趙金博，李蕾芳，王雪琪

（1.北京師范大學(xué)環(huán)境學(xué)院；2.水環(huán)境模擬國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100875）

目前，測(cè)定水體中的總磷含量常用的分析方法是鉬酸銨分光光度法。《水質(zhì) 總磷的測(cè)定 鉬酸銨分光光度法（GB 11893-89）規(guī)定，在中性條件下，采用過(guò)硫酸鉀溶液對(duì)樣品進(jìn)行消解。由于過(guò)硫酸鉀溶解性差，配制過(guò)程較為復(fù)雜，其溶液不易保存，需現(xiàn)用現(xiàn)配，人為誤差較大，本文研究了用過(guò)硫酸銨代替過(guò)硫酸鉀對(duì)樣品進(jìn)行消解的可行性。通過(guò)對(duì)比在同等條件下過(guò)硫酸銨消解法和過(guò)硫酸鉀消解法對(duì)樣品的消解率，筆者發(fā)現(xiàn)，兩種消解法得出的結(jié)果基本沒(méi)有差異。在利用鉬酸銨分光光度法測(cè)量水體中磷的含量時(shí)，人們完全可以用過(guò)硫酸銨代替過(guò)硫酸鉀對(duì)水樣進(jìn)行消解，這是一種操作簡(jiǎn)單、重復(fù)性好、誤差率小的消解方法。本文將利用分析速度更快、操作更加簡(jiǎn)單的AA3型流動(dòng)分析儀測(cè)定水樣中磷的含量。

1 研究背景

水體中的磷是以各種磷酸鹽的形式存在的，包括正磷酸鹽、縮合磷酸鹽和有機(jī)磷酸鹽，總磷是指水體中各種形態(tài)的磷的總和[1]。水體中含磷量的增加，使水體中的浮游生物和藻類大量繁殖而消耗水中的溶解氧，從而加速水體的富營(yíng)養(yǎng)化。因此，準(zhǔn)確測(cè)定水體中的總磷含量非常重要[2-3]。

一般情況下，天然水體主要含有以下有機(jī)磷：植酸、三磷酸腺苷、三聚磷酸鈉、甲基三苯基溴化磷、對(duì)硝基苯磷酸二鈉、葡萄糖-6-磷酸、葡萄糖-1-磷酸和輔羧酶等。

植酸，難溶于水，是磷元素最穩(wěn)定的化合物，豆、麥和其他谷物富含植酸。植酸在植物體中不是獨(dú)立存在的，它同二價(jià)、三價(jià)陽(yáng)離子結(jié)合形成不溶性復(fù)合物。它通常與K+、Ca2+、Mg2+、Zn2+等離子先形成鹽，然后再與蛋白形成具有單層膜的泡狀小球，這些小球進(jìn)一步聚集為更大體積的球狀體，這是植酸在生物體中的主要沉積形式。植酸是植物體內(nèi)最重要的含磷化合物，60%～80%有機(jī)磷以植酸為載體存在[4]。

三磷酸腺苷（ATP），難溶于水，是一種核苷酸，參與細(xì)胞能量代謝、細(xì)胞內(nèi)外信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞結(jié)構(gòu)維持、DNA和RNA合成等[5]。三聚磷酸鈉，白色粉末狀結(jié)晶，可溶于水，因其無(wú)毒、廉價(jià)、鰲合Ca2+和Mg2+能力強(qiáng)，具有乳化、分散、增溶及與LAS顯著的協(xié)同效應(yīng)等性能，被廣泛用為洗滌助劑，在食品行業(yè)中用作水分保持劑、品質(zhì)改良劑、軟化劑和增稠劑等[6]。甲基三苯基溴化磷，難溶于水。

