王宇陽，任曉暄，鄭 瑀，游江南，賈元萍，劉宇超

（北京中醫(yī)藥大學針灸推拿學院，北京 100029）

抑郁癥是當今世界主要致殘疾病，對社會及家庭造成了巨大的經濟負擔[1]?？挂钟羲幤鹦?，超半數(shù)患者用藥效果不理想，尤其對于輕中度抑郁癥患者，抗抑郁藥的有效性尚待商榷[2]。非藥物療法受到越來越多的關注，針灸在抑郁癥治療中廣受歡迎且臨床療效滿意[3-5]。頻率是電針刺激的重要參數(shù)，不同頻率電針能促進中樞不同神經遞質釋放[6]，可能是影響電針抗抑郁效果的重要原因之一。本實驗旨在研究不同頻率電針刺激對抑郁癥模型大鼠行為學及下丘腦5-羥色胺（5-HT）的影響，探究電針治療抑郁癥的最佳頻率。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物 健康雄性 Wistar 大鼠50只，體質量（220±20） g，清潔級，購自北京市興隆實驗動物養(yǎng)殖廠，生產許可證：SCXK-（軍）2012-0004。

1.1.2 試劑與儀器 蔗糖（國藥集團化學試劑有限公司，分析純）；韓氏（H·A·N·S）LH202型電針儀（北京華衛(wèi)產業(yè)開發(fā)公司）；5-HT酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）試劑盒（華英生物，批號：201612223）；華佗牌針灸針（蘇州醫(yī)療用品廠有限公司）。

1.2 分組 適應性飼養(yǎng)1周后用開野實驗作行為學評分[7]。水平運動和垂直運動總得分低于30分或高于120分的動物予以剔除。50只大鼠按體質量隨機分為對照組、模型組、2 Hz組、50 Hz組和100 Hz 組，各10只，空白組每籠飼養(yǎng)5只，其余組單籠飼養(yǎng)。

1.3 模型復制 采用慢性應激結合孤養(yǎng)的方式造模[8]，模型組和針刺組動物全部孤養(yǎng)，接受7種不同的應激刺激21 d，每日隨機安排以下一種刺激：斷水24 h、斷食24 h、夾尾3 min、晝夜顛倒、冷水游泳（4 ℃，5 min）、電擊足底（30 Hz，5 s）、潮濕墊料，平均每種刺激3次。

1.4 電針方法 造模結束后1周內，電針組接受每日電針治療1次，共7次。方法：將大鼠用鼠套固定，參照《實驗針灸學》[9]選取百會穴和印堂穴。將大鼠用鼠套固定，以30號、1寸毫針針刺，為避免兩針之間短路，在針柄上纏繞絕緣膠布并將兩針之間用棉球隔開。針柄接韓式電針治療儀，以針柄微微抖動為宜，電流強度0.1～0.3 mA，連續(xù)波形，2 Hz組、50 Hz組和100 Hz組的電針頻率分別為2 Hz、50 Hz、100 Hz，留針20 min。模型組用鼠套固定但不針刺。

1.5 行為學檢測 于造模前1 d，造模21 d和電針治療第7天記錄各組大鼠體質量，參照文獻[10]進行開野實驗和糖水消耗量實驗。

1.6 下丘腦5-HT檢測 第28天治療后將各組大鼠斷首取腦，在冰袋上分離下丘腦，冰冷生理鹽水中洗去血液稱重，用0.9%預冷的生理鹽水做勻漿介質制得10%的組織勻漿（W∶V），于低溫冷凍10 000 r/min，離心15 min，取上清液，- 20 ℃保存，嚴格按照5-HT ELISA試劑盒的說明操作，單位用每毫克濕重組織中含量表示（ng/mg）。

1.7 統(tǒng)計學方法 應用統(tǒng)計學軟件SPSS 17.0對原始數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，計量資料以均值±標準差（）表示，組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較用LSD法，P＜0.05為差別有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 一般狀況觀察 造模開始前各組大鼠反應靈敏，毛色光澤，食欲正常，大便成形。28 d時模型組大鼠精神萎靡，反應遲鈍，毛色晦暗，飲食減少，大便稀溏；造模期間因操作不當，模型組，2 Hz組和100 Hz組各有1只大鼠死亡。

