魏文生

(青海省剛察縣泉吉鄉(xiāng)畜牧獸醫(yī)工作站，青海 剛察 812300)

仔豬大腸桿菌病是由致病性埃希氏大腸桿菌產(chǎn)生腸道內(nèi)毒素而導致仔豬不同類型腹瀉的一種急性傳染性疾病。目前，養(yǎng)豬場最常發(fā)的腹瀉是仔豬黃白痢，發(fā)病仔豬生長停滯，傳染性極強，病死率極高。本文介紹了對一例新生仔豬腹瀉致死的病料進行了細菌分離鑒定、藥敏試驗，并根據(jù)試驗結果選擇敏感性較高藥物，取得較好治療效果，現(xiàn)將分離鑒定過程總結如下。

1 病料采集

選用某豬場內(nèi)因腹瀉致死的新生仔豬，無菌條件下制備直腸的棉拭子，初步懷疑是仔豬大腸桿菌病。

2 細菌分離培養(yǎng)

將采集的直腸棉拭子浸入適量無菌生理鹽水中進行洗脫，并將洗脫懸液無菌環(huán)境下接種于新制備的麥康凱瓊脂培養(yǎng)基和含4%血清的馬丁肉湯瓊脂培養(yǎng)基上，37℃培養(yǎng)箱中恒溫培養(yǎng)18～24 h后觀察?？梢娫邴溈祫P瓊脂培養(yǎng)基上出現(xiàn)粉紅色、光滑濕潤、邊緣整齊的菌落；在4%血清的馬丁肉湯瓊脂培養(yǎng)基上出現(xiàn)灰白色、圓形隆起、光滑濕潤、邊緣整齊的均一菌落，與仔豬大腸桿菌的形態(tài)特征相符。

3 革蘭氏染色

將麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上的典型菌落進行涂片、革蘭氏染色后，油鏡下鏡檢觀察分離菌形態(tài)及染色特性。發(fā)現(xiàn)分離菌株為革蘭氏陰性小桿菌，兩端鈍圓深染，以單個菌落形態(tài)存在為主，少數(shù)成對出現(xiàn)，與大腸桿菌染色特性相符。

4 生化反應試驗

將試驗分離菌分別進行糖發(fā)酵試驗、吲哚試驗、枸櫞酸鹽試驗、VP試驗、MR試驗等生化反應，觀察反應變化情況。結果顯示分離菌株均能夠發(fā)酵葡萄糖、乳糖、麥芽糖、甘露醇，能產(chǎn)酸、產(chǎn)氣，不能利用蔗糖、枸櫞酸鹽試驗、VP實驗為陰性，吲哚試驗、MR試驗均為陽性，以上試驗結果與大腸桿菌生化反應試驗結果相符。

5 藥敏試驗

選用常用的藥敏片進行藥敏試驗，藥敏片有氟苯尼考、慶大霉素、培氟沙星、卡那霉素、阿莫西林、氨芐青霉素、奇霉素、青霉素、復方新諾明、強力霉素，共計10種。先將分離菌用接種環(huán)接種于含4%血清馬丁肉湯營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上，然后用無菌鑷子將各種藥敏片貼于平板上合理的位置，利于更好的看清楚結果，將10種藥敏片分兩組均勻貼于兩個培養(yǎng)板上，將貼好藥敏片的培養(yǎng)板置于37℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)16～24 h后，測量各藥敏片抑菌圈直徑。結果表明分離菌對培氟沙星、復方新諾明兩種藥物高度敏感，對氟苯尼考、奇霉素、強力霉素三種藥物中度敏感，其余五種均耐藥不敏感。

6 討論

通過以上實驗研究，并結合流行病學調(diào)查、臨床癥狀、病理變化等，可以證明從豬場發(fā)病致死仔豬病料中分離出的細菌為致病性大腸桿菌。藥敏試驗結果表明該株大腸桿菌對培氟沙星、復方新諾明兩種藥物具有高度敏感，對其余的藥物中度敏感或不敏感。該結果不僅為此次疫情的治療提供了重要參考，還反映出該豬場豬群長期不科學使用抗生素類藥物而產(chǎn)生的嚴重耐藥性問題。確診后及時將檢測診斷結果反饋給相關豬場，并指導他們采用高敏藥物培氟沙星、復方新諾明采取積極，取得了理想的效果，疫情得到了有效控制。目前研究發(fā)現(xiàn)仔豬大腸桿菌致病菌血清型眾多，且不同血清型間缺乏有效的交叉保護，同時大腸桿菌極易產(chǎn)生耐藥性，由于之前抗生素的濫用，當前很多常用的藥物如慶大霉素、土霉素、鏈霉素、青霉素等對仔豬大腸桿菌病幾乎治療無效，因此臨床上仔豬大腸桿菌病的防治存在較大難度。

仔豬大腸桿菌病一直困擾著當前的養(yǎng)豬業(yè)，臨床上主要分為仔豬黃痢和白痢兩種，黃痢1～6日齡仔豬易發(fā)病，常于發(fā)病后12～48 h內(nèi)死亡，病死率極高；白痢也稱為仔豬遲發(fā)性大腸桿菌病，多數(shù)病例為15～35日齡仔豬，發(fā)病率可高達87.32%，但死亡率較低。目前，臨產(chǎn)母豬注射大腸桿菌多價菌苗是預防新生仔豬大腸桿菌病的重要措施之一。通常在母豬臨產(chǎn)前45天和15天時分別進行一次強化免疫，以此減少新生仔豬大腸桿菌病的發(fā)生，但因大腸桿菌不同血清型間缺乏交叉保護，故此措施不能完全起到保護。因此，預防仔豬大腸桿菌病還應綜合防范，從養(yǎng)殖場的管理入手，做好母豬及產(chǎn)房衛(wèi)生清潔及消毒工作，加強日常飼養(yǎng)管理工作；保證圈舍合理的飼養(yǎng)密度及定期通風換氣；選擇優(yōu)質、全面、安全的飼料，合理飼喂，提高豬群抵抗力；對于斷奶仔豬，做好過渡管理工作，提高斷奶仔豬的抗病能力；制定科學有效的免疫制度，尤其是要做好豬瘟等重大疫病的基礎免疫工作。