林 清 ,張 琪，馬 翔

(1.西北農(nóng)林科技大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，陜西 楊凌 712100；2.陜西楊凌益多寶生物科技有限公司，陜西 楊凌 712100)

1 微生態(tài)制劑的特殊作用

微生態(tài)制劑有其他藥不可替代的優(yōu)點(diǎn)，即“患病治病，未病防病，無病保健”的效果。不僅患病(如腹瀉或便秘)動(dòng)物可以服用，健康的動(dòng)物也可以服用，以提高健康水平。

2 微生態(tài)制劑的組成及其功效

微生態(tài)制劑涵概活菌、死菌及其代謝產(chǎn)物。其中活菌制劑不僅含有活性菌，同時(shí)也含有死菌以及代謝產(chǎn)物。有資料證明，從電鏡也能直接觀察到死菌體也可黏附在腸壁，通過站位作用排斥有害菌，促使微生態(tài)平衡;死菌體及酶同樣對(duì)動(dòng)物有營(yíng)養(yǎng)作用;菌體的細(xì)胞壁成份，如脂磷壁酸(LTA)及胞壁肽聚糖(PG)。死菌體的特點(diǎn)是質(zhì)量較穩(wěn)定，比活菌更安全，并可以與抗生素同時(shí)使用。活菌對(duì)腸壁有黏附作用，活菌和死菌物質(zhì)都能抑制腐敗菌的致癌作用，并有很強(qiáng)的免疫作用，能抗病、抗腫瘤、防衰老。代謝產(chǎn)物是細(xì)菌培養(yǎng)后除去菌體剩余的培養(yǎng)液，內(nèi)含細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖過程中產(chǎn)生了豐富的代謝產(chǎn)物及一部分菌體碎片(成分)，細(xì)菌分泌的酸性物質(zhì)及細(xì)菌素對(duì)有害菌有拮抗、殺滅作用;細(xì)菌分解食物后的氨基酸，以及合成的維生素都在培養(yǎng)液內(nèi)，還包括細(xì)菌分泌的對(duì)機(jī)體有用的酶;而部分的菌體成分對(duì)機(jī)體也有免疫促進(jìn)作用。代謝產(chǎn)物的特點(diǎn)是對(duì)人體作用較快。所以具有見效快，效果更顯著的特征。其作用機(jī)理有以下幾點(diǎn)：

(1)對(duì)動(dòng)物有益的生理性細(xì)菌，進(jìn)入機(jī)體后可粘附在腸壁(也稱定植)，這樣占了“位子”也排斥了有害菌的生存空間。

(2)有益菌通過生長(zhǎng)繁殖，產(chǎn)生的乳酸和乙酸，降低了腸道的PH及Eh值，改善內(nèi)部微環(huán)境，能抑制有害菌的生長(zhǎng)。

(3)其代謝產(chǎn)物對(duì)人體有營(yíng)養(yǎng)作用;有益菌有促進(jìn)人體免疫功能的作用。因此活菌的功效是顯而易見的。

(4)要發(fā)揮上述作用，重要的是能在機(jī)體內(nèi)“定植”，否則其功效將大打折扣。要解決這個(gè)問題，就是經(jīng)常補(bǔ)充活菌。

3 益生菌是微生態(tài)制劑發(fā)揮作用的關(guān)鍵

益生菌是一類對(duì)宿主有益的活性微生物，是定植于動(dòng)物腸道、生殖系統(tǒng)內(nèi)，能產(chǎn)生確切健康功效從而改善宿主微生態(tài)平衡、發(fā)揮有益作用的活性有益微生物的總稱。人體、動(dòng)物體內(nèi)有益的細(xì)菌或真菌主要有：酪酸梭菌、乳桿菌、雙歧桿菌、放線菌、酵母菌等。 目前世界上研究的功能最強(qiáng)大的產(chǎn)品主要是以上各類微生物組成的復(fù)合活性益生菌，其廣泛應(yīng)用于生物工程、工農(nóng)業(yè)、食品安全以及生命健康領(lǐng)域。

迄今為止，已發(fā)現(xiàn)的益生菌大體上可分成三大類，其中包括：乳桿菌類(如嗜酸乳桿菌、干酪乳桿菌、詹氏乳桿菌、拉曼乳桿菌等)；雙歧桿菌類(如長(zhǎng)雙歧桿菌、短雙歧桿菌、卵形雙歧桿菌、嗜熱雙歧桿菌等)；革蘭氏陽(yáng)性球菌(如糞鏈球菌、乳球菌、中介鏈球菌等)。此外，還有一些酵母菌與酶亦可歸入益生菌的范疇。

