盧 磊 劉曉丹 張培影

（1.南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬徐州市中醫(yī)院，江蘇 徐州 221000；2.江蘇省徐州市中心醫(yī)院，江蘇徐州 221000）

中藥及中藥復(fù)方所含成分復(fù)雜，干擾因素多，藥效物質(zhì)基礎(chǔ)不明，藥理作用機(jī)制、代謝過程等問題難以完全解釋清楚，缺乏可靠的藥理學(xué)、毒理學(xué)數(shù)據(jù)，使得中藥單方及中藥復(fù)方制劑的藥效學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)無法客觀的表達(dá)，也直接造成了中醫(yī)藥制劑無法與國際質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)相接軌，導(dǎo)致中醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)發(fā)展現(xiàn)狀窘迫［1］。目前國內(nèi)外主流的中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究模式是將復(fù)雜體系中所含化學(xué)成分采用諸如色譜法、重結(jié)晶法等分離后進(jìn)行活性導(dǎo)向下的追蹤分離或逐個(gè)進(jìn)行藥效學(xué)活性測試［2］，上述方法分離所得的單體成分或成分群是否為真正的中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)目前爭議較大［3］。其一，中藥及其復(fù)方所含化學(xué)成分在生物體內(nèi)環(huán)境（如pH、腸道菌群、肝藥酶）下多發(fā)生復(fù)雜的代謝或生物轉(zhuǎn)化，分離所得化合物可能只是活性成分的前體，例如番瀉苷屬于蒽酮苷類藥化合物，本身無瀉下作用，口服后小腸吸收率低，但在大腸腸道微生物的作用下生成苷元而發(fā)揮瀉下作用［4］，國外苦杏仁苷注射曾用于腫瘤治療，而改用口服后出現(xiàn)較大的毒性反應(yīng)，其根源為腸道菌群中的β-葡萄糖苷酶將苦杏仁苷水解產(chǎn)生毒性的氫氰酸，因此腸道菌群的代謝是苦杏仁苷口服致中毒反應(yīng)的關(guān)鍵環(huán)節(jié)［5］；其二，中藥及其復(fù)方所體現(xiàn)的治療效果往往是多組分、多靶點(diǎn)、多環(huán)節(jié)的綜合結(jié)果，采取成分分離的方法追蹤活性物質(zhì)基礎(chǔ)，整合作用消失，割裂了中藥的整體性［6］。因此，探索符合中醫(yī)辨證思維和整體觀的研究思路以及適合中藥復(fù)雜體系的研究方法，闡明中藥及其復(fù)方藥效物質(zhì)基礎(chǔ)、配伍機(jī)理及作用機(jī)制，是貫穿中藥研究始終的關(guān)鍵科學(xué)問題和主要內(nèi)容。

1 血清藥理學(xué)及血清藥物化學(xué)研究方法的提出

上世紀(jì)80年代初，著名的日本藥理學(xué)家田代真一首次提出了血清藥理學(xué)這一創(chuàng)新思路。他認(rèn)為中藥制劑口服吸收后，在體內(nèi)經(jīng)過胃腸道菌群代謝和排泄過程而發(fā)揮治療作用，因而中藥及其復(fù)方中具有生物活性的成分——藥效物質(zhì)基礎(chǔ)是中藥經(jīng)過人體生物轉(zhuǎn)化之后的產(chǎn)物，這些產(chǎn)物吸收入血后與血漿蛋白結(jié)合并通過血液的流動(dòng)到達(dá)靶標(biāo)器官及組織。因此傳統(tǒng)的體外藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)方法如直接將中藥水提液或水提液經(jīng)細(xì)菌代謝后的成分直接加入離體的組織及細(xì)胞反應(yīng)體系中不如整體動(dòng)物口服或靜脈給藥后檢測其含藥血清化學(xué)成分及生物活性更合理。自上世紀(jì)90年代國內(nèi)學(xué)者王喜軍提出“中藥血清藥理學(xué)”以來，這一方法在中醫(yī)藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究中被廣泛重視及應(yīng)用。

