歐陽(yáng)偉強(qiáng)，陳盛文，周柱輝，溫 蕾，陳麗萍

（1．廣東省東莞市厚街鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)技術(shù)服務(wù)中心，廣東 東莞 523960；2．東莞市長(zhǎng)安鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)技術(shù)服務(wù)中心，523846；3．東莞市橫瀝鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)技術(shù)服務(wù)中心，廣東 東莞 523460）

布魯氏菌病不僅給畜牧業(yè)造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失，也對(duì)人類健康構(gòu)成很大的威脅。有研究表明，疫苗免疫在布魯氏菌病的防控中起到很大的作用，研制具有安全性和保護(hù)性好的疫苗是關(guān)鍵。由于目前布魯氏菌的致病機(jī)理和抗原保護(hù)性的研究并不是很透徹，所以對(duì)新型疫苗的研究進(jìn)展并不是很順利。布魯氏菌是細(xì)胞內(nèi)寄生菌，宿主感染后會(huì)引起細(xì)胞免疫和體液免疫。細(xì)胞免疫是清除細(xì)胞內(nèi)細(xì)菌最有效的防御反應(yīng)，細(xì)胞免疫在抑制布病過程中發(fā)揮了很關(guān)鍵的作用。布魯氏菌的外膜抗原在刺激細(xì)胞免疫中起到了不同的作用,激活產(chǎn)生布魯氏菌抗體的抗原是脂多糖 (LPS)，O-側(cè)鏈激活產(chǎn)生的抗體在清除細(xì)菌中起到很重要的作用，但其O-側(cè)鏈不能激活有效的細(xì)胞免疫，所以O(shè)-側(cè)鏈激活產(chǎn)生的抗體對(duì)機(jī)體的保護(hù)是比較有限?；钜呙缰械亩喾N保護(hù)性抗原與疫苗佐劑聯(lián)合起來才能更好地激活產(chǎn)生細(xì)胞免疫。根據(jù)目前的研究來看，在疫苗的選擇中活疫苗是防控布魯氏菌病的有效的好辦法之一。目前，我國(guó)用于布魯氏菌的疫苗主要有牛種布魯氏菌A19菌株弱毒疫苗，羊種布魯氏菌M5菌株弱毒疫苗、羊種布魯氏菌Rev.1弱毒疫苗和豬種布魯氏菌S2菌株弱毒疫苗,在研發(fā)的疫苗主要有基因工程弱毒活疫苗和基因工程活載體疫苗。

1 牛種布魯氏菌A19菌株弱毒疫苗

在布魯氏菌病疫苗的使用中，A19疫苗是家畜中使用最廣泛和最有效的疫苗，A19疫苗又稱S19疫苗，疫苗的菌株是1923年從美國(guó)新澤西洲的牛場(chǎng)分離得到的，剛分離的菌株毒力很強(qiáng)，經(jīng)過實(shí)驗(yàn)室一年以上的傳代致弱，成為疫苗菌株。雖然S19疫苗對(duì)牛的毒力非常弱，但還是可以引起1%～2.5%的懷孕的母牛流產(chǎn)，而且能夠通過接觸疫苗傳染人，因此，在懷孕的母畜和種用的公畜中限制使用S19疫苗。由于S19疫苗有一定的毒力，安全性受到質(zhì)疑，后來美國(guó)科學(xué)家對(duì)S19疫苗菌株進(jìn)行ery基因缺失，使毒力進(jìn)一步減弱。從1956年開始，美國(guó)使用ery基因缺失菌株疫苗，并將其更名為US19，目前，世界上大多數(shù)國(guó)家使用的S19疫苗株是ery基因缺失菌株。我國(guó)使用的A19的疫苗菌株，是上世紀(jì)50時(shí)年代從蘇聯(lián)引進(jìn)的，根據(jù)研究，我國(guó)使用的A19株均未檢測(cè)到ery基因的缺失，在實(shí)驗(yàn)室中使用小鼠和豚鼠中對(duì)A19疫苗株進(jìn)行毒力測(cè)定，試驗(yàn)結(jié)果表明該疫苗菌沒有毒力返強(qiáng)的情況，所以推測(cè)我國(guó)實(shí)際使用的A19株應(yīng)該是1956年前被廣泛使用的S19株。A19疫苗對(duì)牛有比較好的保護(hù)力，但牛的年齡、劑量、免疫途徑和牛群總體免疫情況影響著疫苗的保護(hù)效果。A19菌株屬于布魯氏菌的光滑型，菌外膜的脂多糖（LSP）含有O-側(cè)鏈，可以持續(xù)刺激機(jī)體產(chǎn)生特異性抗體，從而使機(jī)體產(chǎn)生一定保護(hù)力。由于疫苗免疫產(chǎn)生的抗體和野毒感染后產(chǎn)生的抗體都是特異性的抗體，用血清方法檢測(cè)無法區(qū)分疫苗免疫和野毒感染的抗體。A19疫苗對(duì)牛和綿羊免疫效果比較好，對(duì)山羊免疫效果不理想，對(duì)豬免疫無效，懷孕牛、泌乳牛和懷孕的羊禁止免疫。

