張貴杰+代祿梅+張斌+張永麗+王恒山+梁東

[摘要] 研究臭牡丹Clerodendrum bungei的化學(xué)成分。采用硅膠，Sephadex LH-20，MCI，ODS和半制備HPLC等色譜技術(shù)，從臭牡丹95%乙醇提取物中分離得到10個(gè)化合物，分別鑒定為11，12，16S-trihydroxy-7-oxo-17（15→16），18（4→3）-diabeo-abieta-3，8，11，13-tetraen-18-oic acid（1），12S*，13R*-dihydroxy-9-oxo-octadeca-10（E）-enoic acid（2），赪桐苷A（3），trichotomoside（4），山橘脂酸（5），4′-O-methylscutellarein（6），neroplomacrol（7），butylitaconic acid（8），hexylitaconic acid（9），對(duì)羥基苯甲酸（10）?；衔?和2為新天然產(chǎn)物，化合物7～10為首次從該屬植物中分離得到，化合物為3，5，6首次從該植物中分離得到。

[關(guān)鍵詞] 臭牡丹； 馬鞭草科； 化學(xué)成分； 二萜

[Abstract] Ten compounds were isolated from the 95% aqueous EtOH extract of Clerodendrum bungei by a combination of various chromatographic techniques including column chromatography over silica gel， Sephadex LH-20， MCI， ODS， and semi-preparative HPLC. Their structures were elucidated as 11，12，16S-trihydroxy-7-oxo-17（15→16），18（4→3）-diabeo-abieta-3，8，11，13-tetraen-18-oic acid （1）， 12S*，13R*-dihydroxy-9-oxo-octadeca-10（E）-enoic acid （2）， clerodenoside A （3）， trichotomoside （4）， glycosmisic acid （5）， 4′-O-methylscutellarein （6）， neroplomacrol （7）， butylitaconic acid （8）， hexylitaconic acid （9）， p-hydroxybenzonic acid （10） by their physicochemical properties and spectroscopic data. Compounds 1 and 2 are new natural products， while compounds 7-10 were obtained from the genus Clerodendrum for the first time， and compounds 3， 5， 6 were isolated from this plant for the first time.

[Key words] Clerodendrum bungei； Verbenaceae； chemical constituents； diterpenoids

臭牡丹Clerodendrum bungei Steud.系馬鞭草科Verbenaceae大青屬植物，在我國分布廣泛。根、莖、葉入藥，有祛風(fēng)解毒、消腫止痛之效，近來還用于治療子宮脫垂[1]。現(xiàn)代科學(xué)研究證明臭牡丹主要含有二萜、苯乙醇苷等化學(xué)成分[2-5]，具有抗腫瘤、降糖等多方面藥理活性[2-4]。為了尋找其有效成分，本文對(duì)臭牡丹95%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部位進(jìn)行了化學(xué)成分研究，從中分離得到10個(gè)化合物，利用多種波譜技術(shù)鑒定了它們的結(jié)構(gòu)，分別為11，12，16S-trihydroxy-7-oxo-17（15→16），18（4→3）-diabeo-abieta-3，8，11，13-tetraen-18-oic acid（1），12S*，13R*-dihydroxy-9-oxo-octadeca-10（E）-enoic acid（2），赪桐苷A（3），trichotomoside（4），山橘脂酸（5），4′-O-methylscutellarein（6），neroplomacrol（7），butylitaconic acid（8），hexylitaconic acid（9），對(duì)羥基苯甲酸（10）。其中化合物1和2均為新天然產(chǎn)物，化合物1為1個(gè)二萜，化合物3和4為2個(gè)苯乙醇苷，化合物7～10為首次從該屬植物中分離得到，化合物3，5，6為首次從該植物中分離得到（圖1）。

1 材料

瑞士Bruker AVANCE 400 MHz超導(dǎo)核磁共振儀；Thermo-Scientific Exactive高分辨質(zhì)譜儀；Bruker HCT離子阱質(zhì)譜儀；創(chuàng)新通恒高效液相色譜儀，YMC C-18（20 mm×250 mm，5μm）色譜柱；簿層色譜硅膠 GF254 及柱色譜硅膠（200～300目）為青島海洋化工廠生產(chǎn)；反相柱色譜硅膠 RP-18（50 μm）為YMC公司生產(chǎn)；葡聚糖凝膠 Sephadex LH-20為Pharmacia公司生產(chǎn)；MCI（CHP20，75～150 μm）為日本Mitsubishi 公司生產(chǎn)；所用試劑均為分析純或色譜純。

臭牡丹于2015年8月采于廣西桂林，由廣西師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院唐紹清鑒定，標(biāo)本（No CB-2015022）保存于廣西師范大學(xué)省部共建“藥用資源化學(xué)與藥物分子工程”國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室。

2 提取與分離

臭牡丹地上部分15 kg，粉碎后用95%乙醇加熱回流提取3次，合并提取液，減壓濃縮得到浸膏。將浸膏懸浮于水中，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇分別萃取。endprint