2 中藥血清藥理學(xué)概念、方法及應(yīng)用

中藥血清藥理學(xué)是指將中藥及復(fù)方制劑經(jīng)口灌胃給予動(dòng)物后收集其血清，血清中含有中藥經(jīng)過動(dòng)物機(jī)體生物轉(zhuǎn)化的代謝產(chǎn)物及一些內(nèi)源性物質(zhì)，將此含藥血清取代中藥復(fù)方煎煮劑、丸散劑等加入離體的組織器官或細(xì)胞體系中，并對其進(jìn)行藥效學(xué)及機(jī)制研究的體外研究方法。該方法對于諸如中藥及復(fù)方這種復(fù)雜化學(xué)體系的生物活性成分的發(fā)現(xiàn)與研究較為合適，它克服了中藥粗制劑直接加入反應(yīng)體系中進(jìn)行體外實(shí)驗(yàn)的缺點(diǎn)，能從一定程度上反映中藥方劑復(fù)雜體系與生物機(jī)體的復(fù)雜生命系統(tǒng)的相互作用的規(guī)律。相比于直接以中藥復(fù)方制劑干預(yù)的體外實(shí)驗(yàn)，予含藥血清進(jìn)行的體外研究，其結(jié)果更具科學(xué)和可信度。近年來，血清藥理學(xué)在中醫(yī)藥研究中的應(yīng)用被廣泛接受，并展現(xiàn)出其特有的優(yōu)勢［7］：首先它從實(shí)驗(yàn)方法學(xué)上克服了體外實(shí)驗(yàn)不能直接觀察到的中藥復(fù)方經(jīng)體內(nèi)吸收、代謝等整體藥理效應(yīng)，反映了成分與成分、成分與機(jī)體的協(xié)同作用；其次對含藥血清中化學(xué)成分進(jìn)行藥效學(xué)和藥代學(xué)等進(jìn)行研究，客觀合理地反映出中藥復(fù)方的藥效學(xué)基礎(chǔ)；第三可以用來驗(yàn)證一些中醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)理論，為探討中藥復(fù)方作用規(guī)律提供新思路。

血清藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)方法避免了中藥復(fù)方煎煮及丸散等粗制劑型直接進(jìn)行體外藥物研究結(jié)果所產(chǎn)生的影響；而且經(jīng)過動(dòng)物的吸收代謝等過程，其血清成分可更直接地反映中藥復(fù)方制劑的藥理作用，其對中藥復(fù)方療效和機(jī)制的闡述也更具科學(xué)性。因此，隨著這一實(shí)驗(yàn)方法的不斷完善和改進(jìn)，其在中醫(yī)藥基礎(chǔ)研究的各個(gè)領(lǐng)域被廣泛應(yīng)用，為實(shí)現(xiàn)中醫(yī)藥現(xiàn)代化與國際接軌提供了循證依據(jù)手段。

然而血清藥理學(xué)也存在著許多不足，如實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇、給藥劑量、時(shí)間、血清添加量等方面也對實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生或多或少的影響，但隨著對其理論及實(shí)驗(yàn)的改進(jìn)和研究，這些問題可以通過一系列實(shí)驗(yàn)手段解決或改善。

2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選擇 目前對于制備含藥血清，我們常采用大鼠、家兔等動(dòng)物。然而實(shí)驗(yàn)研究中，由于動(dòng)物種屬的不同，其血清的內(nèi)源性成分也不盡相同，為了盡可能減少不同種屬動(dòng)物血清在生理生化等方面的不同，減少因此而引起的免疫反應(yīng)［8］，要盡量選擇與人類生物學(xué)特征相近的物種［9］，否則其研究會出現(xiàn)較大的差距，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的客觀性。此外，為避免種屬差異，在一些離體器官、組織、細(xì)胞等進(jìn)行體外實(shí)驗(yàn)中，還應(yīng)盡量選擇與實(shí)驗(yàn)動(dòng)物統(tǒng)一種屬的動(dòng)物來制備含藥血清，這樣亦可以減小因上述差異而造成的免疫反應(yīng)，提高研究的可靠性。

