孔德龍，崔 潔

(1.徐州醫(yī)科大學(xué)病原生物學(xué)與免疫學(xué)教研室，江蘇省免疫與代謝重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江蘇 徐州 221004； 2.徐州醫(yī)科大學(xué)生理學(xué)教研室，江蘇 徐州 221004)

機(jī)體內(nèi)免疫細(xì)胞通過表面和細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的受體識(shí)別病原體或其產(chǎn)物而活化，活化的受體介導(dǎo)下游信號(hào)通路，啟動(dòng)炎癥應(yīng)答反應(yīng)的發(fā)生。隨著“危險(xiǎn)信號(hào)假說”的逐漸發(fā)展，人們發(fā)現(xiàn)免疫細(xì)胞也可以在沒有致病體存在的情況下，通過識(shí)別損傷細(xì)胞釋放的內(nèi)源性信號(hào)活化[1]。這兩種情況相互補(bǔ)充，逐漸形成了炎癥反應(yīng)可由病原體入侵或來源于宿主的危險(xiǎn)信號(hào)所誘發(fā)形成的觀點(diǎn)，并且越來越多的證據(jù)表明其參與了許多疾病的致病機(jī)理過程，包括肝疾病。

1 NLRs模式識(shí)別受體

不同的病原體如肝炎病毒及腸道菌群的成分等都能夠激活肝先天免疫反應(yīng)，促進(jìn)肝病變的發(fā)展[2]。這些微生物組分和病毒衍生分子通常稱為病原體相關(guān)分子模式(pathogen-associated molecular patterns, PAMPs)[3]；除微生物和病毒等外源性分子外，肝暴露于實(shí)質(zhì)或非實(shí)質(zhì)細(xì)胞受損傷時(shí)所釋放的非病原體刺激物后也會(huì)誘發(fā)免疫反應(yīng)，這些來自宿主的有害物質(zhì)統(tǒng)稱為損傷相關(guān)分子模式(damage-associated molecular patterns, DAMPs)，DAMPs代表內(nèi)源性信號(hào)，在組織細(xì)胞損傷時(shí)釋放并活化細(xì)胞的各種受體進(jìn)而活化靶細(xì)胞，發(fā)揮各種生物學(xué)功能[4]。這些PAMPs或DAMPs通過與肝內(nèi)表達(dá)于細(xì)胞膜或細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的各種模式識(shí)別受體(pattern recognition receptors，PRRs)相結(jié)合，誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)的發(fā)生；PRRs作為機(jī)體抵抗各種危險(xiǎn)因素的第一道防線，迄今為止已有四種不同家族被發(fā)現(xiàn)和證實(shí)，分別是跨膜蛋白類的Toll-樣受體(toll like receptor, TLRs)、C 型凝集素受體(C-type lectin receptors, CLRs)以及屬于胞漿內(nèi)蛋白類的維甲酸可誘導(dǎo)基因I樣受體(retinoic acid-inducible gene I-like receptor, RLR) 和NOD樣受體 (nucleotide binding and oligomerization domain like receptors，NLRs)[5]。NOD 樣受體是一類主要表達(dá)于胞漿內(nèi)的重要PRRs，目前已發(fā)現(xiàn)的NOD樣受體家族成員在人體內(nèi)有22種，小鼠則有34種[6]。NLRs在感知不同的危險(xiǎn)信號(hào)后能夠誘發(fā)細(xì)胞質(zhì)中稱為“炎癥小體”的蛋白復(fù)合物組裝，其信號(hào)通路被激活后，NLR形成一個(gè)包含效應(yīng)分子絲氨酸蛋白酶Caspase-1前體蛋白和ASC(apoptosis-associated speck-like protein containing a CARD)的復(fù)合物，活化的Caspase-1剪切加工并促進(jìn)IL-1β等促炎細(xì)胞因子的成熟和分泌，進(jìn)而構(gòu)成組織局部炎癥微環(huán)境的形成[7]。

