石青青 馬吉飛 孫英峰

（天津農(nóng)學(xué)院動物科學(xué)與動物醫(yī)學(xué)學(xué)院，天津 300384）

豬繁殖與呼吸障礙綜合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS）是由豬繁殖與呼吸障礙綜合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV）引起的危害生豬養(yǎng)殖業(yè)的重要傳染病之一，該病主要表現(xiàn)為母豬流產(chǎn)、斷奶保育階段仔豬呼吸道癥狀[1,2]。自2006年我國暴發(fā)流行高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒（Highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome virus,HP-PRRSV）以來，國內(nèi)陸續(xù)上市了多種HP-PRRSV減毒活疫苗，由于無序或不規(guī)范使用，導(dǎo)致豬場存在多種類型PRRSV流行，且處于不斷遺傳變異演化過程中，一旦成為優(yōu)勢毒株可造成大范圍流行，造成嚴(yán)重的經(jīng)濟損失。如2006年國內(nèi)流行的HP-PRRSV就是由早期經(jīng)典PRRSV遺傳演化而來[3]，該病毒的臨床傳播速度、致病力及死亡率遠(yuǎn)高于遺傳演化關(guān)系相近的早期經(jīng)典毒株[4,5]。

近年來，我國豬場流行的類NADC30毒株與美國報道NADC30毒株遺傳關(guān)系相近，推測從美國引進種豬攜帶輸入PRRSV NADC30毒株。該毒株已與國內(nèi)流行的其他亞群毒株（經(jīng)典PRRSV、HP-PRRSV或疫苗毒株）發(fā)生重組，經(jīng)遺傳變異產(chǎn)生了一類新病毒，國內(nèi)學(xué)者將這類病毒統(tǒng)稱為PRRSV類NADC30毒株。該類病毒在臨床流行過程中表現(xiàn)出了不同的致病力，部分毒株引起仔豬高致死率、部分毒株對母豬的繁殖性能造成影響[6,7,8]。在免疫了商品化PRRSV疫苗的豬場同樣發(fā)生了類NADC30 PRRSV毒株感染，這足以說明現(xiàn)有的商品化疫苗對其并無預(yù)防能力[6,9]。本文將重點描述類NADC30 PRRSV的流行現(xiàn)狀、基因組特征、致病性以及當(dāng)前商品化疫苗對類NADC30 PRRSV的免疫效力。

1 PRRSV類NADC30毒株在我國的流行現(xiàn)狀

NADC30毒株是2008年由美國國家動物疾病研究中心（NADC）研究人員首次分離并命名，該毒株與MN184A、MN184B、MN184C毒株相比，擁有相同的氨基酸缺失模式，而我國沒有關(guān)于NADC30毒株或相似缺失模式毒株的研究報道。從2012年底開始，部分學(xué)者及檢測機構(gòu)從國內(nèi)檢測分離到了與美國毒株NADC30分子進化關(guān)系十分相近的毒株，如JL580、Hnyc15、HENAN-XINX、 HENAN-HEB、 CHsx1401 等[6-9]。自2014年以來，PRRSV類NADC30毒株臨床檢出率呈現(xiàn)暴發(fā)式增長，筆者所在的省份同樣出現(xiàn)類似情況，已有大量研究報道該類毒株在國內(nèi)大部分省市廣泛流行，已經(jīng)成為PRRSV主要流行毒株[10]。發(fā)病豬場出現(xiàn)母豬群體“流產(chǎn)風(fēng)暴”，流產(chǎn)率高達40%左右，斷奶仔豬呼吸道癥狀嚴(yán)重，容易繼發(fā)鏈球菌、副豬嗜血桿菌、放線桿菌及巴氏桿菌等細(xì)菌感染，部分豬場死淘率高達20%以上，這給我國生豬產(chǎn)業(yè)帶來了新的挑戰(zhàn)[6,11]。

2 PRRSV類NADC30毒株分子遺傳變異

2.1 基因序列變異分析

PRRSV主要分為美洲型（VR2332位代表毒株）和歐洲型（LV位代表毒株）兩大類，NADC30屬于美洲型毒株，其基因組全長為15 020個堿基對，在該毒株的Nsp2基因上存在131個不連續(xù)的氨基酸缺失（“111+1+19”的缺失模式），缺失位置分別為 aa 323-433、aa 481和aa 533-551，其遺傳演化與MN 184A、MN 184B、MN 184C密切相關(guān)[12]。2013年我國河南省周峰等[9]報道HENAN-XINX、HENAN-XINX-1、HENAN-XINX-2、HENAN-HEB等毒株，分析Nsp2基因序列發(fā)現(xiàn)，這些分離毒株與美國報道的NADC30同源性為79.3%～95.2%，且擁有相似的氨基酸缺失模式，而與HP-PRRSV同源性為63.7%～74.5%，與早期經(jīng)典PRRSV同源性為67%～69.1%。對HENAN-XINX分離毒株進行全基因序列分析，該毒株與NADC30同源性高達95.43%。2015年分離于我國東北地區(qū)吉林省和黑龍江省的JL580和HLJ58毒株遺傳演化與NADC30密切相關(guān)，且 JL580毒株與國內(nèi) HP-PRRSV在 NSP2、NSP3、NSP7、ORF2a、ORF4區(qū)域可能存在重組[6]。