2.2 給藥劑量 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物確定以后，需要對動(dòng)物給藥劑量進(jìn)行研究。給藥劑量可直接影響到含藥血清中的藥物的濃度及含量。但是，對于給藥劑量的大小也應(yīng)嚴(yán)格控制，既不能過大、也不能過小。在以含藥血清為載體的研究中，除了將含藥血清加入體外研究體系，還因需要額外加入一定體積的提供離體器官、組織或細(xì)胞營養(yǎng)和能量的培養(yǎng)基而使整個(gè)研究體系的藥物濃度降低。在體外實(shí)驗(yàn)中，藥物的濃度會直接影響實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，當(dāng)培養(yǎng)體系中的藥物濃度低于體內(nèi)實(shí)驗(yàn)要求的有效藥物濃度時(shí)，有可能導(dǎo)致“假陰性”結(jié)果的出現(xiàn)。同時(shí)，考慮到中藥復(fù)方制劑濃縮后藥液的黏稠度、動(dòng)物的胃腸道對濃縮藥液的最大接受量以及過大藥物劑量而導(dǎo)致的毒副作用，所以灌胃給藥的最大劑量也應(yīng)嚴(yán)格控制。因此有學(xué)者提出可以按照一定的公式計(jì)算給藥量，給藥劑量=臨床用藥量×動(dòng)物等效劑量系數(shù)×培養(yǎng)體系內(nèi)血清的稀釋比例［10］。然而不同藥物的吸收代謝、半衰期等因素差異，因此給藥劑量的選擇也有差異。因此對于不同藥物，必須通過合理的預(yù)實(shí)驗(yàn)，尋找最佳的給藥劑量，才能有效降低實(shí)驗(yàn)誤差，保證結(jié)果的有效性和科學(xué)性。

2.3 給藥方案 因?yàn)樗幬锉旧泶x吸收、半衰期等的差異性，因此在對合適的給藥劑量進(jìn)行確認(rèn)后，還需對適宜的給藥方案進(jìn)行研究。需要考慮兩方面因素：是否需要禁食；給藥間隔及持續(xù)時(shí)間。眾所周知，口服的中藥復(fù)方制劑和食物的體內(nèi)過程共用同一條通道——消化道，兩者合用時(shí)勢必會發(fā)生相互作用。一是食物的性質(zhì)會影響某些中藥成分的吸收，例如根據(jù)相似相溶原理，高脂飲食能顯著提高脂溶性成分的吸收，提高其生物利用度；食物中的某些含多價(jià)金屬離子的礦物質(zhì)可能與藥物成分發(fā)生螯合作用，從而影響成分的吸收。二是食物可能短時(shí)間改變胃腸道理化性質(zhì)，影響機(jī)體的生理功能，如胃液pH值變化導(dǎo)致弱酸性及弱堿性中藥成分吸收的改變；食物促進(jìn)膽汁的分泌，導(dǎo)致某些具有肝腸循環(huán)特征的成分吸收增加等。因此，食物和藥物的相互作用可能導(dǎo)致中藥有效成分血藥濃度達(dá)到血清藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)要求的時(shí)間難以確定。為避免食物對中藥化學(xué)成分的干擾，通常應(yīng)保持空腹?fàn)顟B(tài)下灌胃給藥。常規(guī)的做法是在實(shí)驗(yàn)前禁食8～12 h（不禁水），給藥后2 h恢復(fù)自由采食。另外給藥間隔及持續(xù)時(shí)間的選擇既要貼合臨床給藥實(shí)際又要確保含藥血清的藥效。傳統(tǒng)中藥復(fù)方服用通法為“一劑藥煎煮兩次后合并藥液，分兩次服用”，制定每日1次的給藥方案勢必直接影響到該藥的療效，因而中藥血清藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)多采用1 d內(nèi)多次給藥為主［11］。關(guān)于給藥的持續(xù)時(shí)間目前文獻(xiàn)報(bào)道的連續(xù)給藥天數(shù)有3 d者［12］，也有 7 d 者［13］。還有學(xué)者提出每隔 1 個(gè)半衰期給藥1次，連續(xù)給藥7～10 d。無論設(shè)計(jì)什么樣的給藥方案，其目的都是為確保有效成分在血清中達(dá)到穩(wěn)態(tài)的血藥濃度。由于中藥及其復(fù)方成分極其復(fù)雜，成分不同，半衰期亦不同，因而中藥復(fù)方整體的半衰期很難測定。目前化學(xué)成分在體內(nèi)消除半衰期多為1～10 h，且按消除半衰期為給藥間隔給藥，經(jīng)5～6個(gè)半衰期后可達(dá)藥物的穩(wěn)態(tài)血藥濃度。因此為了確保中藥及其復(fù)方絕大多數(shù)成分在含藥血清中濃度維持在一個(gè)基本穩(wěn)定的水平，7～10 d給藥方案是比較保險(xiǎn)的給藥方法。