2 NLRP3炎癥小體的活化及功能

在眾多能形成炎癥小體的分子中，已發(fā)現(xiàn)在肝疾病中發(fā)揮功能作用的主要為NLRP3，AIM2和NLRP6，其中NLRP3在肝疾病中的研究最為廣泛[8]。NLPR3炎癥小體的活化主要包含兩個(gè)過程：(1)病原體信號(hào)。如：脂多糖(LPS)能夠通過NF-κB依賴的信號(hào)通路上調(diào)NLRP3表達(dá)[9]；(2)損傷相關(guān)信號(hào)。其中在肝疾病中典型的信號(hào)分別是ATP，尿酸，棕櫚酸，膽固醇結(jié)晶和活性氧(ROS)[10-14]。目前，對(duì)于誘導(dǎo)NLRP3炎癥小體活化的機(jī)制仍然是一個(gè)沒有明確且存在眾多爭(zhēng)論的論題。不同的疾病或模型中其活化各不相同。較為普遍認(rèn)可的理論主要有三個(gè)：(1)細(xì)胞外ATP通過P2X7受體導(dǎo)致細(xì)胞鉀離子外流誘導(dǎo)NLRP3的活化[15]；(2)細(xì)胞吞噬膽固醇結(jié)晶，尿酸和淀粉酶等導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)溶酶體破裂釋放溶酶體組織蛋白酶B活化炎癥小體[16]；(3)ROS依賴的方式活化[17]。然而目前并沒有一個(gè)令人信服的理論能夠更為全面詳細(xì)的闡明NLRP3炎癥小體活化的確切機(jī)制。

研究表明，炎癥小體在肝疾病中的主要作用是其在肝不同細(xì)胞內(nèi)活化后釋放IL-1β進(jìn)而誘發(fā)炎癥反應(yīng)[18]。此外，炎癥小體活化誘導(dǎo)的趨化因子表達(dá)，進(jìn)而招募各種免疫細(xì)胞到達(dá)受損的肝部位，在肝疾病的發(fā)生發(fā)展中也發(fā)揮重要作用[19]。有研究報(bào)道，IL-1β的促炎作用可能是由于其與TLR信號(hào)的協(xié)同效應(yīng)顯著擴(kuò)大了LPS誘導(dǎo)的炎癥因子釋放[20]；而且，IL-1β信號(hào)可以進(jìn)一步通過自分泌和旁分泌的方式而增強(qiáng)，例如：炎癥小體介導(dǎo)的IL-1β釋放促進(jìn)其自身前體(pro-IL-1β)的轉(zhuǎn)錄水平升高、其他炎癥小體組分的生成以及炎癥因子和趨化因子的產(chǎn)生[21]，這樣形成一種正反饋式的方式促進(jìn)局部病變的不斷加重。在肝疾病中，IL-1β能夠促進(jìn)肝臟中炎癥細(xì)胞募集和肝星狀細(xì)胞(HSCs)活化，參與肝纖維化發(fā)生[22]，也能促進(jìn)甘油三酯在肝細(xì)胞中累積，進(jìn)而聯(lián)合腫瘤壞死因子(TNF)誘導(dǎo)肝細(xì)胞凋亡[23]。

除產(chǎn)生IL-1β影響肝局部微環(huán)境外，NLRP3炎癥小體活化所引起的炎癥因子IL-18和IL-33的釋放也可能參與了肝疾病的發(fā)展。研究發(fā)現(xiàn)在使用缺乏蛋氨酸膽堿(MCD)飲食誘導(dǎo)的非酒精性脂肪性肝炎(NASH)模型中，小鼠IL-1β信號(hào)的缺失并不影響NASH模型肝炎的加重，而IL-18的缺失改變了腸道菌群結(jié)構(gòu)而更有利于誘導(dǎo)結(jié)腸炎菌群的產(chǎn)生，導(dǎo)致細(xì)菌代謝產(chǎn)物從腸道轉(zhuǎn)移至肝，誘導(dǎo)炎癥的發(fā)生，促進(jìn)肝炎病情的惡化[24]。IL-33在肝疾病中的作用尚不完全清楚，有研究認(rèn)為它是肝壞死細(xì)胞釋放的一種警告信號(hào)[25]；在小鼠酒精性肝病、肝纖維化和缺血再灌注損傷模型中，IL-33的表達(dá)水平顯著升高[26]。有報(bào)道發(fā)現(xiàn)，IL-33在華支睪吸蟲感染所致的肝致病免疫調(diào)控中發(fā)揮重要作用[27]。然而，在刀豆蛋白-A誘導(dǎo)的急性肝損傷模型中，阻斷IL-33信號(hào)并沒有顯著改善肝損傷作用[28]。IL-33在酒精、非酒精性肝病以及其他病因所誘發(fā)的肝損傷中的作用，仍有待進(jìn)一步闡明。

