史 璇 張 鑫 朱金朋 邸 巍 田 蕾

(錦州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院消化內(nèi)科三病區(qū)，遼寧 錦州 121000)

胃腺癌是由胃黏膜上皮來(lái)源的惡性腫瘤，病變形成中可以表現(xiàn)為上皮細(xì)胞異型增生，進(jìn)而形成腫瘤〔1〕。神經(jīng)纖毛蛋白(NRP)1和2是非酪氨酸依賴性激酶，是Ⅲ型Semaphorin分子與血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子家族分子共享的跨膜信號(hào)傳導(dǎo)受體，在腫瘤的形成和進(jìn)展中有重要作用，尤其是腫瘤血管形成過(guò)程中的作用更明顯〔2,3〕。本實(shí)驗(yàn)檢測(cè)胃腺癌中NRP1和NRP2的表達(dá)，分析其臨床意義。

1 資料與方法

1.1一般資料 2014年1月至2016年10月錦州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院經(jīng)病理學(xué)確診為胃腺癌，并行手術(shù)治療的患者共94例為觀察組，留取臨床資料及術(shù)后蠟塊組織，年齡46～87歲，平均62.6歲，其中男54例，女40例。均符合WHO中的診斷標(biāo)準(zhǔn)。排除標(biāo)準(zhǔn)：①多原發(fā)癌患者；②術(shù)前行放、化療；③有胃手術(shù)史。上述患者距腫瘤邊緣>3 cm的非腫瘤性胃黏膜組織21例為對(duì)照組，年齡47～79歲，平均60.4歲，其中男11例，女10例。兩組年齡、性別無(wú)明顯差異。

1.2NRP1和NRP2檢測(cè) 均基于術(shù)后石蠟包埋的組織，切取4 μm切片置于膠片上，采用免疫組化SP法檢測(cè)，嚴(yán)格按實(shí)驗(yàn)的說(shuō)明書操作，二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色，減少誤差，做好質(zhì)控工作。

1.3NRP1和NRP2結(jié)果的判定 NRP1和NRP2陽(yáng)性表達(dá)部位是細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜，以呈現(xiàn)棕黃色-褐色為陽(yáng)性反應(yīng)細(xì)胞，采用陽(yáng)性細(xì)胞百分率和細(xì)胞染色強(qiáng)度之和進(jìn)行評(píng)定。著色強(qiáng)度評(píng)分：0分，無(wú)顯色；1分，棕黃色；2分，棕褐色。陽(yáng)性細(xì)胞百分比：每張切片選擇5個(gè)熱點(diǎn)區(qū)(400倍視野)計(jì)數(shù)陽(yáng)性率，取其平均值；0分，<10%；1分，10%～50%；2分，>50%。上述兩項(xiàng)相加即為最終評(píng)分結(jié)果，以0～2分定為陰性，以>2分定為陽(yáng)性。以陽(yáng)性率進(jìn)行評(píng)定。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SAS6.12統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)及線性相關(guān)分析。

2 結(jié) 果

2.1兩組NRP1和NRP2陽(yáng)性率比較 兩組NRP1和NRP2陽(yáng)性率差異顯著(P<0.01)。見表1。

表1 兩組NRP1和NRP2陽(yáng)性率的比較〔n(%)〕

2.2觀察組不同臨床特征中NRP1和NRP2陽(yáng)性率的比較 NRP1和NRP2表達(dá)的陽(yáng)性率與腫瘤脈管累犯和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，NRP1表達(dá)的陽(yáng)性率與腫瘤的浸潤(rùn)深度密切相關(guān)。二者均與性別、年齡及分化程度無(wú)相關(guān)性。見表2。

表2 觀察組不同臨床特征中NRP1和NRP2陽(yáng)性率的比較〔n(%)〕

2.3觀察組中NRP1和NRP2表達(dá)的相關(guān)性 NRP1和NRP2表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.49，P=0.036)。