2.4 采血時(shí)間 藥物血藥濃度會對實(shí)驗(yàn)的結(jié)果產(chǎn)生直接的影響。由于中藥及復(fù)方經(jīng)給藥后，通過吸收、代謝等一系列生理過程，其血藥濃度的達(dá)峰時(shí)間會因各種因素而不同，為了避免因血藥濃度低而導(dǎo)致的“假陰性”結(jié)果，因此應(yīng)盡量選擇在血藥濃度達(dá)峰時(shí)間段內(nèi)采血。但是由于藥物特別是中藥復(fù)方的藥代學(xué)各不同，其有效成分吸收后血藥達(dá)峰濃度的時(shí)間也存在差異［14］。因此許多學(xué)者對此有不同的看法。有學(xué)者認(rèn)為將采血時(shí)間設(shè)定為給藥后2 h較為合理，因?yàn)榇蠖鄶?shù)藥物的血藥成分在給藥后1～2 h即可達(dá)峰。也有學(xué)者研究含藥血清抗血小板作用，以5-HT的釋放和內(nèi)皮細(xì)胞鈣通道阻滯作用作為檢測指標(biāo)，通過對藥物時(shí)效關(guān)系的觀察，探討含藥物血清制備的最佳采血時(shí)間。結(jié)果提示對于該藥物，在給藥后30 min時(shí)采血，其血清藥理作用最佳［15］。 陳一江等［11］通過對大鼠中藥復(fù)方灌胃給藥，每日2次，給藥1 d，分別于末次給藥后0.5 h、1 h、1.5 h、2 h后經(jīng)腹主動(dòng)脈采血并分離含藥血清，結(jié)果表明溫心湯藥物血清能明顯提高離體蛙心的心率和肌張力，且其藥物作用與所取含藥血清的時(shí)間相關(guān)，其中以末次給藥后1 h的含藥血清藥效最佳。單味中藥乃至復(fù)方，因藥物組成復(fù)雜，含有多種活性成分，且藥物配伍具有一定的協(xié)同或消減作用，其藥物療效并非簡單的相加，而是多種藥物成分藥理學(xué)特性的“綜合效應(yīng)”，因此很難對其具體作用機(jī)制予以闡述。因此，對于單味中藥、藥對、乃至復(fù)方的研究，都應(yīng)進(jìn)行必要的血清藥理學(xué)預(yù)實(shí)驗(yàn)，最終確定最合理的采血時(shí)間和方案。