炎癥反應(yīng)需要迅速高效地發(fā)揮作用后立即被機(jī)體有效地控制并及時(shí)消除已經(jīng)出現(xiàn)的刺激因素，避免過度炎癥應(yīng)答。炎癥小體活化所釋放的IL-1β和IL-18等促炎細(xì)胞因子，其持續(xù)存在勢(shì)必導(dǎo)致組織器官的損傷[29]，因此，誘發(fā)以及活化炎癥小體的因素都需要被精細(xì)調(diào)控?；诖耍瑢?duì)于抑制炎癥小體的相關(guān)機(jī)制研究也逐漸受到廣泛關(guān)注。自噬是由溶酶體介導(dǎo)的細(xì)胞自我保護(hù)過程，有研究發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞內(nèi)的自噬作用能夠通過間接的抑制內(nèi)源性刺激因素或者直接降解炎癥小體組分從而抑制炎癥小體活化[30-31]。另有研究報(bào)道，干擾素(IFN)通過調(diào)控轉(zhuǎn)錄因子STAT1的表達(dá)進(jìn)而抑制NLRP1和NLRP3炎癥小體活化[32]。在肝纖維化的藥物治療中也發(fā)現(xiàn)，抑制NLRP3炎癥小體能夠很好的改善纖維化的發(fā)生發(fā)展[33-35]。目前，有關(guān)抑制炎癥小體活化的研究雖取得了一定成果，然而，具體調(diào)控NLRP3活化的精確靶點(diǎn)仍不是十分清楚，需要更多的臨床及動(dòng)物模型研究進(jìn)行深入探討。

3 NLRP3炎癥小體在不同肝疾病中的作用機(jī)制

3.1 酒精性肝病

急性飲酒會(huì)誘導(dǎo)脂肪肝的發(fā)生，長(zhǎng)期酗酒導(dǎo)致脂肪性肝炎、肝纖維化甚至肝硬化。晚期酒精性肝病伴隨的肝硬化或嚴(yán)重酒精性肝炎通常是不可逆轉(zhuǎn)的，最終引起肝功能衰竭。在急性酒精性肝病的患者中發(fā)現(xiàn)，病人肝中的Caspase-1、NLRP3表達(dá)水平明顯升高[36]，并且，嚴(yán)重酒精性肝病患者與正常人相比，血清中IL-1β水平顯著升高[37]。有研究發(fā)現(xiàn)，NLRP3炎癥小體參與酒精誘導(dǎo)的肝細(xì)胞死亡[38]。而一些能夠活化NLRP3炎癥小體的小分子物質(zhì)如尿酸、ATP等介導(dǎo)了肝內(nèi)肝細(xì)胞和免疫細(xì)胞之間的相互作用，加快了病程的惡化[39]。這些研究都表明，NLRP3炎癥小體的活化促進(jìn)了酒精性肝病的發(fā)展。

然而，在酒精性肝病中，能夠激活NLRP3炎癥小體活化的信號(hào)尚沒有完全闡明。有研究發(fā)現(xiàn)，腸道來源的LPS通過TLR4信號(hào)通路是誘導(dǎo)IL-1β釋放的第一信號(hào)[40]。另有研究報(bào)道，酒精誘導(dǎo)的線粒體功能障礙導(dǎo)致尿酸和ATP等小分子代謝紊亂是參與NLRP3炎癥小體活化的第二信號(hào)[41]。在小鼠誘導(dǎo)酒精性肝病的模型中發(fā)現(xiàn)，酒精處理組的小鼠血清中尿酸水平顯著升高，在使用尿酸合成抑制劑后肝炎癥和肝損傷程度都得到顯著改善[42]。盡管無菌性炎癥信號(hào)在酒精誘導(dǎo)肝臟炎癥中的作用還不十分清楚，但現(xiàn)有的研究提示，來自腸道的PAMPs和來源于肝細(xì)胞的DAMPs在酒精性肝病發(fā)病過程中的發(fā)揮著重要作用?；蛟S以NLRP3炎癥小體和IL-1β為作用靶點(diǎn)將為酒精性肝病的治療提供新的治療手段。

