張鴻暉 劉清泉 熊秋生

【摘要】 目的：探究色素衍生上皮因子（PEDF）在肝癌組織中表達(dá)的臨床意義。方法：選取2013年1月-2017年10月本院接診的80例肝癌患者為肝癌組及80例健康人作為對(duì)照組。檢測(cè)比較兩組及肝癌不同分期PEDF、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）、人血小板反應(yīng)蛋白1（TSP-1）、基質(zhì)金屬蛋白酶9（MMP-9）和微血管密度（MVD）、瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素2（IL-2）、血栓調(diào)節(jié)蛋白（TM）、白細(xì)胞介素8（IL-8）水平，分析各指標(biāo)間的相關(guān)關(guān)系。結(jié)果：肝癌組VEGF、MMP-9、TNF-α、TM、IL-8及MVD水平均高于對(duì)照組，而PEDF、TSP-1、IL-2水平均顯著低于正常肝組織，比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；VEGF、MMP-9、TNF-α、TM、IL-8和MVD水平隨分化程度的下降而呈升高趨勢(shì)，而PEDF、TSP-1和IL-2水平隨分化程度的下降而呈下降趨勢(shì)，比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；PEDF與VEGF、TM和MVD呈負(fù)相關(guān)（P<0.05），與TSP-1呈正相關(guān)（P<0.05）；VEGF與MMP-9、TM、MVD呈正相關(guān)（P<0.05），與TSP-1呈負(fù)相關(guān)（P<0.05）；TSP-1與MVD、TM呈負(fù)相關(guān)（P<0.05）；MMP-9、IL-8與MVD呈正相關(guān)（P<0.05），IL-2與MVD呈負(fù)相關(guān)（P<0.05）；MMP-9與TM呈正相關(guān)（P<0.05）。結(jié)論：PEDF和TSP-1可能通過(guò)拮抗VEGF和MMP-9對(duì)腫瘤血管生成的調(diào)節(jié)作用來(lái)抑制TM和MVD，從而起到抗癌的作用，其在肝癌的治療方面必將有廣泛的用途。

【關(guān)鍵詞】 PEDF； 肝癌； 作用機(jī)制

【Abstract】 Objective：To investigate the clinical significance of pigment derived epithelial factor（PEDF） expression in liver cancer tissue.Method：A total of 80 patients with liver cancer were selected as liver cancer group and 80 healthy people as control group from January 2013 to October 2017 in our hospital were selected.The levels of PEDF，vascular endothelial growth factor（VEGF），human platelet reactive protein 1（TSP-1），matrix metalloproteinase 9（MMP-9），microvessel density（MVD），tumor necrosis factor-α（TNF-α），interleukin 2（IL-2），thrombomodulin（TM），interleukin 8（IL-8） in different stages of liver cancer and two groups were compared，and analyze the correlation between the indicators.Result：The levels of VEGF，MMP-9，TNF-α，TM，IL-8 and MVD in liver cancer group were higher than those of control group，while the levels of PEDF，TSP-1 and IL-2 were significantly lower than those of control group，the differences were statistically significant（P<0.05）.The levels of VEGF，MMP-9，TNF-α，TM，IL-8 and MVD increased with the decrease of differentiation，while the levels of PEDF，TSP-1 and IL-2 decreased with the decrease of differentiation，the differences were statistically significant（P<0.05）.PEDF was negatively correlated with VEGF，TM and MVD（P<0.05），and positively correlated with TSP-1（P<0.05）.VEGF was positively correlated with MMP-9，TM and MVD（P<0.05），and negatively correlated with TSP-1（P<0.05）.TSP-1 was negatively correlated with MVD and TM（P<0.05）.MMP-9 and IL-8 were positively correlated with MVD（P<0.05），and IL-2 was negatively correlated with MVD（P<0.05）.MMP-9 was positively correlated with TM（P<0.05）.Conclusion：PEDF and TSP-1 may inhibit TM and MVD by antagonizing the regulatory effect of VEGF and MMP-9 on tumor angiogenesis and it may play a role in anticancer.It will be widely used in treatment of liver cancer.

【Key words】 PEDF； Liver cancer； Mechanism of action

First-authors address：The First Affiliated Hospital of Gannan Medical University，Ganzhou 341000，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2018.31.001