對(duì)硝基苯磷酸二鈉，可溶于水，是測(cè)定酸性和堿性磷酸酶的顯色底物，可以以對(duì)硝基苯磷酸二鈉為基質(zhì)測(cè)定土壤磷酸酶的活性[7]。葡萄糖-6-磷酸（G6P），易溶于水，是糖代謝和糖異生途徑的重要中間產(chǎn)物，廣泛存在于動(dòng)植物和微生物體中。在糖酵解途徑（EMP），葡萄糖經(jīng)由己糖激酶反應(yīng)磷酸化為G6P[8]。葡萄糖-1-磷酸（G-1-P），易溶于水，是糖代謝中重要的中間產(chǎn)物，由磷酸化酶催化體內(nèi)多糖磷酸解而產(chǎn)生的，在葡萄糖磷酸變位酶的作用下轉(zhuǎn)變成葡萄糖-6-磷酸進(jìn)入糖酵解。作為重要的起始反應(yīng)物，G-1-P可用于二磷酸葡萄糖核苷、麥芽寡糖及海藻糖的生物合成[9]。輔羧酶，易溶于水，參與催化許多有機(jī)酸的脫羧反應(yīng)，可對(duì)細(xì)胞色素C的活性起到促進(jìn)作用[10]。

目前，測(cè)定水體中的總磷含量常用的分析方法是鉬酸銨分光光度法[11-12]，其原理是在酸性介質(zhì)中，正磷酸鹽與鉬酸銨反應(yīng)，在銻鹽作用下生成磷鉬雜多酸后，立即被還原劑抗壞血酸還原，生成藍(lán)色絡(luò)合物，通常稱為磷鉬藍(lán)。在測(cè)定水體中的總磷含量前，人們通常需要將水體樣品進(jìn)行消解，將所含磷全部氧化為正磷酸鹽，GB11893-89規(guī)定在中性條件下采用過(guò)硫酸鉀溶液對(duì)樣品進(jìn)行消解。但是，過(guò)硫酸鉀不穩(wěn)定、易分解，其溶液長(zhǎng)期儲(chǔ)存會(huì)導(dǎo)致濃度發(fā)生變化，因此必須在臨用前進(jìn)行配置，否則有可能導(dǎo)致樣品消解不完全，且重復(fù)性差。當(dāng)待測(cè)水體是工業(yè)廢水或有機(jī)質(zhì)濃度較高的水體時(shí)，由于有機(jī)物含量較高，研究者一般會(huì)加入過(guò)量的過(guò)硫酸鉀來(lái)保證水體中所有的有機(jī)磷被消解完全，但國(guó)內(nèi)現(xiàn)有過(guò)硫酸鉀的純度有限，加入過(guò)硫酸鉀的量越多，其結(jié)果相對(duì)誤差越大，重復(fù)性差。此外，過(guò)硫酸鉀溶解性較差，0℃時(shí)溶解度為1.75 g/mL，室溫下（20℃）為5.3 g/mL，而GB11893-89中試驗(yàn)要求為每100 mL溶解5 g過(guò)硫酸鉀，這將造成在冬季室內(nèi)氣溫較低時(shí)，過(guò)硫酸鉀溶液易結(jié)晶，嚴(yán)重影響樣品的消解率[13]。這還將導(dǎo)致過(guò)硫酸鉀的溶解速度非常慢，必須以加熱方式來(lái)加快溶解速度。若要加快溶解，絕對(duì)不能盲目加熱，最好采用水浴加熱法，水浴溫度一定要低于60℃，否則過(guò)硫酸鉀會(huì)分解失效。

有學(xué)者用過(guò)硫酸鈉代替過(guò)硫酸鉀進(jìn)行試驗(yàn)[13]，但是過(guò)量鈉鹽與顯色劑反應(yīng)會(huì)產(chǎn)生白色絮狀物質(zhì)堵塞泵管，經(jīng)試驗(yàn)，該方法不適用于AA3型流動(dòng)分析儀。

