韋桂蘭 綜述,蔣文欽 審校

(廣西壯族自治區(qū)桂林市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科　541002)

新生兒外周血有核紅細(xì)胞(NRBC)檢測(cè)是臨床檢驗(yàn)項(xiàng)目，NRBC在新生兒中的臨床意義還不清楚，對(duì)新生兒外周血NRBC檢出率最高的是出生后的第1天，然后其數(shù)量隨著日齡增加而減少。目前，多種血液分析儀可對(duì)NRBC進(jìn)行報(bào)警提示，具有篩查功能，很多醫(yī)院還沒有對(duì)NRBC進(jìn)行常規(guī)檢測(cè)和常規(guī)報(bào)告，復(fù)檢NRBC僅限于校正白細(xì)胞使用。結(jié)合新生兒的生理病理特點(diǎn)，參照血液分析儀異常報(bào)警信息，筆者所在科室建立了適合本院的新生兒外周血NRBC復(fù)檢規(guī)則，經(jīng)過(guò)評(píng)估和驗(yàn)證，證明它是適合于新生兒NRBC的復(fù)檢規(guī)則，通過(guò)儀器法與手工顯微鏡檢查聯(lián)合檢測(cè)，實(shí)現(xiàn)精準(zhǔn)檢驗(yàn)。胎兒NRBC被學(xué)者們認(rèn)為是無(wú)創(chuàng)性產(chǎn)前診斷的最佳細(xì)胞來(lái)源，對(duì)新生兒有核紅細(xì)胞檢測(cè)與相關(guān)疾病的研究也引起了越來(lái)越多的臨床醫(yī)生關(guān)注[1-2]。

1　新生兒外周血NRBC檢測(cè)方法

1.1鏡檢法(以鏡檢法為金標(biāo)準(zhǔn))在SP-1000i自動(dòng)或手動(dòng)模式推片染色，用油鏡在血膜體尾交界處分類400個(gè)白細(xì)胞時(shí)所見到的有核紅細(xì)胞，同時(shí)計(jì)數(shù)所見到的NRBC數(shù)[3-4]。

1.2血液分析儀法Sysmex XN-1000全自動(dòng)分析儀檢測(cè)NRBC XN-1000有兩個(gè)通道即WBC/BASO和NRBC通道(也叫WNR通道)，為了進(jìn)行白細(xì)胞精準(zhǔn)檢測(cè)增加了對(duì)NRBC的修正功能。在WNR通道中可對(duì)白細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)和分類，也可對(duì)NRBC和嗜堿性粒細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)。Lysercell WNR試劑中的表面活性劑可使紅細(xì)胞溶血的同時(shí)也能透過(guò)白細(xì)胞的細(xì)胞膜。 根據(jù)白細(xì)胞外形和內(nèi)部結(jié)構(gòu)的特征不同，利用散射光可捕捉和辨別其形態(tài)的差異，從而把嗜堿性粒細(xì)胞與其他白細(xì)胞區(qū)分開來(lái)。Fluorocell WNR試劑可同時(shí)對(duì)白細(xì)胞及NRBC的核酸、細(xì)胞器進(jìn)行熒光染色，白細(xì)胞染色部位比NRBC多，同時(shí)白細(xì)胞熒光強(qiáng)度也比NRBC強(qiáng)?？筛鶕?jù)熒光量的差異，將NRBC其他白細(xì)胞進(jìn)行區(qū)別計(jì)數(shù)，記錄得到NRBC的絕對(duì)數(shù)(×109/L)和百分率(NRBC%)數(shù)據(jù)，也可避免NRBC對(duì)白細(xì)胞的干擾。

2　全血細(xì)胞分析儀檢測(cè)外周血NRBC與手工顯微鏡檢查聯(lián)合檢測(cè)能為臨床提供精準(zhǔn)檢驗(yàn)