原發(fā)性肝癌是高度惡性的腫瘤，其死亡率高居我國(guó)腫瘤死亡率的第二位，嚴(yán)重影響著人們的生命健康[1-2]。幸運(yùn)的是，因色素上皮衍生因子（pigment epithelium derived factor，PEDF）的發(fā)現(xiàn)給肝癌患者帶來(lái)了希望，其在多種惡性腫瘤中均起了重要的抑癌作用[3-4]。并且現(xiàn)多項(xiàng)研究表明PEDF是一種天然的高效的新生血管抑制劑，因PEDF減少腫瘤微血管的密度，故可被用于抑制腫瘤新生血管形成，從而抑制腫瘤的生長(zhǎng)[5-6]。故應(yīng)用分子生物學(xué)技術(shù)檢測(cè)肝癌組織中PEDF及相關(guān)細(xì)胞因子的表達(dá)水平，并結(jié)合臨床資料分析PEDF表達(dá)與肝癌分期、分級(jí)、轉(zhuǎn)移及預(yù)后的關(guān)系；從而探討PEDF在肝癌發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中的作用，對(duì)進(jìn)一步提高我國(guó)肝癌的防治水平具有重要意義和必要性。鑒于此，本院選取2013年1月-2017年10月接診的80例肝癌患者為研究對(duì)象，研究PEDF抑制肝癌發(fā)生發(fā)展的作用。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2013年1月-2017年10月本院接診的80例肝癌患者為肝癌組，根據(jù)美國(guó)癌癥聯(lián)合委員會(huì)（AJCC）制定的第8版癌癥分期系統(tǒng)[7]：Ⅰ期14例、Ⅱ期19例、Ⅲ期21例、Ⅳ期26例。納入標(biāo)準(zhǔn)：術(shù)前均沒(méi)有進(jìn)行化療及介入治療；預(yù)計(jì)存活期>3個(gè)月；均符合肝癌診斷標(biāo)準(zhǔn)；患者及其家屬均知情同意整個(gè)研究流程，并且本院倫理委員會(huì)鄭重批準(zhǔn)；均無(wú)嚴(yán)重性疾病和精神疾病等。排除標(biāo)準(zhǔn)：免疫功能缺陷后自身免疫病，合并其他惡性腫瘤，嚴(yán)重心腦腎等疾病，急性或慢性感染期的患者。另選取同期80例健康人作為對(duì)照組。

1.2 方法 采用ELISA法檢測(cè)腫瘤壞死因子（TNF-α）、白細(xì)胞介素2（IL-2）、血栓調(diào)節(jié)蛋白（TM）、白細(xì)胞介素8（IL-8）在肝癌組織和正常肝組織中的表達(dá)、不同肝癌分期時(shí)的表達(dá)；采用免疫組化法檢測(cè)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）、人血小板反應(yīng)蛋白1（TSP-1）、基質(zhì)金屬蛋白酶9（MMP-9）和微血管密度（MVD）；應(yīng)用分子生物學(xué)技術(shù)研究PEDF表達(dá)。均嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明操作。分析PEDF、MVD、VEGF、TSP-1、MMP-9、TNF-α、IL-2、TM及IL-8表達(dá)的相關(guān)性。結(jié)果判定：MVD以胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性判斷標(biāo)準(zhǔn)，在400倍視野下計(jì)數(shù)5個(gè)視野CD31染成棕黃色的血管數(shù)目，取其平均值作為MVD值[8]。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 使用SPSS 18.0軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料用（x±s）表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)，多組間比較采用F檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，比較采用字2檢驗(yàn)；相關(guān)性采用Spearman相關(guān)分析。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組基線資料比較 肝癌組男49例，女31例；年齡27～72歲，平均（58.71±5.03）歲。對(duì)照組男48例，女32例；年齡27～71歲，平均（58.59±5.06）歲。兩組一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。

2.2 兩組PEDF、VEGF、TSP-1、MMP-9、TNF-α、IL-2、TM、IL-8及MVD水平比較 肝癌組VEGF、MMP-9、TNF-α、TM、IL-8及MVD水平均高于對(duì)照組，而PEDF、TSP-1、IL-2水平均顯著低于正常肝組織，比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表1。

2.3 肝癌組不同分期PEDF、VEGF、TSP-1、MMP-9、TNF-α、IL-2、TM、IL-8及MVD水平比較 VEGF、MMP-9、TNF-α、TM、IL-8和MVD水平隨分化程度的下降而呈升高趨勢(shì)，而PEDF、TSP-1和IL-2水平隨分化程度的下降而呈下降趨勢(shì)，比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表2。

2.4 PEDF、VEGF、TSP-1、MMP-9、TNF-α、IL-2、TM、IL-8、MVD的相關(guān)性分析 Spearman相關(guān)性分析顯示，PEDF與VEGF、TM和MVD呈負(fù)相關(guān)（P<0.05），與TSP-1呈正相關(guān)（P<0.05）；VEGF與MMP-9、TM、MVD呈正相關(guān)（P<0.05），與TSP-1呈負(fù)相關(guān)（P<0.05）；TSP-1與MVD、TM呈負(fù)相關(guān)（P<0.05）；MMP-9、IL-8與MVD呈正相關(guān)（P<0.05），IL-2與MVD呈負(fù)相關(guān)（P<0.05）；MMP-9與TM呈正相關(guān)（P<0.05）；其他指標(biāo)間無(wú)相關(guān)關(guān)系（P>0.05）。見(jiàn)表3。

