徐翠

（南昌珠安生物技術(shù)有限公司，江西南昌 330013）

我國豬場由致病性大腸桿菌導(dǎo)致的疾病，主要表現(xiàn)為仔豬白痢、仔豬黃痢和仔豬水腫病等幾種形式。2016年2月，新余市一豬場，60kg左右的中豬突然發(fā)病，表現(xiàn)為伴有全身感染的急性胃腸炎癥狀，并有較多死亡。經(jīng)病原分離和血清型鑒定，確定本病由大腸桿菌O83:H1血清型引起?，F(xiàn)總結(jié)報(bào)告如下：

1 發(fā)病情況

該養(yǎng)豬場飼養(yǎng)母豬300頭，自繁自養(yǎng)商品豬出售。2016年春節(jié)前，該場的商品豬曾發(fā)生過大面積傳染性胃腸炎。疫病過去后15d左右，商品豬中60kg左右的中豬突然發(fā)病，表現(xiàn)為伴有全身感染的急性胃腸炎癥狀。發(fā)病率高達(dá)70%～80%。發(fā)病后不斷有豬死亡，最多一日死豬達(dá)20頭，最后全場共死亡70余頭。畜主以為中豬再次發(fā)生傳染性胃腸炎，采取控料處理；后又在飼料中投放多維、氟苯尼考和替米考星等藥物進(jìn)行治療，均無效。經(jīng)病原分離和藥敏試驗(yàn)，建議畜主用頭孢類藥物治療，疫情才最后平息。發(fā)病豬群免疫過豬瘟、豬藍(lán)耳病、豬偽狂犬病和豬圓環(huán)病毒病等疫苗。

2 癥狀和剖檢變化

發(fā)病豬厭食，體溫最高不超過40.2℃。主要癥狀為嘔吐和水樣腹瀉，部分還有臥地劃水樣神經(jīng)癥狀，發(fā)病后2～4d死亡。

剖檢5頭發(fā)病死亡豬，主要肉眼所見為小腸壁有不同程度充血，腸壁變薄，腸腔擴(kuò)張，其內(nèi)積有多量淡黃色水樣液體。腸系膜淋巴結(jié)腫大，切面多汁。胃內(nèi)空虛或只有少量飼料，胃黏膜潮紅。心肌柔軟，心腔內(nèi)有較多積血。

3 實(shí)驗(yàn)室檢測

3.1 細(xì)菌分離和純化

將小腸液和肺洗液接種于TSA固體培養(yǎng)基上，37℃培養(yǎng)24h，兩者均見培養(yǎng)基上長出許多直徑約1mm表面光滑、濕潤、圓形、中間突起且邊緣整齊的小菌落。勾取這種菌落染色和鏡檢，確定為疑似大腸桿菌。將疑似的大腸桿菌接種于新的TSA上純化。選二代的單個(gè)疑似菌落再接種于伊紅美蘭（EMB）和麥康凱培養(yǎng)基上培養(yǎng)。在EMB上長出光滑、濕潤、邊緣整齊、單個(gè)黑色帶金屬光澤的菌落。在麥康凱上長出表面光滑、濕潤、圓形、中間突起的粉紅色菌落。這些細(xì)菌經(jīng)革蘭氏染色鏡檢，證實(shí)為革蘭氏陰性的直桿菌。

3.2 生化鑒定

將純化的細(xì)菌分別接種到下列一次性細(xì)菌微量生化發(fā)酵管 （購自杭州濱和微生物試劑有限公司）中，于37℃培養(yǎng)12h，發(fā)現(xiàn)分離菌對葡萄糖、賴氨酸反應(yīng)呈陽性；對鳥氨酸、乳糖和尿素反應(yīng)呈陽性且產(chǎn)氣；對硫化氫、蛋白胨水、衛(wèi)茅醇、苯丙氨酸和西蒙氏枸櫞酸鹽等反應(yīng)呈陰性。生化反應(yīng)結(jié)果證明分離菌為大腸桿菌。