本文目的在于驗(yàn)證一種高效便捷、誤差較小的測(cè)量天然水體總磷的新方法，此方法主要針對(duì)AA3型流動(dòng)分析儀。筆者選取天然水體中常見的8種有機(jī)磷，通過(guò)此創(chuàng)新方法和國(guó)標(biāo)GB11893-89測(cè)量方法的對(duì)比，驗(yàn)證本方法的可信度和可行性，并通過(guò)對(duì)標(biāo)樣極值反復(fù)測(cè)量的方法明確新消解方法的適用濃度范圍。

2 試驗(yàn)方法

2.1 主要儀器和試劑

主要儀器：消解瓶；高壓滅菌鍋；AA3型流動(dòng)分析儀。

試劑：將天然水體中常見的8種有機(jī)磷配制成溶液。表1將常見的天然有機(jī)磷按照化學(xué)鍵的構(gòu)成分為難溶（三磷酸腺苷、植酸、甲基三苯基溴化磷）、可溶（三聚磷酸鈉、對(duì)硝基苯磷酸二鈉）和易溶（葡萄糖-6-磷酸、葡萄糖-1-磷酸、輔羧酶）三種。其具體參數(shù)為：0.5 mL 1.4 mol/L的過(guò)硫酸銨溶液；0.5 mL 1.0 mol/L的硫酸；50 g/L的過(guò)硫酸鉀溶液；其余試劑同GB11893-89中規(guī)定的試劑。

2.2 配制天然水體中常見的8種有機(jī)磷水樣

2.2.1 三磷酸腺苷

稱量三磷酸腺苷1.285 g，用去離子水稀釋至1 000 mL，混合均勻，得到1 g/L貯備液，保存在4℃冰箱內(nèi)冷藏備用。注意：為了避免有機(jī)磷光解，所有水樣均用棕色1 L廣口瓶保存。

表1 待消解水體樣品中有機(jī)磷選取標(biāo)準(zhǔn)

2.2.2 植酸

稱量植酸3.548 g，用去離子水稀釋至1 000 mL，混合均勻，得到1 g/L貯備液，保存在4℃冰箱內(nèi)冷藏備用。

2.2.3 三聚磷酸鈉

稱量三聚磷酸鈉3.837 g，用去離子水稀釋至1 000 mL，混合均勻，得到1 g/L貯備液，保存在4℃冰箱內(nèi)冷藏備用。

2.2.4 甲基三苯基溴化磷

稱量甲基三苯基溴化磷11.512 g，用去離子水稀釋至1 000 mL，混合均勻，得到1 g/L貯備液，保存在4℃冰箱內(nèi)冷藏備用。

2.2.5 對(duì)硝基苯磷酸二鈉

稱量對(duì)硝基苯磷酸二鈉8.487 g，用去離子水稀釋至1 000 mL，混合均勻，得到1 g/L貯備液，保存在4℃冰箱內(nèi)冷藏備用。

2.2.6 葡萄糖-6-磷酸

稱量葡萄糖-6-磷酸7.39 g，用去離子水稀釋至1 000 mL，混合均勻，得到1 g/L貯備液，保存在4℃冰箱內(nèi)冷藏備用。

2.2.7 葡萄糖-1-磷酸

稱量葡萄糖-1-磷酸7.648 g，用去離子水稀釋至1 000 mL，混合均勻，得到1 g/L貯備液，保存在4℃冰箱內(nèi)冷藏備用。

2.2.8 輔羧酶

稱量輔羧酶7.432 g，用去離子水稀釋至1 000 mL，混合均勻，得到1 g/L貯備液，保存在4℃冰箱內(nèi)冷藏備用。

2.3 消解方法

（1）在消解瓶中加入15 mL 2.2中所述的待消解水體樣品、0.5 mL 1.4 mol/L的過(guò)硫酸銨和0.5 mL 1.0 mol/L的硫酸，將得到的裝有所述混合物料的消解瓶瓶蓋擰緊后松弛半圈，然后置于高壓滅菌鍋中進(jìn)行消解處理，待壓力達(dá)1.1 kg/cm2、相應(yīng)溫度為120℃時(shí)，保持30 min后停止加熱，待壓力表讀數(shù)降至零后，取出放冷，自然冷卻至室溫即可。