2.5 含藥血清的處理和保存 由于血清中存在許多活性成分，如各種溶酶、補(bǔ)體等，而這些成分都會對體外培養(yǎng)的細(xì)胞、病毒以及組織器官等產(chǎn)生影響等，因此為避免上述因素的干擾，常采用血清滅活等方法進(jìn)行處理。常用處理方法［16］有丙酮法、乙醇法、加溫法等。也有學(xué)者認(rèn)為血清中的補(bǔ)體等活性成分可能參與中藥復(fù)方各組分的協(xié)同作用等過程，尤其是一些特殊中藥，如抗病毒類、助消化類的中藥，一旦滅活活性成分，其藥理作用可能發(fā)生改變，甚至出現(xiàn)“假陰性”結(jié)果。且從正常藥物吸收、代謝過程角度，對血清進(jìn)行高溫等滅活處理也與藥物入血、起效等過程不符，因此有學(xué)者認(rèn)為不可簡單地一概采用滅活的方法。韓儉等［17］通過實(shí)驗(yàn)研究滅活處理對含藥血清的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)經(jīng)過滅活處理后的含藥血清，對研究的幾種細(xì)菌均無抑制作用，而未滅活處理的含藥血清可顯著抑制或滅殺流感嗜血桿菌、大腸桿菌。而低溫冷凍真空抽干也因過程中補(bǔ)體作用的活性成分的丟失或失活而出現(xiàn)陰性結(jié)果。所以對于血清的處理和保存，應(yīng)盡可能使用新鮮或保存時(shí)間短的滅活血清。

2.6 血清添加量 為了驗(yàn)證藥物的藥效學(xué)及機(jī)制等研究，含藥血清的濃度和添加量等至關(guān)重要。有研究發(fā)現(xiàn)，隨著對體外細(xì)胞、器官等體系中逐漸增加含藥物血清的添加量，其藥效-含藥血清添加比例曲線呈一定的正態(tài)分布趨勢，這說明反應(yīng)體系中含藥血清的添加量對藥物的藥效學(xué)有一定的影響，但這種作用并非越大越好。高濃度可能因其強(qiáng)細(xì)胞毒性作用而影響結(jié)果。有學(xué)者報(bào)道較高濃度的含藥血清在體系中可不同程度抑制細(xì)胞增殖，而10%的添加比例應(yīng)用于實(shí)驗(yàn)中最佳［18］。 王霖等［19］通過實(shí)驗(yàn)研究含藥血清的添加量與藥理毒理作用時(shí)發(fā)現(xiàn)，當(dāng)含藥血清被10倍稀釋時(shí)，含藥血清對細(xì)胞毒性的幾乎無影響。然而因各類實(shí)驗(yàn)條件的不同，最好的方法是通過預(yù)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證的最佳血清添加比例。

綜上所述，隨著血清藥理學(xué)在各個(gè)領(lǐng)域的廣泛應(yīng)用，越來越多的學(xué)者通過各種方法對某些研究條件進(jìn)行完善和改進(jìn)，以期更好的服務(wù)于科學(xué)研究。有學(xué)者指出血漿和血清兩個(gè)概念本身即存在明顯的差別，含藥血漿中的藥效成分含量高于含藥血清［20］，建議體外藥理實(shí)驗(yàn)用含藥血漿代替含藥血清［21］。對中藥特別是中藥復(fù)方的研究，血清藥理學(xué)將是一把利器，可更好的闡述中醫(yī)藥的療效與機(jī)制，使之為現(xiàn)代醫(yī)學(xué)領(lǐng)域所認(rèn)可，實(shí)現(xiàn)中醫(yī)藥的國際化。

3 中藥血清藥物化學(xué)概念、方法及應(yīng)用

中藥血清藥物化學(xué)是對中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)進(jìn)行研究的新領(lǐng)域，在中藥現(xiàn)代化研究中起到重要作用。血清藥物化學(xué)是以給藥后的血清為研究對象，從血清中分離并鑒定出移行成分，對血清中移行成分與藥物療效進(jìn)行相關(guān)性分析［22］。通過該實(shí)驗(yàn)方法，可直觀反映中藥給藥后吸收入血的成分?jǐn)?shù)和量隨采血時(shí)間的變化規(guī)律；另外，采用血清色譜指紋圖譜為指導(dǎo)，可選擇性去除血清固有的內(nèi)源性雜質(zhì)，富集吸收入血的有效成分。因此血清藥物化學(xué)可以很好地彌補(bǔ)血清藥理學(xué)無法確定最佳給藥方案、最佳采血時(shí)間、血清固有成分干擾試驗(yàn)結(jié)果等缺陷，可推動(dòng)中藥藥理及藥代動(dòng)力學(xué)的發(fā)展，實(shí)現(xiàn)中藥研究與國際標(biāo)準(zhǔn)的精準(zhǔn)接軌。