2.2 不同電針頻率對CUS大鼠體質量的影響 見表1。

表1 不同電針頻率對CUS大鼠體質量的影響 g

表1 不同電針頻率對CUS大鼠體質量的影響 g

組 別 n 0 d 21 d 28 d空白組 10 228.90±60.27 328.20±74.56 363.70±83.28模型組 9 227.56±69.89 297.67±68.43##320.56±86.31 2 Hz組 9 228.00±79.69 299.78±63.43##335.78±79.86 50 Hz組 10 224.20±67.97 298.00±64.61##332.70±81.19 100 Hz組 9 226.56±72.21 299.56±71.11##330.67±79.09

2.3 不同電針頻率對CUS大鼠開野實驗評分的影響 見表2。

表2 不同電針頻率對CUS大鼠開野實驗評分的影響（x± s ） 分

2.4 不同電針頻率對CUS大鼠糖水消耗量的影響 見表3。

表3 不同電針頻率對CUS大鼠糖水消耗量的影響（x± s ） %

2.5 不同電針頻率對CUS大鼠下丘腦5-HT的影響 見表4。

表4 不同電針頻率對CUS大鼠下丘腦5-HT的影響 ng/mg

表4 不同電針頻率對CUS大鼠下丘腦5-HT的影響 ng/mg

注：與空白組比較，## P＜0.01；與模型組比較，△ P＜0.05，△△ P＜0.01；與2 Hz組比較，▲ P＜0.05，▲▲ P＜0.01

組 別 n 下丘腦5-HT含量空白組 10 12.69±2.00模型組 9 9.56±1.17##2 Hz組 9 14.04±2.03△△50 Hz組 10 11.80±2.16△▲100 Hz組 9 10.61±2.33△▲▲

3 討論

抑郁癥當屬中醫(yī)“癲病”“郁證”范疇，其病變主要在腦，主因情志所傷，痰氣郁結，以致蒙蔽心神，神志逆亂而成。百會穴位于巔頂，具醒神開竅、解郁安神之功。印堂穴位于督脈，督脈與足厥陰肝經會于巔頂之上，內與心、肝、脾、腎等臟腑均有聯(lián)系，有安神定驚、醒腦通竅之功。二穴在針刺治療抑郁癥臨床使用頻率高，具有良好的改善抑郁狀態(tài)作用[11]。

CUS是動物模型中公認的抑郁癥造模方法[12]，本實驗采用CUS結合孤養(yǎng)復制抑郁大鼠模型，造模21 d后觀察到模型組大鼠體質量、水平和垂直運動評分、糖水消耗量顯著下降，證明模型復制成功。

本研究結果表明，電針治療后，大鼠一般狀態(tài)較模型組好轉，各頻率電針組水平運動和垂直運動評分、糖水消耗量均較模型組增多，下丘腦5-HT含量升高[13-15]，證明電針能夠緩解大鼠抑郁狀態(tài)。其中與50 Hz組和100 Hz組比較，2 Hz組水平運動和垂直運動評分、糖水消耗量及下丘腦5-HT含量均明顯提升，抗抑郁效果更佳。電針治療后，雖然各頻率電針組體質量增幅均大于模型組，以2 Hz組最為明顯，但各頻率電針組在體質量方面與模型組比較無明顯差異。該結果可能受個體差異影響較大，體質量不是評估抑郁狀態(tài)的穩(wěn)定指標。針刺過程中，100 Hz組大鼠表現(xiàn)出明顯的躁動不安，而2 Hz組普遍較為安靜，從另一方面驗證了2 Hz抗抑郁效應更佳，在大鼠強迫游泳的試驗中也證明了2 Hz能明顯縮短游泳不動時間，抗抑郁效應優(yōu)于100 Hz[16]。

不同電針頻率可能影響不同腦區(qū)及不同神經遞質的產生，其作用機制有待進一步研究[17]。本實驗發(fā)現(xiàn)50 Hz在體質量、糖水消耗、水平運動及垂直運動評分、下丘腦5-HT等方面改善均優(yōu)于100 Hz，但差別無統(tǒng)計學意義，電針頻率與抗抑郁療效之間是否存在相關關系有待深入探索。因此，電針能夠改善大鼠抑郁狀態(tài)，2 Hz電針抗抑郁療效優(yōu)于50 Hz和100 Hz。

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