2.2 氨基酸序列變異分析

2015年國內(nèi)分離的類NADC30毒株（如HENAN-XINX、HENAN-HEB等），其Nsp2氨基酸序列與經(jīng)典PRRSV和HP-PRRSV同源性較低，而與NADC30同源性高達91.4%，且存在同樣的不連續(xù)的131個氨基酸缺失，模式為“111+1+19”。ORF5氨基酸同源性分析顯示，這些毒株與NADC30和MN184A、MN184B、MN184C同源性很高（89.6%～99.0%），而與經(jīng)典PRRSV以及HP-PRRSV同源性較低。N-糖基化位點分析顯示，這些毒株的GP5蛋白糖基化位點和美洲型PRRSV GP5蛋白糖基化位點數(shù)目相近，數(shù)目為3～5個[13]。對JL580毒株氨基酸序列分析發(fā)現(xiàn)，Nsp2也有3處不連續(xù)的缺失，共131個氨基酸，和NADC30以及MN 184A、MN 184B、MN 184C一樣[6]。

3 PRRSV類NADC30毒株重組事件

PRRSV屬于RNA病毒，其高突變性可能成為其逃避宿主免疫監(jiān)視的一種策略[14]。與其他亞群PRRSV毒株不同，NADC30發(fā)生重組概率特別高。根據(jù)重組毒株不同，可將類NADC30 PRRSV毒株分成四組。第一組以HNjz15毒株 （KT945017.1） 為代表，這類毒株與NADC30具有最高的相似性并且不與其他病毒重組，屬于輸入性病毒；第二組以 Chsx1401（KP861625.1）、HENA-XINX（KF611905.1） 和 HNyc15（KT945018.1）為代表，這類毒株與經(jīng)典 PRRSV（如VR-2332和CH-1a）發(fā)生重組；第三組以JL580（KR706343.1）、HENAN-HEB（KJ143621.1） 為代表，這類毒株與HP-PRRSV（如JXA1和09HEN1）發(fā)生重組；第四組以 TJnh1501（KX510269） 為代表，這類毒株與HP-PRRSV疫苗毒株（如TJM-F92）發(fā)生重組。類NADC30 PRRSV與其他亞群PRRSV重組區(qū)域主要位于非結(jié)構(gòu)蛋白區(qū)域，包括Nsp1a、Nsp2-9、Nsp11和結(jié)構(gòu)蛋白區(qū)域。

4 PRRSV類NADC30毒株致病性

NADC30毒株與其他 3株 PRRSV（NADC31、MN184和SDSU73）毒力相比，在攻毒5周齡仔豬初期發(fā)熱并在感染后第2天和第8天出現(xiàn)發(fā)熱高峰，且體溫在40℃以上。NADC30毒株感染的豬也會發(fā)生較早的病毒血癥，并且可在感染后第1天檢測到。感染NADC30毒株的豬發(fā)生間質(zhì)性肺炎，但相對而言比SDSU73毒株和MN184毒株更溫和。研究結(jié)束時沒有發(fā)現(xiàn)豬死亡。以上結(jié)果表明NADC30 PRRSV毒力相對較弱[12]。與NADC30毒株相似，仔豬在感染HNjz15后第1天發(fā)熱并持續(xù)9天。臨床主要表現(xiàn)呼吸障礙，如呼吸困難、呼吸急促和咳嗽，但整個試驗所有感染HNjz15毒株的豬均存活（試驗周期14天）。顯微鏡下可見感染HNjZ15的豬是以肺泡隔膜增厚和單核細(xì)胞浸潤為特征的間質(zhì)性肺炎，扁桃體和淋巴結(jié)可見淋巴細(xì)胞減少、急性出血和嗜中性粒細(xì)胞浸潤[8]。

然而，不同重組類型的NADC30毒株卻表現(xiàn)出了較強的致病力。用細(xì)胞傳代的類NADC30 PRRSV變異株JL580（Marc145細(xì)胞培養(yǎng)第二代）和肺勻漿上清液分別攻毒6周齡仔豬，受感染的仔豬從接種后3天出現(xiàn)高熱，并且伴有咳嗽、厭食、耳朵變紫等明顯的臨床表現(xiàn)。在感染的第7天，仔豬開始死亡，在試驗結(jié)束時所有的仔豬均死亡（試驗周期14天）[6]。綜合臨床發(fā)病癥狀，不同重組模式的類NADC30 PRRSV表現(xiàn)出極為復(fù)雜臨床致病力。