2 羊種布魯氏菌M5菌株弱毒疫苗

羊種布魯氏菌M5菌株弱毒疫苗是中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所將馬耳他布魯氏菌1型和H2強(qiáng)毒菌株經(jīng)雞傳代弱為M5疫苗株，1969年正式使用。該疫苗最佳的免疫方式是5×109CFU/mL氣霧免疫，可以保護(hù)一年，對(duì)牛、山羊、綿羊和鹿的免疫效果比較好。羊種的M5菌株疫苗的不足之處是菌株不穩(wěn)定，在使用的過程可能會(huì)產(chǎn)生從S型到R型的變異，毒力比較強(qiáng)，弱毒菌株在小鼠體內(nèi)存活時(shí)間超過35w，目前，羊種的M5菌株是我國(guó)在使用布魯氏菌疫苗中毒力最強(qiáng)的菌株。

3 羊種Rev.1弱毒疫苗

羊種Rev.1弱毒疫苗株是1953年美國(guó)科學(xué)家將羊種布魯氏菌野毒株在鏈霉素抗性培養(yǎng)基上不斷傳代得到的S型突變株。該疫苗免疫動(dòng)物后，抵抗野毒侵襲的時(shí)間長(zhǎng)，是目前用于小反芻動(dòng)物最有效的布魯氏菌病疫苗。該疫苗在牛群中的免疫效果和保護(hù)率優(yōu)于S19，但目前Rev.1弱毒疫苗在牛群中的使用比較少。該疫苗在綿羊和山羊產(chǎn)生的免疫應(yīng)答與S19的效果差不多，但產(chǎn)生的抗體持續(xù)時(shí)間更長(zhǎng)，保護(hù)力更強(qiáng)。Rev.1弱毒疫苗毒力比較強(qiáng)，懷孕動(dòng)物用正常的劑量皮下接種疫苗免疫會(huì)引起流產(chǎn)，降低劑量又達(dá)不到保護(hù)力。Rev.1菌株屬于光滑型菌株，有研究表明，Rev.1弱毒疫苗可以采用黏膜途徑免疫，免疫的效果與皮下接種差不多，但有弱毒疫苗在顱淋巴結(jié)內(nèi)復(fù)制，可以減少對(duì)血清學(xué)檢測(cè)方法的干擾。由于Rev.1菌株對(duì)鏈霉素具有抗性，在臨床應(yīng)用中可以免疫疫苗配合使用鏈霉素和四環(huán)素藥物治療布魯氏菌病，但如果人感染Rev.1菌株鏈霉素和四環(huán)素藥物治療效果比較差。雖然Rev.1弱毒疫苗在安全性存在風(fēng)險(xiǎn)，但作為羊種布魯氏菌的代表疫苗菌株，在亞洲國(guó)家用于預(yù)防羊種布魯氏菌病。

