徐魯蒙 李光芝 王振華

近年來，女性宮頸人乳頭瘤病毒(human papillomavirus，HPV)感染呈逐年上升趨勢，與宮頸癌的密切相關(guān)難以根治[1]。女性宮頸HPV感染上升的原因尚不清，國外研究發(fā)現(xiàn)夫妻雙方或性伴侶之間HPV感染的型別具有一定相關(guān)性[2]，故降低男性HPV隱性感染率可預(yù)防或降低女性患者HPV感染率。為進(jìn)一步探討女性宮頸HPV感染的原因，我們對312例宮頸HPV持續(xù)感染女性患者的配偶或性生活>6個月的性伴侶進(jìn)行了HPV型別檢測，報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 對2016年5～12月，312例由婦科門診確診為宮頸HPV持續(xù)感染(即經(jīng)≥2次HPV檢測陽性，且維持時間>6個月)女性患者的配偶或性生活>6個月的性伴侶進(jìn)行HPV分型檢測，其中男性被檢測者年齡在20～45周歲，平均29.17歲，女性被檢測者年齡在18～42周歲，平均28.35歲。所有患者均簽署知情同意書。納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)婦科門診≥2次HPV檢測為陽性的女性宮頸HPV感染患者，其配偶或性生活>6個月的性伴侶；②夫妻雙方或性伴侶之間6個月內(nèi)無不潔性交史；③患者年齡18～45歲，且依從性均較好。排除標(biāo)準(zhǔn)：①夫妻一方或雙方6個月內(nèi)有不潔性生活史；②有尿道、生殖器其他感染性疾病尚未治愈者；③夫妻一方或雙方患免疫功能低下、代謝性疾病或其他慢性疾病等。

1.2 方法

1.2.1 取材 所有男性患者按照順序依次取尿道口、冠狀溝、龜頭分泌物，將HPV拭子緩慢插入尿道口順時針旋轉(zhuǎn)4～5周取出拭子后沿患者龜頭、冠狀溝處順時針摩擦1周取材，然后將拭子放入洗脫管中，沿刷柄折痕處折斷，擰緊管蓋，12 h內(nèi)送檢。

1.2.2 試劑及使用儀器 選用深圳亞能生物科技有限公司生產(chǎn)的人乳頭瘤病毒基因分型(23型)檢測試劑盒(PCR反向點雜交法)、分子雜交儀，由珠海黑馬醫(yī)學(xué)儀器有限公司的Hema9600基因擴(kuò)增儀。

1.2.3 實驗步驟 ①HPV DNA的提取：將洗脫液放入離心管中離心，留取管底的沉淀細(xì)胞。加入50 μL裂解液懸浮沉淀，沸水浴加熱后離心，留取上清液待用；②PCR擴(kuò)增：將反應(yīng)液I及反應(yīng)液II低速離心數(shù)秒后分別加入待測樣品DNA 5 μL，陽性質(zhì)控品和陰性質(zhì)控品同步處理，按條件循環(huán)40次擴(kuò)增；③雜交：將 A、B兩液及所有對應(yīng)的PCR產(chǎn)物，沸水浴10 min后放入雜交箱雜交。陽性質(zhì)控品與陰性質(zhì)控品同步處理；④洗膜：取出膜條至B液中洗滌5 min；⑤顯色：將膜條放入孵育液浸泡，用A液、C液洗膜，后浸泡于顯色液中避光30 min觀察結(jié)果。

1.3 觀察指標(biāo) 設(shè)定觀察指標(biāo)為完全吻合、部分吻合、無相關(guān)性3個等級，完全吻合標(biāo)準(zhǔn)為：男女雙方HPV感染型別完全一致；部分吻合標(biāo)準(zhǔn)為：男女雙方HPV感染型別部分一致(即有≥1個型別不一致)；無相關(guān)性標(biāo)準(zhǔn)為：男女雙方HPV感染無同一型別。

2 結(jié)果

2.1 配對后共檢出176對男女雙方HPV感染均陽性者，其中男性外生殖器發(fā)現(xiàn)疣體者15例，另外136例男性HPV檢測顯示陰性，HPV感染率為56.41%(176/312)。在176例男性HPV陽性患者中共檢測到HPV型別21種，HPV 66型、81型別未檢測到。其中65例HPV亞型完全吻合，單一亞型感染59例(33.52%)，雙重亞型感染5例(2.84%)，多重亞型感染1例(0.57%)。另有36例(20.45%)亞型部分吻合，即雙方感染型別種至少含有1種相同亞型。雙方吻合率為57.39%(101/176)，其中完全吻合率為36.93%(65/176)，見表1。

表1 176對夫妻雙方HPV感染分布情況 例

2.2 在吻合的101對患者中，16、18型別感染的吻合率最高，分別為29/101(28.71%)、28/101(27.72%)，其次為6/11型，分別為12/101(11.90%)、8/101(7.92%)。由此可見，HPV感染吻合率與型別具有一定相關(guān)性，見表2。

表2 101對夫妻雙方HPV感染吻合情況 例

3 討論

近年來，許多學(xué)者發(fā)現(xiàn)，HPV感染除了可以導(dǎo)致尖銳濕疣(condyloma acuminata，CA)外，還可與宮頸癌、陰莖癌、肛門癌、口咽癌等密切相關(guān)[3]。由于HPV病毒在宿主細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行DNA復(fù)制、表達(dá)、組裝，且存在免疫逃逸現(xiàn)象，故HPV存在亞臨床感染或潛伏感染，臨床上早期診斷困難，治療后易復(fù)發(fā)[4，5]。Kokelj等[6]研究報道，女性HPV隱性感染者其男性性伴侶HPV感染率高達(dá)40%，且HPV隱性感染后在一定的條件下是可以發(fā)展成為CA的，故降低男性生殖器部位的HPV感染可同時減少男性和女性HPV感染率及其HPV相關(guān)疾病的發(fā)生概率。Abalos等[2]采用反向線印跡法對29對夫妻進(jìn)行HPV型別檢測發(fā)現(xiàn)，夫妻雙方中至少部分類型一致率可達(dá)到66%，具有高度一致性，且完全吻合者達(dá)41%。我們研究發(fā)現(xiàn)雙方吻合率為57.39%(101/176)，其中完全吻合率為36.93%(65/176)，與上述研究結(jié)論基本一致，說明夫妻或性伴侶同治具有非常大的必要性，也部分解釋了女性宮頸HPV持續(xù)感染呈上升趨勢這一現(xiàn)象。此外，通過對HPV型別進(jìn)行吻合率分析發(fā)現(xiàn)，HPV吻合率與HPV型別具有一定相關(guān)性，16、18型別感染的吻合率最高，其次為11、6型。這可能與引起尖銳濕疣的主要HPV型別相關(guān)，但具體原因有待進(jìn)一步探究。

[1] Li N, Franceschi S, Howell-Jones R, et al. Human papillomavirus type distribution in 30, 848 invasive cervical cancers worldwide: Variation by geographical region, histological type and year of publication[J]. Int J Cancer,2011,128(8):927-935.

[2] Abalos AT，Harris RB，Nyitray AG，et al. Human papillomavirus type distribution among heterosexual couples[J]. J Low Genit Tract Dis，2012，16(1)：10-15.

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[6] Kokelj F, Baraggino E, Stinco G, et al .Study of the partners of women with human papillomavirus infection[J]. Int J Dermatol,1993,32(9):661-663.