非洲豬瘟(African swine fever，ASF)是由非洲豬瘟病毒(African swine fever virus，ASFV)引起的一種急性、熱性、高度傳染性疾病，可感染家豬、野豬和軟蜱類等。ASFV是一種具有囊膜的核質(zhì)大DNA病毒，在病毒分類中隸屬于非洲豬瘟病毒科、非洲豬瘟病毒屬，且為該病毒科唯一成員。ASFV的基因組大小介于170 kb～190 kb之間，大致分為中央保守區(qū)和左右兩側(cè)可變區(qū)，可變區(qū)多編碼表達病毒復制非必需基因，其編碼蛋白可影響病毒毒力或調(diào)控宿主免疫系統(tǒng)，包括多基因家族(MGF)360、MGF505/530、NL-S和L83L等。

近期發(fā)表于《Biochemical and Biophysical Research Communications》的一篇文章中，作者闡述了ASFV China 2018/1毒株編碼的毒力蛋白DP96R對環(huán)狀GMP-AMP合酶(cGAS)介導信號通路cGAS-STING-TBK1的調(diào)控作用。cGAS是近期報道的細胞質(zhì)中一種關(guān)鍵DNA模式識別受體，在識別、結(jié)合胞質(zhì)DNA后被激活，催化產(chǎn)生第二信使cGAMP，cGAMP激活 STING(干擾素基因刺激蛋白)。活化的 STING募集和磷酸化 TBK1、IRF3，pIRF3形成同源二聚體后進入細胞核并結(jié)合IFN啟動子，誘導I型干擾素上調(diào)表達。作者將病毒DP96R與cGAS、STING共轉(zhuǎn)染HEK293T細胞，熒光定量PCR實驗結(jié)果表明，DP96R能夠抑制cGAS和STING過表達引起的IFN-β和 TNF-α mRNA水平增加；通過雙熒光素酶報告基因檢測實驗，作者發(fā)現(xiàn)DP96R能夠抑制cGAS/STING、STING/cGAMP引起的 IFN-β、ISRE和 NF-κB啟動子的激活。以上結(jié)果表明DP96R蛋白對cGAS-STING-TBK1信號通路具有顯著抑制作用。

為了進一步研究DP96R的作用機制，研究人員將TBK1或IRF3-5D同DP96R、雙熒光素酶報告基因共轉(zhuǎn)染HEK293T，研究發(fā)現(xiàn)DP96R能夠抑制TBK1過表達介導的 IFN-β-luc和 PRDIII-I-luc激活，且呈劑量依賴性；DP96R不抑制IRF3-5D和IFN-β蛋白誘導的ISRE啟動子激活。此外，DP96R能夠抑制TBK1、IKKβ而非p65過表達誘導的 NF-κB啟動子激活。Western blot結(jié)果表明，DP96R可抑制TBK1外源性表達，也抑制cGAS/STING刺激引起的TBK1和IRF3磷酸化?？共《緦嶒灲Y(jié)果表明，DP96R可抑制TBK1而非IRF3-5D介導的抗病毒效應(yīng)，促進VSV-GFP的表達。最后，該研究通過將DP96R分節(jié)段進行表達，鑒定出DP96R C端的30～96位氨基酸是其主要的免疫抑制功能區(qū)。

目前，我國16個省及直轄市已經(jīng)呈散發(fā)出現(xiàn)非洲豬瘟疫情。ASFV尚無商品化疫苗問世，現(xiàn)有研究表明，研制基因缺失弱毒活疫苗是ASFV疫苗研發(fā)的首選策略。DP96R蛋白是ASFV毒力蛋白，DP96R基因缺失后病毒毒力減弱，該文章通過對DP96R抑制Ⅰ型IFN表達的機制進行了初步研究，發(fā)現(xiàn)DP96R通過抑制TBK1磷酸化，以及抑制TBK1的表達發(fā)揮其免疫抑制作用，但DP96R在細胞內(nèi)的靶標作用蛋白仍需進一步鑒定。相信隨著對非洲豬瘟病毒基因組的持續(xù)深入研究，以及對其免疫逃逸蛋白作用機制的進一步鑒定，必將對非洲豬瘟基因缺失疫苗的研發(fā)提供更多的理論指導。

評述論文來源：Wang Xi-xi,Wu Jing,Wu Ying-tong,et al.Inhibition of cGAS-STING-TBK1 signaling pathway by DP96R of ASFV China 2018/1[J].Biochem Biophys Res Commun,October 2018.DOI:10.1016/j.bbrc.2018.10.103