4 豬種布魯氏菌S2菌株弱毒疫苗

豬種布魯氏菌S2菌株弱毒疫苗的菌株是1952年由中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所在進(jìn)口母豬流產(chǎn)胎兒分離得到的，在人工培養(yǎng)基傳代7年后變成弱毒株。S2株疫苗毒力比A19株和M5株的弱，對(duì)豬、牛、羊均能產(chǎn)生良好的免疫，優(yōu)點(diǎn)是通過口服不會(huì)引起母畜的流產(chǎn)。S2株疫苗可以通過皮下注射、肌肉注射、口服免疫等多種方式，供豬、牛、羊、牦牛免疫使用。最適宜作口服接種，對(duì)綿羊的保護(hù)率80%、山羊的保護(hù)率80.3%、牛的保護(hù)率61.4%，犢牛的免疫持續(xù)期為3.5年。S2株疫苗的注射法不能用于懷孕家畜、牛和小尾寒羊的免疫。

5 基因工程弱化活疫苗

布魯氏菌病基因工程弱毒活疫苗是通過分子生物學(xué)方法，去掉布魯氏菌的毒力基因，保留保護(hù)性的抗原，重組得到布魯氏菌疫苗株?；蚬こ倘醵净钜呙绨踩暂^高，并且可以用血清學(xué)或病原學(xué)來區(qū)分疫苗株還是野毒株的感染。研究表明，疫苗菌株的保護(hù)力和疫苗毒力有關(guān)，毒力越強(qiáng)保護(hù)力越好，所以在安全性和保護(hù)力方面要綜合考慮。布魯氏菌的毒力基因研究清楚后，通過優(yōu)化強(qiáng)毒株和基因工程缺失分離的野毒株毒力基因開發(fā)新的基因工程疫苗，目前有研究通過，分子生物學(xué)方法敲掉與脂多糖（LPS）合成的相關(guān)基因，得到粗糙型的基因缺失株。B.melitensis 16M和B.suis 2579分別通過利用wboA基因的突變獲得的粗糙型菌株VTRM1和VTRS1菌株，這兩個(gè)菌株插入了Tn5，具有卡那霉素抗性，通過小鼠試驗(yàn)表明這兩個(gè)菌株具有保護(hù)力，但保護(hù)力小于S19?；蚬こ桃呙绲娜秉c(diǎn)就是菌株過度弱化，導(dǎo)致疫苗的保護(hù)力不足。

6 基因工程活載體疫苗

基因工程活載體疫苗是將布魯氏菌的保護(hù)性免疫抗原轉(zhuǎn)載到其他病毒或細(xì)菌的基因組中，如沙門氏菌、牛腺病毒3型?；钶d體疫苗安全性高，免疫效力高，插入外源基因后可以實(shí)現(xiàn)一次免疫預(yù)防多種傳染病。Kaissar等將布魯氏菌的OMP16和L7/L12基因轉(zhuǎn)載至A型流感病毒中，研制成新型的活載體疫苗，通過在懷孕母牛中的試驗(yàn)，疫苗的保護(hù)力與S19相當(dāng)，說明布魯氏菌的活載體疫苗在布魯氏菌病的防控中具有很好的應(yīng)用前景。

目前，我國(guó)的布魯氏菌疫情有上升的趨勢(shì)，做好布魯氏病的防控控制你的源頭在于動(dòng)物，在綜合防控措施中疫苗的免疫起到了很重要的作用。目前，現(xiàn)在現(xiàn)有的布魯氏菌疫苗存在不同的缺陷，不能有效控制疫情的發(fā)生，給布魯氏菌病的診斷也帶來麻煩。通過加強(qiáng)基礎(chǔ)研究，在布魯氏菌病致病機(jī)理和免疫源性研究透徹后，研發(fā)保護(hù)性好、安全、穩(wěn)定的新型疫苗，特別是標(biāo)記疫苗，應(yīng)用于布魯氏菌的凈化規(guī)劃中，具有很重要的意義。

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