（2）按照GB11893-89中所述方法，取25 mL 2.2中所述的待消解水體樣品，加入4 mL 50 g/L過(guò)硫酸鉀溶液，將具塞刻度管的蓋塞緊后用一小塊布和線將玻璃塞扎緊或用其他方法固定在大燒杯中置于高壓蒸氣消毒器中加熱，待壓力達(dá)1.1 kg/cm2、相應(yīng)溫度為120℃時(shí)，保持30 min后停止加熱。待壓力表讀數(shù)降至零后，取出放冷，然后用水稀釋至標(biāo)線。

2.4 測(cè)量磷的含量

將消解后的樣品利用AA3型流動(dòng)分析儀測(cè)量出樣品中磷的含量，根據(jù)2.2中配制的溶液磷含量，計(jì)算出各個(gè)樣品的消解率，結(jié)果如圖1所示。

2.5 對(duì)照試驗(yàn)

根據(jù)GB11893-89，用過(guò)硫酸鉀作為消解時(shí)的氧化劑對(duì)8種水樣進(jìn)行消解處理，并用AA3型流動(dòng)分析儀測(cè)出水樣中的磷含量，計(jì)算出各個(gè)樣品的消解率。

2.6 濃度范圍測(cè)量

以植酸（phytic acid）為例，分別配置濃度2 μg/L、5 μg/L、10 μg/L、20 μg/L的樣品，用過(guò)硫酸銨法消解測(cè)量，每個(gè)濃度的樣品取3次平行樣，每個(gè)平行樣測(cè)量3次。植酸代表了極難溶于水的有機(jī)磷。

以植酸（phytic acid）為例，分別配置濃度0 mg/L、1 mg/L、2 mg/L、3 mg/L、4 mg/L、6 mg/L、8 mg/L的樣品，每個(gè)濃度的樣品重復(fù)消解5次，每個(gè)消解樣品連續(xù)測(cè)量3次（n=15），以樣品濃度的5%為基準(zhǔn)，測(cè)量樣品在不同濃度下的重復(fù)性。

3 試驗(yàn)結(jié)果與討論

對(duì)比圖1和圖2可知，本文提供的方法與國(guó)標(biāo)法對(duì)天然水體樣品中常見的8種有機(jī)磷的消解率都超過(guò)了90%。與國(guó)標(biāo)提供的消解方法相比，利用過(guò)硫酸銨作為消解時(shí)的氧化劑具有相同或更好的消解率，如采用本方法提供的方法對(duì)植酸進(jìn)行消解，消解率達(dá)93.3%，而采用國(guó)標(biāo)法的消解率為90%。此外，本方法消解有機(jī)磷的誤差率明顯小于國(guó)標(biāo)法，如采用本方法對(duì)硝基苯磷酸二鈉和輔羧酶進(jìn)行消解，誤差率在5%以內(nèi)，而采用國(guó)標(biāo)法誤差率均超過(guò)15%。這說(shuō)明采用過(guò)硫酸銨作為消解時(shí)的氧化劑對(duì)水體樣品進(jìn)行消解處理，重復(fù)性好、誤差率小、數(shù)據(jù)可靠性強(qiáng)。

圖1 用過(guò)硫酸銨消解法測(cè)量天然水體常見有機(jī)磷的消解率

圖2 過(guò)硫酸鉀消解法測(cè)量天然水體中常見有機(jī)磷的消解率

從圖3可以看出，過(guò)硫酸銨法消解極難溶于水的植酸在濃度0.002～0.01 mg/L的范圍內(nèi)回收率并不穩(wěn)定，在濃度為0.02 mg/L時(shí)，回收率穩(wěn)定并且重復(fù)性高，因此，該方法適用的最低有機(jī)磷濃度建議值為0.02 mg/L。