當(dāng)機(jī)體內(nèi)有足夠的益生菌時(shí)，動(dòng)物就會(huì)處于健康的狀態(tài)，一旦體內(nèi)菌群失去平衡，比如菌種間比例發(fā)生大幅變化或者超出正常數(shù)值時(shí)，那么腹瀉、過敏、胃口不佳、疲倦、免疫力下降等一系列病癥就會(huì)隨之而來，動(dòng)物的健康就會(huì)亮紅燈。

4 微生態(tài)制劑的在動(dòng)物上的安全性及飼用劑量

4.1 安全性

實(shí)踐證明微生態(tài)制劑的安全性必須遵循的原則：應(yīng)用于動(dòng)物的益生菌最好來自動(dòng)物本身，而且來自于健康動(dòng)物腸道中分離的菌種；必須經(jīng)過一定時(shí)間證明其無致病性；不能有與一些疾病(如心內(nèi)膜炎、腸道不適癥)相聯(lián)系的歷史；不能使膽鹽(抑菌劑之一)早期解離；不能攜帶可以轉(zhuǎn)移的抗生素基因。

4.2 飼用劑量

(以楊凌益多寶生物科技有限公司產(chǎn)品為例)

4.2.1 飼料添加 (按全價(jià)飼料添加本品計(jì)算，產(chǎn)品規(guī)格： 200億個(gè)/g)

乳豬：500～1 000 g/t， 仔豬、生長(zhǎng)豬、育肥豬：300～600 g/t。種蛋禽：300～600 g/t， 肉禽：200～500 g/t。反芻：500～1 000 g/t。水產(chǎn)動(dòng)物：300～500 g/t。

4.2.2 飲水 按250～500倍稀釋自由飲水。

4.2.3 水體潑灑 水產(chǎn)養(yǎng)殖：100～800 g/hm2/m，用10倍水稀釋浸泡1h后全塘均勻潑灑。

目前市場(chǎng)上的枯草芽孢生產(chǎn)企業(yè)很多,但質(zhì)量參差不齊，有些雖然含菌數(shù)多，但雜菌率高，效果不好，所以在選擇時(shí)一定要選大品牌的。楊凌益多寶生物科技有限生產(chǎn)的枯草芽孢桿菌在技術(shù)先進(jìn)、質(zhì)量穩(wěn)定、價(jià)格實(shí)惠、生產(chǎn)專業(yè)，在國(guó)內(nèi)屬于領(lǐng)先水平。

5 枯草芽孢桿菌在動(dòng)物飼料添加劑上的應(yīng)用現(xiàn)狀

目前，在國(guó)內(nèi)研究比較成功的是枯草芽孢桿菌飼料添加劑。

(1)對(duì)特殊菌體進(jìn)行促芽孢和微膠囊包被處理，在孢子狀態(tài)下穩(wěn)定性好，能耐氧化；耐擠壓；耐高溫，能長(zhǎng)期耐60°C高溫，在120°C溫度下能存活20 min；耐酸堿，在酸性胃環(huán)境中能保持活性，可以耐唾液和膽汁的攻擊，是飼料微生物中可100%直達(dá)大小腸的活菌。

(2)枯草芽孢桿菌以孢子狀態(tài)進(jìn)入消化道后，迅速由休眠狀態(tài)復(fù)活，在短期內(nèi)繁殖成高含菌量的優(yōu)勢(shì)種群，消耗掉腸道內(nèi)大量氧氣，并能產(chǎn)生過氧化氫、細(xì)菌素，建立微生態(tài)平衡，促進(jìn)有益厭氧微生物的繁殖，抑制有害細(xì)菌(大腸桿菌、沙門氏桿菌)的生長(zhǎng)，從而預(yù)防腹瀉、下痢等腸胃道疾病。

(3)在快速繁殖過程中，產(chǎn)生大量多種維生素、有機(jī)酸、氨基酸、蛋白酶(特別是堿性蛋白酶)、糖化酶、脂肪酶、淀粉酶，能降解植物性飼料中復(fù)雜的有機(jī)物，從而促進(jìn)消化吸收，提高飼料利用率，防止動(dòng)物消化不良，出現(xiàn)“飼料便”等狀況發(fā)生。