中藥血清藥物化學(xué)是以中藥及復(fù)方藥物成分基礎(chǔ)為研究目的的。這也決定其研究范疇?wèi)?yīng)囊括以下幾方面［1］：1）對給藥樣品建立指紋圖譜，明確給藥樣品所含原型成分、含量，并對樣品質(zhì)量穩(wěn)定性精確控制；2）通過在線檢測，確定采血時(shí)間及方式；3）采用科學(xué)方法對含藥血清的樣品進(jìn)行制備；4）聯(lián)合高效液相色譜法、液-質(zhì)聯(lián)用法等現(xiàn)代分析手段對血清樣品進(jìn)行分析和鑒定；5）采用色譜技術(shù)、膜分離技術(shù)對血中可變成分進(jìn)行單一化處理；6）對血中相關(guān)成分與中藥固有的藥效進(jìn)行相關(guān)性分析，明確藥效的成分；7）對中藥復(fù)方進(jìn)行研究，闡明復(fù)方的藥動(dòng)學(xué)特征，指導(dǎo)最佳給藥方案。

血清藥物化學(xué)在中藥及其復(fù)方研究中得到了廣泛的應(yīng)用。如單味藥中，從遠(yuǎn)志水提物的血清中的移行成分分離獲得了3，4，5-三甲基肉桂酸及其代謝產(chǎn)物甲基3，4，5-三甲基氧基肉桂酸，藥效研究示兩者具有顯著鎮(zhèn)靜催眠作用；越桔莖葉提取物口服給藥后血清中含熊果苷及秦皮苷，藥效研究顯示兩者活性與越桔療效具有相關(guān)性；白術(shù)提取物入血清檢測未發(fā)現(xiàn)無蒼術(shù)酮及蒼術(shù)內(nèi)酯，而僅有TEDYA水解產(chǎn)物TEDY吸收入血，提示其直接作用物質(zhì)為TEDY，TEDYA為前藥；東北紅豆杉醇提物入血成分含紫杉醇、紫杉寧、銀杏雙黃酮等成分，且藥效實(shí)驗(yàn)證實(shí)其為藥效部位群；口服刺五加提取物后，異秦皮啶的藥時(shí)曲線呈現(xiàn)雙峰吸收，但異秦皮啶單體給藥則顯示單峰吸收，該現(xiàn)象可能為提取物所含游離異秦皮啶及其多種前體化合物在體內(nèi)生物轉(zhuǎn)化共同作用的結(jié)果，刺五加提取物相當(dāng)于異秦皮啶的緩釋系統(tǒng)［23］。在復(fù)方研究中，茵陳蒿湯全方口服后吸收入血的21種移行成分中，8種成分為各單味藥或任意組合給藥后入血移行成分所不含，經(jīng)追蹤發(fā)現(xiàn)該8種成分具有顯著的保肝利膽活性［24-25］；六味地黃丸血清藥物化學(xué)研究發(fā)現(xiàn)鑒定的11種血清移行成分中，5-羥甲基-2-糠酸含量較高，但體外含量甚微，其出現(xiàn)是藥物與人體以及藥物之間相互協(xié)同作用的結(jié)果［26-27］。

綜上所述，血清藥物化學(xué)在中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立、復(fù)方藥效物質(zhì)基礎(chǔ)等方面具有重要意義。