3 討論

原發(fā)性肝癌是我國(guó)常見(jiàn)惡性腫瘤之一，其死亡率高居我國(guó)腫瘤死亡率的第二位[9-10]。本文通過(guò)研究PEDF、VEGF、TSP-1、MMP-9、TNF-α、IL-2、TM、IL-8、MVD在肝癌組織和正常肝組織中的表達(dá)及與肝癌分期之間的關(guān)系，以及各指標(biāo)間的相互關(guān)系來(lái)闡明PEDF表達(dá)與肝癌的發(fā)生發(fā)展和分級(jí)的關(guān)系，探討PEDF表達(dá)在肝癌發(fā)生發(fā)展中的可能機(jī)制。

本研究結(jié)果顯示，肝癌組VEGF、MMP-9、TNF-α、TM、IL-8及MVD水平均高于對(duì)照組，而PEDF、TSP-1、IL-2水平均顯著低于正常肝組織，比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；且VEGF、MMP-9、TNF-α、TM、IL-8和MVD水平隨分化程度的下降而呈升高趨勢(shì)，而PEDF、TSP-1和IL-2水平隨分化程度的下降而呈下降趨勢(shì)，比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。表明VEGF、MMP-9、TNF-α、TM、PEDF、TSP-1、IL-2和MVD與肝癌分期密切相關(guān)，反映了腫瘤的發(fā)生發(fā)展程度，可以作為肝癌患者的病情、治療效果和預(yù)后的監(jiān)測(cè)指標(biāo)。

肝癌患者的肝組織長(zhǎng)期受到肝癌細(xì)胞的浸潤(rùn)性生長(zhǎng)和擠壓，存在慢性炎癥反應(yīng)，刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答反應(yīng)從而產(chǎn)生大量的TNF-α和IL-8等細(xì)胞因子，TNF-α可以選擇性的在病變部位進(jìn)行自分泌合成和集中，IL-8通過(guò)促進(jìn)有絲分裂、趨化宿主細(xì)胞向周邊組織浸潤(rùn)，啟動(dòng)腫瘤相關(guān)性炎癥反應(yīng)和血管形成來(lái)促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)[11-12]；另一方面，隨著惡性腫瘤的快速生長(zhǎng)，在某種程度上腫瘤血管無(wú)法滿足腫瘤的代謝需要，使得其處在低氧和缺氧的狀態(tài)中，而缺氧狀態(tài)可以刺激VEGF、和IL-8的分泌[13-14]，

同時(shí)腫瘤侵襲導(dǎo)致血管內(nèi)皮損傷使得TM水平升高。VEGF可以促進(jìn)腫瘤血管生成，MMP-9幫助腫瘤細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜發(fā)生降解，有利于腫瘤的侵襲[15]。研究表明，VEGF可以通過(guò)刺激內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生MMPs來(lái)激活基質(zhì)降解反應(yīng)[16]，本研究結(jié)果也顯示，VEGF與MMP-9呈正相關(guān)（P<0.05），提示二者在腫瘤血管生成和侵襲轉(zhuǎn)移過(guò)程中起著協(xié)同；另一方面，TNF-α可以選擇性的在病變部位進(jìn)行自分泌合成和集中，從而起到抗腫瘤的作用，但是研究表明，低濃度的TNF-α不但不能起到抗腫瘤的作用，反而會(huì)通過(guò)上調(diào)VEGF和MMP-9來(lái)促進(jìn)腫瘤生成[17]。PEDF是新發(fā)現(xiàn)的血管生成抑制因子，主要通過(guò)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡來(lái)抑制血管生成，近年來(lái)的研究表明，TSP-1也可以抑制血管生成[18]。本研究結(jié)果也表明，PEDF與TSP-1呈正相關(guān)（P<0.05），提示PEDF和TSP-1與VEDF和MMP-9在腫瘤新生血管過(guò)程中起著拮抗作用，但肝癌組織中PEDF和TSP-1含量顯著降低，表明肝癌患者體內(nèi)的血管生成和抑制的平衡失調(diào)。IL-2與活化的T細(xì)胞增殖有關(guān)，肝癌組織中IL-2含量顯著下降可能與腫瘤誘導(dǎo)的非特異性免疫抑制因子以及生產(chǎn)IL-2所必需的IL-1等淋巴因子活性下降有關(guān)[19-20]。

綜上所述，肝癌組織的慢性炎癥和缺氧狀態(tài)可能通過(guò)刺激TNF-α和IL-8等細(xì)胞因子的大量分泌來(lái)上調(diào)VEGF和MMP-9，從而促進(jìn)腫瘤的生成和侵襲，PEDF和TSP-1可能通過(guò)拮抗VEGF和MMP-9對(duì)腫瘤血管生成的調(diào)節(jié)作用來(lái)抑制TM和MVD，從而起到抗癌的作用，其在肝癌的治療方面必將有廣泛的用途。

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（收稿日期：2018-07-19） （本文編輯：董悅）