2015年本研究小組分離獲得1株類NADC30毒株（TJnh1501），經(jīng)基因組解析發(fā)現(xiàn)，該毒株是由TJbd1401和NADC30毒株重組的病毒。經(jīng)進一步序列分析，TJbd1401屬于HP-PRRSV，且除NSP2上缺失30個氨基酸外，在另一個位置上缺失了120個氨基酸，由于TJbd1401是類TJM-F92疫苗毒株或由TJM-F92疫苗毒株演化而來，因此推測TJnh1501是類疫苗毒株（TJM-F92）與NADC30毒株發(fā)生重組而來。在攻毒5周齡仔豬，受感染的仔豬出現(xiàn)一過性高熱的臨床表現(xiàn)，其毒力介于HP-PRRSV（JXwn06）和CHsx1401之間[7]。

5 當(dāng)前商業(yè)疫苗對PRRSV類NADC30毒株的免疫效力

目前，國內(nèi)商品化PRRSV毒株包括HP-PRRSV（JAXA1-P80、HuN4-F112、GDr180、TJM-F92） 和經(jīng)典 PRRSV（CH-1R、VR-2332）[15,16]。伴隨著類NADC30毒株遺傳及重組變異，臨床表現(xiàn)出千差萬別的致病性，加劇了現(xiàn)有商品化疫苗臨床預(yù)防與控制的難度。如免疫了商品疫苗的豬場同樣暴發(fā)了HENAN-XINX毒株、HENAN-HEB毒株或JL580毒株感染事件[6]，這說明現(xiàn)有的PRRSV商品疫苗均不能有效抵抗類NADC30毒株的感染。為了進一步科學(xué)評估商品疫苗的臨床免疫效力，國內(nèi)學(xué)者對現(xiàn)有商品化PRRSV疫苗的免疫效果進行科學(xué)評價，系統(tǒng)評估現(xiàn)有商品化PRRSV疫苗對現(xiàn)在流行PRRSV類NADC30毒株的免疫保護效果。如選用VR2332和JXA1-R疫苗免疫5周齡仔豬，在免疫28天后感染CHsx1401毒株，與空白組相比，免疫VR2332的仔豬臨床發(fā)熱時間縮短，但是免疫JXA1-R后出現(xiàn)臨床癥狀加重的現(xiàn)象。感染后所有免疫群體和空白群體有相似的病毒血癥，說明疫苗接種并不能有效去除豬體內(nèi)的病毒。此外，顯微切片檢測，疫苗無法減輕或消除CHsx1401感染引起的肺臟顯微病變。綜上結(jié)果表明，目前現(xiàn)有的商品化PRRSV疫苗不能提供對類NADC30 PRRSV的完全保護[17]。

6 結(jié)論與展望

自2013年首次暴發(fā)以來，PRRSV類NADC30毒株就引起了國內(nèi)不少學(xué)者的關(guān)注。盡管親本NADC30毒株對豬的致病性有限，但也存在與其他亞群PRRSV重組的可能，從而產(chǎn)生與HP-PRRSV相似的致病力（如JL150）。然而現(xiàn)有的商品化PRRSV疫苗無法提供有效的免疫保護，因此亟需采取包括開發(fā)類NADC30 PRRSV疫苗在內(nèi)的綜合防控措施來預(yù)防該病的傳播。

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山西省實施畜禽屠宰標(biāo)準(zhǔn)化創(chuàng)建活動

據(jù)農(nóng)民日報2018年1月11日報道，根據(jù)山西省畜禽屠宰行業(yè)法律法規(guī)、管理模式及發(fā)展現(xiàn)狀，山西省農(nóng)業(yè)廳決定組織開展全省畜禽屠宰標(biāo)準(zhǔn)化創(chuàng)建活動。參與標(biāo)準(zhǔn)廠驗收的畜禽屠宰企業(yè)按照《生豬屠宰標(biāo)準(zhǔn)化建設(shè)規(guī)范》 《畜禽屠宰標(biāo)準(zhǔn)化建設(shè)規(guī)范》 《生豬屠宰標(biāo)準(zhǔn)化建設(shè)驗收表》 《畜禽屠宰標(biāo)準(zhǔn)化建設(shè)驗收表》進行自評。自評合格后，編寫畜禽屠宰標(biāo)準(zhǔn)化創(chuàng)建自評報告，填寫生豬屠宰標(biāo)準(zhǔn)化創(chuàng)建驗收申請表，逐級上報至山西省農(nóng)業(yè)廳申請驗收。驗收合格的生豬屠宰廠在山西省畜牧獸醫(yī)網(wǎng)或相關(guān)網(wǎng)站公示無異議后，頒發(fā)“全國標(biāo)準(zhǔn)化生豬屠宰廠”證書，證書有效期五年，同時報農(nóng)業(yè)部備案。