3 討 論

胃癌病變的形成與癌基因密切相關(guān)，主要表現(xiàn)為其高表達(dá)時(shí)的促癌生長(zhǎng)的作用。多種癌基因在作用過(guò)程中與血管生成有一定相關(guān)性〔4〕。NRP1和NRP2在腫瘤中的表達(dá)升高，具有癌基因樣的作用，二者在結(jié)構(gòu)上有47%的同源性，在胚胎神經(jīng)系統(tǒng)及許多成人組織中的表達(dá)盡管有重疊，但是在配體、調(diào)節(jié)特性上均有明顯不同〔5,6〕。NRP1的胞外區(qū)有3個(gè)不同的結(jié)構(gòu)域，分別稱為a1/a2、FV/FV Ⅲ(b1/b2)和MAM(c)，其跨膜區(qū)及短的胞質(zhì)區(qū)歸入d結(jié)構(gòu)域。a1/a2、FV/FV Ⅲ(b1/b2)是NRP1與配體結(jié)合的位點(diǎn)，MAM(c)對(duì)NRP傳導(dǎo)及配體的信號(hào)很重要〔7〕。NRP2由17個(gè)外顯子和16個(gè)內(nèi)含子組成，其序列高度保守，由胞外區(qū)、跨膜區(qū)及短的胞內(nèi)區(qū)組成，其胞內(nèi)區(qū)很短，一般不作為獨(dú)立的受體傳遞信號(hào)〔8〕。NRP2有與配體Semaphorin結(jié)合的位點(diǎn)〔9〕。NRP1和NRP2均為多功能受體，作為 Semaphorin和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)的協(xié)同受體，有著較為廣泛的生物學(xué)功能，尤其是在神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育、血管形成、淋巴管生成、上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化和腫瘤進(jìn)展中起著至關(guān)重要的調(diào)節(jié)作用〔10,11〕。

本研究結(jié)果提示NRP1和NRP2二者表達(dá)升高可以促進(jìn)胃癌的形成，二者在胃癌生成過(guò)程中具有癌基因樣的作用。NRP1和NRP2二者參與腫瘤的脈管侵犯和腫瘤的轉(zhuǎn)移過(guò)程。NRP1高表達(dá)預(yù)示著腫瘤對(duì)周圍組織的侵襲能力明顯增強(qiáng)。NRP1和NRP2二者具有協(xié)同作用。胃腺癌發(fā)生后主要形態(tài)學(xué)表現(xiàn)是細(xì)胞異型增生并引發(fā)的肌層浸潤(rùn)性生長(zhǎng)，這也是NRP1和NRP2高表達(dá)促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)的重要蛋白異常因素。NRP1和NRP2主要分布在細(xì)胞質(zhì)中，存在著基因轉(zhuǎn)錄、轉(zhuǎn)錄后水平翻譯、翻譯后修復(fù)等多種調(diào)節(jié)過(guò)程。不同的調(diào)節(jié)失控能使NRP1和NRP2的動(dòng)態(tài)平衡發(fā)生改變〔12〕。NRP1和NRP2可以促進(jìn)細(xì)胞的增殖和生長(zhǎng)，使腫瘤細(xì)胞繁殖能力明顯增高，使血管生成明顯，腫瘤旺熾性增生，腫瘤體積增大，腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)及侵襲能力明顯增強(qiáng)〔13,14〕。NRP1和NRP2能與VEGF結(jié)合在脈管的出芽生長(zhǎng)上起著重要作用。有研究通過(guò)應(yīng)用NRP1和NRP2的特異性抗體阻斷VEGF與NRP2的結(jié)合，顯示其可以抑制淋巴管的出芽生殖〔15,16〕，而且在對(duì)VEGF的應(yīng)答中，是通過(guò)增強(qiáng) VEGF受體3的作用進(jìn)而調(diào)節(jié)淋巴管生成因子的，進(jìn)而對(duì)淋巴管出芽生殖信號(hào)進(jìn)行轉(zhuǎn)導(dǎo)〔17〕。NRP1和NRP2調(diào)節(jié)腫瘤生長(zhǎng)的作用及調(diào)節(jié)腫瘤脈管生成的作用可能更趨于復(fù)雜，需要更多的基礎(chǔ)研究明確。

綜上，胃腺癌術(shù)后組織中NRP1和NRP2表達(dá)增高對(duì)腫瘤性病變的形成和進(jìn)展有一定作用。二者具有正向協(xié)同作用。

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