多種全血細(xì)胞分析儀對(duì)有核紅細(xì)胞進(jìn)行應(yīng)用評(píng)價(jià)研究顯示，System XE-2100能準(zhǔn)確地自動(dòng)計(jì)數(shù)外周血中NRBC，也可在NRBC增高時(shí)準(zhǔn)確計(jì)數(shù)白細(xì)胞數(shù)量,還有助于一些血液病及非血液病患者的篩查與診斷[5]。 XE-2100血細(xì)胞分析儀檢測(cè)外周血，對(duì)NRBC有良好的過(guò)篩功能，但還不能完全代替手工顯微鏡檢查，仍需嚴(yán)格按照血細(xì)胞復(fù)檢規(guī)則對(duì)標(biāo)本進(jìn)行復(fù)檢[6]。儀器計(jì)數(shù)新生兒外周血NRBC的重復(fù)性明顯好于顯微鏡計(jì)數(shù)法，System XE-2100對(duì)新生兒外周血NRBC計(jì)數(shù)快速、準(zhǔn)確，能很好地滿足臨床應(yīng)用[7]。XE-5000全自動(dòng)血液細(xì)胞分析儀可替代傳統(tǒng)的顯微鏡分類計(jì)數(shù)方法應(yīng)用于臨床[8]。洪駿等[9]的研究結(jié)果顯示：System XN-2000全自動(dòng)血液分析儀可以準(zhǔn)確地檢測(cè)外周血NRBC，并可自動(dòng)校正WBC分類計(jì)數(shù)結(jié)果，有效降低推片復(fù)檢率，縮短了標(biāo)本周轉(zhuǎn)時(shí)間。使用XN-3000進(jìn)行外周血NRBC計(jì)數(shù)，準(zhǔn)確性高，可替代顯微鏡法，有一定的臨床應(yīng)用價(jià)值[10]。XN-1000檢測(cè)NRBC比流式細(xì)胞術(shù)有更高的診斷特異性(95.7%)，能快速、準(zhǔn)確、有效地自動(dòng)計(jì)數(shù)外周血NRBC[3]。 XN-9000能快速、準(zhǔn)確、有效地自動(dòng)計(jì)數(shù)外周血NRBC。當(dāng)鏡檢結(jié)果與儀器檢測(cè)結(jié)果差異較大時(shí),需重新校正WBC計(jì)數(shù)[11]。雅培CELL-DYN Ruby全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀檢測(cè)NRBC時(shí)結(jié)果的準(zhǔn)確性較差,當(dāng)有NRBC的報(bào)警提示時(shí),一定要推血涂片鏡檢計(jì)數(shù),并用公式計(jì)算出白細(xì)胞總數(shù)[12]。精準(zhǔn)檢驗(yàn)是支撐精準(zhǔn)醫(yī)療的基礎(chǔ)，臨床實(shí)驗(yàn)室建設(shè)是檢驗(yàn)精準(zhǔn)的保障。目前臨床實(shí)驗(yàn)室的全血細(xì)胞分析儀有多種多樣，參差不齊，隨著檢驗(yàn)技術(shù)的不斷提高和檢驗(yàn)儀器的不斷更新，臨床實(shí)驗(yàn)室把新技術(shù)、新方法和新設(shè)備及時(shí)地應(yīng)用于常規(guī)檢驗(yàn)工作，服務(wù)于精準(zhǔn)醫(yī)療，通過(guò)大數(shù)據(jù)的建立、整合，應(yīng)用到醫(yī)療實(shí)踐中去，實(shí)現(xiàn)精準(zhǔn)醫(yī)療。目前本科室已使用XN-1000常規(guī)檢測(cè)新生兒外周血NRBC，直接測(cè)得NRBC數(shù)據(jù)，結(jié)合人工鏡檢結(jié)果，報(bào)告NRBC#和NRBC%，通過(guò)實(shí)踐證明，在保證質(zhì)量控制的前提下，此法對(duì)新生兒NRBC聯(lián)合檢測(cè)比傳統(tǒng)方法更快捷更準(zhǔn)確，對(duì)新生兒NRBC精準(zhǔn)檢驗(yàn)是可以做到的。