圖3 過(guò)硫酸銨消解法對(duì)低濃度植酸樣品的回收率

如圖4所示，在0 mg/L的樣品時(shí)，樣品的吸光度是高于基線值的。這也驗(yàn)證了圖3的結(jié)論，可能是因?yàn)檫^(guò)硫酸銨藥品不純導(dǎo)致本方法無(wú)法測(cè)量總磷濃度極低的樣品，同時(shí)8 mg/L的樣品重復(fù)性最差，誤差線已經(jīng)大于樣品的5%，其消解結(jié)果可信度存在一定風(fēng)險(xiǎn)。由于植酸代表了天然有機(jī)物中最難降解的有機(jī)磷成分，該方法在實(shí)踐結(jié)果上適用于樣品總磷濃度在0.02～6 mg/L。

圖4 不同濃度植酸消解效率

4 結(jié)論

在使用AA3型流動(dòng)分析儀測(cè)量天然水體總磷時(shí)，用過(guò)硫酸銨代替過(guò)硫酸鉀的方法進(jìn)行消解是可行的，此創(chuàng)新方法操作更加簡(jiǎn)便，誤差更小。

1 CVD Zee，N Roevros，C Lei.Phosphorus speciation，transformation and retention in the Scheldt estuary（Belgium/The Netherlands） from the freshwater tidal limits to the North Sea[J].Marine Chemistry，2007，106（1）：76-91.

2 E A Nagul，I D Mckelvie，SD Kolev.The use of on-line UV photoreduction in the flow analysis determination of dissolved reactive phosphate in natural waters[J].Talanta，2015，133：155-161.

3 R T Bannerman.A simplified phosphorus technique[J].Environmental Letters，1975，9（1）：43-53.

4 吳 澎，田紀(jì)春，王鳳成.谷物中植酸及其應(yīng)用的研究進(jìn)展[J].中國(guó)糧油學(xué)報(bào)，2009，24（3）：137-143.

5 陳 波，郭 義，趙 雪，等.三磷酸腺苷與針刺效應(yīng)相關(guān)性研究評(píng)述[J].針刺研究，2012，37（4）：338-344.

6 房秀敏.淺談三聚磷酸鈉[J].日用化學(xué)工業(yè)，1996，（3）：33-35.

7 李瑩飛，耿玉清，周紅娟，等.基于不同方法測(cè)定土壤酸性磷酸酶活性的比較[J].中國(guó)生態(tài)農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2016，24（1）：98-104.

8 陳潔梅，潘 濤，陳星旦.二階導(dǎo)數(shù)光譜預(yù)處理在用FTIR/ATR方法定量測(cè)定葡萄糖-6-磷酸和果糖-6-磷酸中的應(yīng)用[J].光學(xué)精密工程，2006，14（1）：1-7.

9 許向華，史軍花，趙國(guó)罡，等.高產(chǎn)胞外葡萄糖-1-磷酸菌株的篩選及鑒定[J].中國(guó)釀造，2011，（4）：102-105.

10 戴海平，劉建立，李 泓，等.膜組合技術(shù)濃縮輔羧酶[J].中國(guó)醫(yī)藥工業(yè)雜志，2004，35（2）：78-80.

11 L Woo，W Maher.Determination of phosphorus in turbid waters using alkaline potassium peroxodisulphate digestion[J].Analytica Chimica Acta，1995，315（1）：123-135.

12 P Worsfold，I Mckelvie，P Monbet.Determination of phosphorus in natural waters：A historical review[J].Analytica Chimica Acta，2016，（918）：8-20.

13 師 培.用過(guò)硫酸鈉消解測(cè)定水中總磷的方法研究[J].環(huán)境科學(xué)與管理，2007，32（10）：160-161.