(4)安全高效，無藥殘，無毒副作用，能減少抗生素藥物的使用。同時(shí)緩解動(dòng)物不進(jìn)食，生長(zhǎng)緩慢等不良應(yīng)激反應(yīng)狀態(tài)，恢復(fù)由于用藥造成的動(dòng)物體質(zhì)下降，提高疫苗抗體水平等綜合抗病力。

(5)除臭驅(qū)蠅，減少污染，控制細(xì)菌性疾病，能減少糞便中氮、磷、鈣的排泄量，減少糞便臭味及有害氣體排放，表現(xiàn)為動(dòng)物糞便臭味逐步減輕，減少飼料蛋白質(zhì)分解為氨氣浪費(fèi)，從而減少環(huán)境污染。

(6)改善肉蛋奶品質(zhì)，生產(chǎn)“綠色肉”、“農(nóng)家蛋”、“無抗奶”，枯草芽孢桿菌通過增強(qiáng)消化吸收功能，充分吸收利用飼料中營(yíng)養(yǎng)成份及原料的天然色素，無需添加化學(xué)色素蘇丹紅、加麗素紅造成對(duì)人體的有害物質(zhì)及影響畜禽產(chǎn)品天然食用風(fēng)味，可媲美家養(yǎng)畜禽肉。能天然增加動(dòng)物產(chǎn)品著色度和食用風(fēng)味，豬只皮膚紅潤(rùn)，毛色發(fā)亮；肉雞肉鴨顏色加深；改善蛋殼的質(zhì)量和顏色，蛋清厚稠，蛋黃鮮紅；水產(chǎn)動(dòng)物顏色更加健康，無斑點(diǎn)。另外，枯草芽孢桿菌不僅在飼料中應(yīng)用比較廣泛，在污水處理及生物肥發(fā)酵或發(fā)酵床制作中應(yīng)用也相當(dāng)廣泛，是一種多功能的微生物。如市政和工業(yè)污水處理，工業(yè)循環(huán)水處理，腐化槽、化糞池等處理，畜牧養(yǎng)殖動(dòng)物廢料、臭味處理，糞便處理系統(tǒng)，垃圾、糞坑、糞池等處理。

6 枯草芽孢菌生產(chǎn)工藝

6.1 培養(yǎng)基

6.1.1 種子培養(yǎng)基蛋 白胨1%，酵母浸出物0.5%，氯化鈉1%，自然pH。

6.1.2 基礎(chǔ)發(fā)酵培養(yǎng)基 蔗糖1%，蛋白胨1%，磷酸氫二鈉0.2%，磷酸二氫鈉0.2%，pH7.0。

6.2 培養(yǎng)方法

菌種活化將保存的菌種轉(zhuǎn)接到斜面培養(yǎng)基，37?℃培養(yǎng)24?h，備用。接種12?h后細(xì)菌數(shù)量開始減少，枯草芽孢桿菌進(jìn)入生長(zhǎng)衰亡期。因此，采用8～12 h時(shí)的菌液作為菌種較合適，此時(shí)枯草芽孢桿菌為對(duì)數(shù)生長(zhǎng)末期，既可保持高的細(xì)胞活力，又可獲得盡可能多的細(xì)胞數(shù)。在初始pH5.5～8范圍內(nèi)枯草芽孢桿菌均可良好生長(zhǎng)，pH為6.0時(shí)生長(zhǎng)最好，說明枯草芽孢桿菌對(duì)pH的適應(yīng)性較寬，但隨pH的增大，活菌數(shù)呈下降趨勢(shì)。枯草芽孢桿菌在25～40℃均可良好生長(zhǎng)，其生長(zhǎng)的最適溫度為35℃?？莶菅挎邨U菌為需養(yǎng)菌，在生長(zhǎng)過程中需要大量的氧氣，裝液量不可過多，培養(yǎng)液與容器體積比可設(shè)定為2:25；接種量3%(V/V)較適合其生長(zhǎng)。

6.3 干燥方式

采用噴霧干燥和低溫冷凍低溫冷凍干燥更利于芽孢的形成，但其操作復(fù)雜、成本高，不利于規(guī)?；I(yè)生產(chǎn)。而噴霧干燥同樣可產(chǎn)生高芽孢率，且成本相對(duì)低，更適合工業(yè)生產(chǎn)。