4 血清藥理學(xué)與血清藥物化學(xué)的有機(jī)結(jié)合

以往中藥成分的研究多停留在系統(tǒng)分離的層面上，未能對藥物體內(nèi)吸收、代謝過程中的化學(xué)成分進(jìn)行分析。中藥多以口服給藥并經(jīng)胃腸道、肝腸循環(huán)過程中多種酶、微生物的代謝作用而進(jìn)入血液，從而發(fā)揮一定的治療作用，即中藥原藥成分并非僅僅通過直接作用而發(fā)揮療效，而可能通過中藥原藥成分、原藥成分代謝產(chǎn)物以及機(jī)體隨之產(chǎn)生的內(nèi)源性生理活性物質(zhì)多靶點(diǎn)、多途徑的整合作用而產(chǎn)生綜合效應(yīng)（見圖1）。近年來，指紋圖譜控制中藥及其制劑的質(zhì)量逐漸為國內(nèi)外提倡和接受，但是中藥指紋圖譜只能反應(yīng)中藥及制劑質(zhì)量的穩(wěn)定性，卻不能直觀反應(yīng)其療效。采用數(shù)據(jù)處理技術(shù)將指紋圖譜中色譜峰峰面積積分?jǐn)?shù)據(jù)和藥理學(xué)數(shù)據(jù)進(jìn)行關(guān)聯(lián)，探討化學(xué)成分和藥效學(xué)的相關(guān)性，即從譜-效關(guān)系結(jié)合角度研究其生物效應(yīng)機(jī)理，應(yīng)能更客觀地反映中藥復(fù)方的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及配伍規(guī)律。竇志華等在國內(nèi)較早地采用了“血清藥理學(xué)”與“血清藥物化學(xué)”相結(jié)合的模式，通過含藥血清譜-效關(guān)系分析這一方法初步闡明了復(fù)方制劑五仁醇膠囊保肝作用的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)［28］，此后又利用譜效關(guān)系研究思路對茵陳蒿湯不同配伍方法下的含藥血清分別進(jìn)行血清指紋圖譜研究以及保肝作用評價(jià)，并分別采用雙變量相關(guān)性分析、多元回歸分析，指認(rèn)血清指紋圖譜中與藥效相關(guān)的色譜峰［29］；經(jīng)過篩選得到柴胡-黃芩保肝作用有效部位后，將該有效部位給藥后取不同采血時(shí)間的含藥血清進(jìn)行體外保肝活性研究，同時(shí)建立血清指紋圖譜，通過雙變量分析得到譜效相關(guān)性結(jié)果，最終顯示兩個(gè)峰與保肝作用密切相關(guān)［30］。因此，隨著對血清指紋圖譜及其血清藥理活性的譜效關(guān)系的深入研究，對于中藥或復(fù)方療效物質(zhì)基礎(chǔ)研究也將進(jìn)一步得到闡明。

圖1 血清藥理學(xué)及血清藥物化學(xué)示意圖［31-32］

傳統(tǒng)的中藥譜效關(guān)系研究是指將指紋圖譜與藥理藥效相結(jié)合，建立兩者的數(shù)學(xué)模型，從相關(guān)性結(jié)果中發(fā)現(xiàn)能夠反映藥材及制劑質(zhì)量的指標(biāo)。而含藥血清中的化學(xué)成分（中藥原藥成分、原藥成分代謝產(chǎn)物、生理活性物質(zhì)）與藥理活性直接相關(guān)，因此將血清藥物化學(xué)、血清藥理學(xué)兩者結(jié)合能更直接反應(yīng)物質(zhì)基礎(chǔ)與功效、作用之間的關(guān)系，能克服中藥及復(fù)方粗制劑本身對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的干擾，并提高藥理實(shí)驗(yàn)重復(fù)性、真實(shí)性和可靠性。盡管血清藥物化學(xué)和血清藥理學(xué)仍有許多盲區(qū)，但卻有著重要的應(yīng)用作用，隨著研究的深入，學(xué)科的交叉互補(bǔ)，相信血清藥物化學(xué)與血清藥理學(xué)協(xié)同研究及其譜效關(guān)系研究的會不斷深入和完善，以期更多地應(yīng)用于中藥及復(fù)方的藥理和機(jī)制研究中，為中藥譜效關(guān)系研究提供更為準(zhǔn)確地評價(jià)方法。

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