3.2 非酒精性肝病

NLRP3炎癥小體活化在非酒精性肝病中的作用已經(jīng)引起眾多研究者的關(guān)注。在代謝綜合征和胰島素抗藥性研究中表明，炎癥小體的活化參與了疾病的發(fā)展[43-44]，而這些疾病過程都能夠誘發(fā)非酒精性肝病。研究發(fā)現(xiàn)，在2型糖尿病患者血液?jiǎn)魏思?xì)胞內(nèi)NLRP3炎癥小體信號(hào)通路顯著活化[45]。另有報(bào)道，在非酒精性肝病動(dòng)物模型研究的早期階段，肝被認(rèn)為發(fā)生脂肪變性但是缺少炎癥反應(yīng)，炎癥小體信號(hào)通路相關(guān)分子NLRP3、ASC和Caspase-1的mRNA水平升高，但是卻沒有NLRP3炎癥小體的活化發(fā)生(Caspase-1的剪切活化)[46]。提示我們，組織或細(xì)胞特異性炎癥小體的啟動(dòng)可能促進(jìn)了疾病的進(jìn)展，并最終擴(kuò)展到其他器官內(nèi)?；趶?fù)雜的肝細(xì)胞環(huán)境，研究細(xì)胞特異性炎癥小體活化在非酒精性肝病發(fā)展中的作用顯得尤為重要。因?yàn)樵诰凭愿尾〉难芯勘砻鞲沃芯奘杉?xì)胞NLRP3炎癥小體的活化起重要作用[47]，但NLRP3炎癥小體在非酒精性肝病中的作用比預(yù)想的更加復(fù)雜。在非酒精性肝炎中，除了肝免疫細(xì)胞外，肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞也介導(dǎo)了NLRP3炎癥小體的活化。在MCD飲食誘導(dǎo)的非酒精性肝炎小鼠模型上表明，無論骨髓來源的單核巨噬細(xì)胞還是肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞均參與了NLRP3炎癥小體的活化[21]。而在非酒精性肝炎中，NLRP3炎癥小體在肝特異性作用是由不飽和脂肪酸誘導(dǎo)的，它能夠上調(diào)并且活化肝細(xì)胞中NLRP3炎癥小體，誘導(dǎo)IL-1β產(chǎn)生[48]。為了闡明肝細(xì)胞中NLRP3炎癥小體活化的作用，有研究者利用過表達(dá)NLRP3的小鼠模型，盡管該實(shí)驗(yàn)沒有特異性的研究非酒精性肝炎的肝病理過程，但是小鼠全身NLRP3炎癥小體活化介導(dǎo)了肝細(xì)胞發(fā)生細(xì)胞焦亡(一種炎癥小體介導(dǎo)的細(xì)胞死亡形式)[49]。而NLRP3炎癥小體在骨髓來源的細(xì)胞中活化并沒有明顯導(dǎo)致肝病理損傷[50]。另有研究報(bào)道，膽堿缺失飲食能夠誘導(dǎo)肝細(xì)胞死亡以及炎癥小體活化和肝纖維化發(fā)生，而敲除NLRP3后這些癥狀得到顯著減輕[51]，提示NLRP3炎癥小體活化在非酒精性肝炎中是必不可少的。

3.3 HCV感染所致肝病

全球范圍內(nèi)約有1.8億人感染HCV[52]。HCV病毒能夠識(shí)別TLR2、3、4、7、8、9等多種細(xì)胞內(nèi)模式識(shí)別受體并且能夠誘導(dǎo)IFN的生成[53-54]。有研究發(fā)現(xiàn)，HCV感染引起巨噬細(xì)胞IL-1β的釋放促進(jìn)肝病變[55]。而利用小干擾RNA(siRNA)阻斷TLR3、TLR7、TLR8和TLR9后，HCV誘導(dǎo)的炎癥小體活化被顯著抑制[56]。在感染HCV患者單核細(xì)胞中炎癥小體活化能夠?qū)е翴L-18產(chǎn)生，進(jìn)一步活化自然殺傷T細(xì)胞；HCV病毒能夠通過誘導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)NLRP3炎癥小體活化，促進(jìn)膽固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白(SREBP)表達(dá)，進(jìn)而誘發(fā)脂質(zhì)代謝紊亂，介導(dǎo)肝臟病變[57]。綜合以上數(shù)據(jù)表明，HCV感染能夠誘發(fā)炎癥小體活化并參與其引起的肝病變過程，雖然HCV感染所誘發(fā)肝病變中涉及NLRP3炎癥小體活化的相關(guān)研究，目前仍處于早期階段，但我們相信，聚焦特定靶細(xì)胞及肝內(nèi)不同細(xì)胞間的相互作用，深入探索HCV感染致病過程中NLRP3炎癥小體活化在機(jī)體免疫調(diào)控中的作用，無疑將為HCV感染致病機(jī)制的研究及病毒性肝炎的臨床治療，提供新的思路。