3.3 藥敏試驗(yàn)

分離菌對頭孢噻肟、頭孢曲松等藥物抑菌圈直徑均達(dá)30mm，判定該兩種藥對分離菌均為高度敏感；對丁胺卡那的抑菌圈直徑為18mm，多西環(huán)素為11mm，恩諾沙星為10mm，判定該3種藥對分離菌均為中度敏感；對青霉素、阿莫西林、氨芐西林、氟苯尼考、林可霉素、環(huán)丙沙星、慶大霉素和復(fù)方新諾明等的抑菌圈直徑均為0mm，判定這些藥對對分離菌為不敏感［3］。

3.4 PCR擴(kuò)增及序列分析

將分離菌經(jīng)PCR擴(kuò)增后得到大小為1 500bp的目的條帶。將PCR產(chǎn)物送至北京鼎國生物技術(shù)有限公司測序，將完整系列放入NCBI BLAST的Microbes進(jìn)行序列比對，確定為大腸桿菌O83:H1血清型，判定為致病性大腸桿菌。

4 小結(jié)與討論

4.1 國外著作記載了一種由大腸桿菌菌血癥引起的全身感染，主要發(fā)生于新生至4日齡的豬，也可繼發(fā)于腹瀉或其他一些青年豬的疾病。已知有17個(gè)血清型的大腸桿菌可引起這種全身感染，O83為其中一種［1］。本次發(fā)生于該場中豬（屬青年豬）的急性胃腸炎，部分還伴有仔豬水腫病樣劃水的神經(jīng)癥狀，肺水洗液培養(yǎng)出致病性大腸桿菌，表明發(fā)病豬同時(shí)有菌血癥的存在，可能是因?yàn)樵搱鲈诎l(fā)生本病前一段時(shí)間曾發(fā)生過傳染性胃腸炎，導(dǎo)致豬群抵抗力下降，從而為O83血清型大腸桿菌致病創(chuàng)造了條件，才引發(fā)了該次中豬急性胃腸炎伴全身感染性疾病的發(fā)生。

4.2 氟苯尼考屬氯霉素類廣譜抗菌素，其對革蘭氏陽性和陰性菌都有抑制作用，但對陰性菌的抑制作用較陽性菌的強(qiáng)，大腸桿菌是對該類抗菌素敏感的細(xì)菌之一［2］。發(fā)病后不久，畜主曾用過氟苯尼考來治療過發(fā)病豬，但實(shí)際應(yīng)用效果不好。本次分離菌藥敏試驗(yàn)結(jié)果表明，它對氟苯尼考的抑菌圈直徑為零，可以解釋為何畜主應(yīng)用氟苯尼考治療發(fā)病豬無效。另一方面，將藥敏試驗(yàn)顯示的高度敏感藥物頭孢類抗菌素推薦用于治療發(fā)病豬，才很快將疫情控制。這些情況進(jìn)一步證明大腸桿菌確為本次豬病的病原。

4.3 本次發(fā)病，若考慮不周，就會將其診斷為豬傳染性胃腸炎或豬流行性腹瀉。這兩種病主要表現(xiàn)嘔吐和水樣腹瀉，但它們對中大豬的致死率較低，也沒有劃水樣神經(jīng)癥狀的表現(xiàn)，所以本次發(fā)生的豬病與上述兩種豬病不一樣。表明在診斷豬病時(shí)，對豬群中出現(xiàn)的每一種癥狀都要認(rèn)真考慮，才不致于誤診。

參考文獻(xiàn)：

［1］ B.E.斯特勞等.豬病學(xué)[M].第 8 版.北京：中國農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社，2000∶469～472.

［2］陳杖榴.獸醫(yī)藥理學(xué)[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2007︰218～220.

［3］教郁，高維凡，胡彩光.大腸桿菌耐藥性研究進(jìn)展[J].現(xiàn)代畜牧獸醫(yī)，2013:53～58.

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