乙酸乙酯部分（55 g）經(jīng)硅膠柱色譜分離，以二氯甲烷-甲醇（1∶0～0∶1）梯度洗脫，得到Frs. A～O共15個(gè)部分。Fr. F部分（9.7 g）經(jīng)MCI柱色譜，以甲醇-水（20∶80～100∶0）作為流動(dòng)相梯度洗脫，得到Frs. 1～15共15個(gè)流分。Fr. F-3（672.8 mg）凝膠Sephadex LH-20（甲醇）柱色譜，得到7個(gè)流分Fr.F-3-6（71.5 mg）經(jīng)制備型HPLC，以乙腈-水（10∶90）等度洗脫（8 mL·min-1），得到化合物10（11.4 mg，tR=33.9 min）。Fr. F-6（171.8 mg）凝膠Sephadex LH-20（甲醇）柱色譜，得到7個(gè)流分Fr. F-6-2（72.7 mg）經(jīng)制備型HPLC，以乙腈-水（28∶72）等度洗脫（8 mL·min-1），得到化合物8（25.2 mg，tR=30.3 min）。Fr. F-7（265.4 mg）凝膠Sephadex LH-20（甲醇）柱色譜，得到9個(gè)流分：Fr. F-7-2（56.7 mg）經(jīng)制備型HPLC，以乙腈-水（30∶70）等度洗脫（8 mL·min-1），得到化合物7（17.9 mg，tR=41.4 min）。Fr. F-8（1 713.2 mg）凝膠Sephadex LH-20（甲醇）柱色譜，得到17個(gè)流分Fr. F-8-4（143.1 mg）經(jīng)制備型HPLC，以乙腈-水（38∶62）等度洗脫（8 mL·min-1），得到化合物2（5.3 mg，tR=40.6 min）；Fr.F-8-5（442.4 mg）經(jīng)制備型HPLC，以乙腈-水（35∶65）等度洗脫（8 mL·min-1），得到化合物3（13.9 mg，tR=30.7 min）；Fr. F-8-7（171.3 mg）經(jīng)制備型HPLC，以乙腈-水（40∶60）等度洗脫（8 mL·min-1），得到化合物9（32.3 mg，tR=33.6 min）；Fr. F-8-10（211.6 mg）經(jīng)制備型HPLC，以乙腈-水（32∶68）等度洗脫（8 mL·min-1），得到化合物1（79.7 mg，tR=33.1 min）；Fr. F-8-14（31.5 mg）經(jīng)制備型HPLC，以乙腈-水（25∶75）等度洗脫（8 mL·min-1），得到化合物5（8.8 mg，tR=43.5 min）。Fr. F-11（613.1 mg）經(jīng)ODS柱色譜，以甲醇-水（50∶50～70∶30）作為流動(dòng)相梯度洗脫，進(jìn)一步經(jīng)制備型HPLC，以甲醇-水（60∶40）等度洗脫（6 mL·min-1），得到化合物6（9.0 mg，tR=42.2 min）和4（15.5 mg，tR=66.0 min）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1 白色無定形粉末，[α]20D -1.3（c 0.1，MeOH）。HR-ESIMS m/z 383.145 4 [M+Na]+（計(jì)算值為383.146 5），結(jié)合NMR推測(cè)其分子式為C20H24O6。1H-NMR（表1）顯示1個(gè)芳?xì)湫盘?hào)（δH 7.39，s）和1個(gè)連氧質(zhì)子信號(hào)（δH 4.11，m）。13C-NMR（表1）顯示20個(gè)碳信號(hào)，結(jié)合HSQC譜可以將其歸屬于2個(gè)羰基碳（δC 199.7，173.0），8個(gè)sp2雜化碳信號(hào)，1個(gè)sp3雜化的季碳（δC 38.3），2個(gè)sp3雜化的次甲基（其中1個(gè)與氧相連δC 69.9），4個(gè)亞甲基和3個(gè)甲基碳信號(hào)。1H-1H COSY譜中，H2-15（δH 2.83，2.73）與H-16（δH 4.11），H-16與H3-17（δH 1.17）有交叉信號(hào)峰，表明該化合物存在-CH2-CH（OH）-CH3的結(jié)構(gòu)片段。該化合物的核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道的11，12，16-trihydroxy-17（15→16），18（4→3）-diabeo-abieta-3，8，11，13-tetraen-7-one非常相似[6]，區(qū)別僅在于本化合物的A環(huán)少了1個(gè)甲基碳，多了1個(gè)羧基碳信號(hào)。在HMBC譜中（圖2），H3-18（δH 1.81）與C-2（δC 30.3），C-3（δC 137.4）和C-4（δC 129.1）均存在相關(guān)信號(hào)，表明化合物1的18位被甲基取代；同時(shí)存在H3-18與C-19（δC 173.0）的弱HMBC 4鍵相關(guān)，表明該化合物的19位被羧基取代。

化合物1的絕對(duì)構(gòu)型是采用與Rh2（OCOCF3）4絡(luò)合后測(cè)試CD差譜，運(yùn)用bulkiness規(guī)則的方法得以確定[7]。將化合物1溶解在無水氯仿溶劑中，測(cè)試其基礎(chǔ)譜；之后加入Rh2（OCOCF3）4，待反應(yīng)完全 后測(cè)試其CD光譜，得到穩(wěn)定的反應(yīng)后譜；用反應(yīng)后譜減去基礎(chǔ)譜得到CD差譜（圖3），觀察CD差譜在350 nm附近處的正負(fù)號(hào)，運(yùn)用bulkiness規(guī)則解譜?；衔?的CD差譜在350 nm附近處顯示正的Cotton效應(yīng)（圖3），故確定了16S的絕對(duì)構(gòu)型。綜合上述信息，確定化合物1的結(jié)構(gòu)為11，12，16S-trihydroxy-7-oxo-17（15→16），18（4→3）-diabeo-abieta-3，8，11，13-tetraen-18-oic acid，為新天然產(chǎn)物[4]（圖1）。

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[責(zé)任編輯 丁廣治]endprint