3.4 肝纖維化

炎癥小體可以通過直接或間接作用調(diào)節(jié)肝纖維化過程。其直接調(diào)節(jié)主要通過肝星狀細(xì)胞(HSCs)內(nèi)炎癥小體的表達(dá)進(jìn)而促進(jìn)肝纖維化發(fā)生[58]。研究發(fā)現(xiàn)，經(jīng)典的誘導(dǎo)炎癥小體活化物質(zhì)如尿酸結(jié)晶，可以活化小鼠原代HSCs和人肝星狀細(xì)胞系LX-2，尿酸結(jié)晶可以上調(diào)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(TGF-β)表達(dá)誘導(dǎo)HSCs活化并且誘導(dǎo)膠原等細(xì)胞外基質(zhì)的產(chǎn)生和積累，而當(dāng)敲低HSCs內(nèi)ASC基因后，細(xì)胞外基質(zhì)的過量產(chǎn)生得到顯著改善[59]。炎癥小體間接調(diào)節(jié)肝纖維化過程是通過誘導(dǎo)肝巨噬細(xì)胞分泌IL-1β和IL-18進(jìn)而促進(jìn)HSCs活化發(fā)揮作用。腸道來源的PAMPs和肝細(xì)胞損傷釋放的DAMPs都能夠活化肝巨噬細(xì)胞炎癥小體，誘導(dǎo)HSCs活化促進(jìn)肝纖維化發(fā)生[60]。在肝纖維化小鼠模型中，IL-1β水平顯著升高，并且減少IL-1受體的表達(dá)能夠顯著抑制纖維化發(fā)生[61]。此外，在大鼠模型中，阻斷IL-1β信號(hào)能夠抑制四氯化碳誘導(dǎo)和硫代乙酰胺誘導(dǎo)的肝纖維化發(fā)生，敲低NLRP3或ASC的表達(dá)能夠顯著減少TGF-β和1型膠原蛋白的表達(dá)[62]。另有研究表明，Caspase-1作為關(guān)鍵的調(diào)控因子，在高脂誘導(dǎo)的肝纖維化中同樣發(fā)揮重要作用[63]。而且研究發(fā)現(xiàn)，NLRP3通過IL-1R/MyD88參與了肝纖維化關(guān)鍵分子MMP與TIMP平衡的調(diào)控，促進(jìn)了細(xì)胞外基質(zhì)的沉積[64]。這些報(bào)道都表明，NLRP3炎癥小體參與了肝纖維化的發(fā)生發(fā)展。

纖維化形成的一般機(jī)制可能適用于大多數(shù)慢性肝病，但是，目前有關(guān)炎癥小體在除了酒精性肝病和非酒精性肝病外，其他肝纖維化疾病中作用的研究報(bào)道還是比較少。NLRP3炎癥小體在肝纖維化中的作用機(jī)制還有待于進(jìn)一步闡明，其是通過DAMPs對(duì)HSCs的直接活化作用還是通過DAMPs間接誘導(dǎo)肝內(nèi)免疫細(xì)胞分泌IL-1β和IL-18進(jìn)而激活HSCs促進(jìn)纖維化發(fā)生，仍需更多的相關(guān)理論及疾病模型進(jìn)行深入探討和研究。

4 總結(jié)

綜上所述，肝病變中，來自損傷肝細(xì)胞的無菌炎癥信號(hào)和來自腸道細(xì)菌或病毒感染細(xì)胞的病原體相關(guān)分子模式參與了肝致病過程。這些信號(hào)分子通過不同的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑誘導(dǎo)NLRP3炎癥小體蛋白復(fù)合物的組裝和活化，最終導(dǎo)致生物活性分子IL-1β、IL-18和IL-33的產(chǎn)生以及誘發(fā)細(xì)胞焦亡，而炎癥小體活化促使IL-1β等促炎因子在肝沉積，誘導(dǎo)肝細(xì)胞死亡以及更為關(guān)鍵的誘導(dǎo)炎癥小體瀑布式級(jí)聯(lián)反應(yīng)在肝損傷過程中發(fā)揮重要的生物學(xué)效應(yīng)。然而，在不同病因所誘發(fā)肝病理損傷中，NLRP3炎癥小體的具體激活途徑、調(diào)控NLRP3活化的不同靶點(diǎn)及其相互聯(lián)系以及肝微環(huán)境對(duì)炎癥小體活化的影響等仍需更多疾病模型進(jìn)行探討。我們希望通過對(duì)NLRP3炎癥小體在酒精性肝病、非酒精性肝病、慢性HCV感染和肝纖維化中的作用及主要的最新研究成果的整合及分析，進(jìn)而能更加深入的了解NLRP3炎癥小體功能及在肝致病中的重要性，這既有助于為將來確切闡明其在肝疾病發(fā)病中的作用機(jī)制，也有利于尋找有效的調(diào)控NLRP3炎癥小體活化的相關(guān)信號(hào)分子或藥物，從而為臨床肝疾病的治療提供更加直接有效的藥物作用靶點(diǎn)。