3　精準(zhǔn)醫(yī)療在有核紅細(xì)胞檢測(cè)中的應(yīng)用

WALKNOWSKA等在1969年首次報(bào)道從孕婦外周血中提取胎兒細(xì)胞進(jìn)行產(chǎn)前診斷，隨后的研究表明，胎兒NRBC是最好的產(chǎn)前診斷細(xì)胞來(lái)源，而具有完整的核物質(zhì)胎兒NRBC，攜帶了完整的胎兒基因[1]。目前高通量基因測(cè)序已用于產(chǎn)前篩查與診斷；劉麗平等[1]研究顯示，胎兒有異常的孕婦其外周血中也有胎兒NRBC增多的現(xiàn)象。王志宏等[13]的研究提示母血中胎兒NRBC數(shù)量增加預(yù)示妊娠并發(fā)癥程度加重并威脅胎兒生命,應(yīng)積極采取干預(yù)措施,必要時(shí)終止妊娠。但由于孕婦外周血胎兒細(xì)胞含量很少，分離技術(shù)復(fù)雜，價(jià)格貴等原因，此技術(shù)尚不能在臨床推廣使用。眾多研究表明,許多急性和慢性刺激可以導(dǎo)致循環(huán)血液中NRBC數(shù)量增加,新生兒外周血NRBC數(shù)與新生兒窒息嚴(yán)重程度有關(guān)，新生兒外周血NRBC計(jì)數(shù)對(duì)新生兒窒息的早期診斷和窒息程度判斷及預(yù)后具有重要意義[14]。譚寧等[15]的研究顯示與NRBC計(jì)數(shù)與圍生期窒息新生兒早期腦損傷程度存在相關(guān)性,對(duì)評(píng)估新生兒腦損傷預(yù)后有一定價(jià)值。李灝等[16]的研究顯示與NRBC產(chǎn)生和釋放增加有關(guān)的各種病理過(guò)程,并強(qiáng)調(diào)急慢性缺氧、免疫調(diào)節(jié)等對(duì)NRBC的影響。賈中偉等[17]等檢測(cè)外周血NRBC可能成為新生兒窒息診斷的依據(jù)之一。健康成人中無(wú)NRBC，成人外周血中一旦出現(xiàn)NRBC則為病理現(xiàn)象，準(zhǔn)確計(jì)數(shù)外周血中的NRBC具有重要的臨床意義。新生兒外周血的NRBC在出生后很快減少,隨著新生兒外周血NRBC檢測(cè)作為一項(xiàng)常規(guī)項(xiàng)目開展，精準(zhǔn)檢驗(yàn)新生兒外周血NRBC變成了可行。目前作為前沿檢驗(yàn)技術(shù)的高通量測(cè)序、質(zhì)譜等檢測(cè)還很多的問題需要解決，在分子診斷學(xué)技術(shù)、質(zhì)譜技術(shù)等領(lǐng)域，醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)迫切需要采用自建檢測(cè)方法開展一些新的檢驗(yàn)項(xiàng)目，在臨床檢驗(yàn)中基于準(zhǔn)確性的標(biāo)準(zhǔn)化檢測(cè)是目前急需的[18-19]。探討新生兒外周血NRBC精準(zhǔn)檢測(cè)方法能為臨床提供更準(zhǔn)確的數(shù)據(jù)，以利于臨床的跟蹤治療與科學(xué)研究。

4　問題與展望

利用血液分析儀直接檢測(cè)NRBC數(shù)量和百分?jǐn)?shù)，有望成為常規(guī)的檢測(cè)方法，尤其與手工鏡檢聯(lián)合檢測(cè)可提供更準(zhǔn)確的結(jié)果。目前，很多醫(yī)院還沒有對(duì)外周血NRBC進(jìn)行常規(guī)檢測(cè)和常規(guī)報(bào)告，對(duì)NRBC的檢測(cè)和復(fù)檢規(guī)則的應(yīng)用主要是用于校正白細(xì)胞使用。各實(shí)驗(yàn)室很少做本實(shí)驗(yàn)室的正常參考值，對(duì)于新生兒血液中NRBC數(shù)量的正常參考范圍尚有待大量臨床研究來(lái)驗(yàn)證[16]。已經(jīng)被證實(shí)了的是孕婦胎兒NRBC是最好的產(chǎn)前診斷細(xì)胞來(lái)源。近年來(lái)，因?yàn)槲覈?guó)婚檢率下降和“二孩政策”放開后出現(xiàn)大量高齡產(chǎn)婦，出生缺陷率呈上升趨勢(shì)。而新生兒NRBC是否能成為早期診斷新生兒疾病的靶細(xì)胞，尚需要大量臨床研究資料來(lái)證實(shí)。臨床實(shí)驗(yàn)室是實(shí)現(xiàn)精準(zhǔn)檢驗(yàn)的載體，把一些新技術(shù)、新方法和新設(shè)備及時(shí)地應(yīng)用于常規(guī)檢驗(yàn)工作，做到檢驗(yàn)精準(zhǔn)，才能為精準(zhǔn)醫(yī)療提供更加可靠的依據(jù)，才能服務(wù)于精準(zhǔn)醫(yī)療[20]。