法原理

在采集并加工蜂膠時(shí)，蜂蜜中的腺體分泌物可能導(dǎo)致某些原始樹(shù)脂中的成分發(fā)生改變，致使蜂膠與植物源分泌的樹(shù)脂的成分有所不同[2]。有研究發(fā)現(xiàn)，蜂膠中含有β-葡萄糖苷酶活力，且蜜蜂在采集蜂膠、蜂巢內(nèi)傳遞蜂膠時(shí)能夠水解酚苷[3]。酚苷的基本結(jié)構(gòu)單元是更高級(jí)的水楊酸鹽類衍生物的主要降解產(chǎn)物之一的水楊苷[4]。水楊苷穩(wěn)定存在于楊樹(shù)膠中，因此可作為蜂膠與楊樹(shù)膠的鑒別指標(biāo)。此外，CCP作為特征性成分僅存在于楊樹(shù)膠中而蜂膠中不含有。因此，蜂膠中楊樹(shù)膠的確定可通過(guò)是否含有水楊苷或CCP來(lái)進(jìn)行判定。

2 分析條件的優(yōu)化

2.1 優(yōu)化提取條件

通過(guò)正交實(shí)驗(yàn)來(lái)優(yōu)化楊樹(shù)芽中水楊苷提取條件，優(yōu)化程度包括乙醇濃度、超聲提取時(shí)間、料液比、提取次數(shù)等4個(gè)因素。正交實(shí)驗(yàn)下超聲提取2g楊樹(shù)芽，合并、蒸干濾液，與甲醇混合至50mL溶液，過(guò)0.45 μm濾膜，進(jìn)行HPLC分析。

2.2 樣本制備

因蜂膠中內(nèi)含50%左右樹(shù)脂，也就是說(shuō)，蜂膠中提取的樹(shù)脂部分就相當(dāng)于楊樹(shù)膠。按照2.1的優(yōu)化條件，反復(fù)3次用75%乙醇超聲將2g楊樹(shù)芽、2g楊樹(shù)葉、2g蜂膠按照15∶1進(jìn)行30min提取。揮去多余乙醇至溶液達(dá)50mL，過(guò)0.45 μm濾膜，進(jìn)行HPLC分析。

2.3 色譜條件的可行性

2.3.1 考察線性范圍

以10mg水楊苷作對(duì)照，與甲醇混合成10mL溶液后，再用甲醇稀釋6個(gè)不同濃度的溶液作為對(duì)照，采取線性回歸，縱坐標(biāo)為峰面積，橫坐標(biāo)為對(duì)照品質(zhì)量濃度（mg/mL）。

2.3.2 檢測(cè)限（LOD）和定量限（LOQ）

連續(xù)稀釋制備好的水楊苷標(biāo)準(zhǔn)溶液至所需濃度后，進(jìn)行HPLC分析，記錄峰面積，計(jì)算檢測(cè)限（LOD）和定量限（LOQ），確定LOD為1.3 μg/mL，LOQ為5.4 μg/mL。LOD、LOQ值都不高，說(shuō)明本方法可定性、定量檢測(cè)水楊苷。

2.3.3 穩(wěn)定性試驗(yàn)

在0、3、6、9、12、24h時(shí)，對(duì)同一楊樹(shù)芽樣品溶液進(jìn)樣后，測(cè)得水楊苷色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間的RSD為0.97%，確定樣品24h相對(duì)穩(wěn)定。在1、2、3d內(nèi)，重復(fù)測(cè)定同一份楊樹(shù)芽樣品溶液，測(cè)得水楊苷色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間的RSD為2.94%，說(shuō)明樣品日間相對(duì)穩(wěn)定。

2.3.4 回收率試驗(yàn)

選取9份楊樹(shù)芽樣品，精準(zhǔn)測(cè)取容量，按高、中、低濃度水平3份為一組，加入水楊苷對(duì)照溶液，吹干，提取，測(cè)定，計(jì)算出回收率大于90%。

2.3.5 重復(fù)性試驗(yàn)

以同一批楊樹(shù)芽為對(duì)象，選取其中5份，稱量后，通過(guò)優(yōu)化條件制備及測(cè)量樣品后，得出水楊苷的峰面積為 684.76±10.498，RSD=1.531；保 留 時(shí) 間（12.608±0.008）min，RSD=0.070%，說(shuō)明本方法重復(fù)性好。

3 驗(yàn)證結(jié)果

第一，不同樹(shù)種、不同組織部位的楊樹(shù)中的水楊苷含量存在差異；同一種楊樹(shù)芽中水楊苷含量顯著高于葉子中的含量。第二，楊樹(shù)膠樣本中均可檢測(cè)到水楊苷，但樣本件水楊苷含量差異較大。第三，不同地點(diǎn)、不同時(shí)間采集的蜂膠樣本中均未檢測(cè)到水楊苷。

4 結(jié)果判定

本檢測(cè)的水楊苷、CCP是楊樹(shù)膠中含有而蜂膠中不含有的物質(zhì)。所以，若待測(cè)樣品未測(cè)到水楊苷、CCP色譜峰，該樣品則不為楊樹(shù)膠樣品。按照我國(guó)情況，定性依據(jù)為水楊苷定量限，若待測(cè)樣品中水楊苷檢測(cè)濃度在0.25mg/g以下，則表明未檢出楊樹(shù)膠。若待測(cè)樣品中未檢測(cè)到水楊苷而檢測(cè)到CCP，經(jīng)質(zhì)譜法驗(yàn)證后確定為CCP的則為楊樹(shù)膠樣品。