閆麗麗

摘要：綜述枸杞中甜菜堿含量測定方法的研究進展，介紹薄層掃描法、高效液相色譜法、比色法、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法等分析測定條件、精密度、回收率，旨在為開展甜菜堿相關(guān)研究提供理論參考。

關(guān)鍵詞：枸杞子；甜菜堿；含量測定；精密度；回收率

中圖分類號：R284.2 文獻標(biāo)識碼：A 文章編號：1674-1161（2017）09-0069-02

枸杞為茄科植物寧夏枸杞的干燥成熟果實，是傳統(tǒng)的藥食同源天然植物，具有滋補肝腎、益精明目的功效?，F(xiàn)代研究表明，甜菜堿是枸杞的主要生物堿之一，具有降脂、抗癌、抗氧化等作用。甜菜堿是一種季銨型水溶性生物堿，易溶于水和甲醇，常溫下極易吸濕潮解，因具有良好的生物活性及理化性質(zhì)且無毒無害，因而被廣泛用于化工制藥、種植養(yǎng)殖及食品生產(chǎn)。目前，甜菜堿檢測方法主要有薄層掃描法、高效液相色譜法、比色法、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法等。綜述甜菜堿檢測方法研究進展，為甜菜堿開發(fā)利用提供參考。

1 枸杞中甜菜堿含量測定方法

1.1 層掃描法

薄層掃描法是2015版《中國藥典》（一部）中規(guī)定的枸杞子中甜菜堿含量測定方法。具體的檢測方法為：甲醇回流提取后，用活性炭濾過，加硫氰酸鉻銨溶液攪拌，再用垂熔漏斗濾過制得供試品溶液；對照品加鹽酸甲醇溶液（0.5→100）制成每1 mL含4 mg的溶液；精密吸取供試品溶液5 μL、對照品溶液3 μL與6 μL，分別交叉點于同一硅膠G薄層板上，以丙酮-無水乙醇-鹽酸（10‥6‥1）為展開劑，預(yù)飽和30 min后展開，取出，揮干溶劑，立即噴新配制的改良碘化鉍鉀試液，放置1～3 h至斑點清晰，在波長515 nm，590 nm下掃描，測量供試品吸光度積分值與對照品吸光度積分值并計算。按干燥品計算，含甜菜堿（C5H11NO2）不得少于0.30%。

雙波長薄層掃描法是指采用兩種不同波長的光束，先后掃描所要測定的斑點，并記錄下此兩波長吸光度之差。對欲測斑點進行原位光譜掃描，根據(jù)斑點的吸收光譜選擇最大吸收峰波長作為樣品的測定波長λS；選擇斑點吸收光譜的基線部分，為該化合物無吸收處的波長，即樣品的參比波長λR。雙波長掃描可使薄層背景不均勻性得到補償，顯著改善基線的平穩(wěn)性和精度。

譚亮等通過優(yōu)化枸杞子樣品提取、脫色時間等前處理條件，建立測定不同來源枸杞子甜菜堿含量的雙波長薄層掃描法（TLCS法）。使用80%甲醇和快速溶劑萃取儀（ASE350）提取枸杞子甜菜堿后，經(jīng)活性炭脫色、雷氏鹽沉淀、丙酮溶解沉淀，采用改進的薄層掃描法測定其含量，檢測波長為530 nm，參比波長為625 nm。測定結(jié)果為：清晰的薄層色譜斑點無干擾；甜菜堿點樣量在3.84～38.40 μg范圍內(nèi)時，線性關(guān)系良好，r=0.999 5；平均加樣回收率為98.30%，RSD=2.55%（n=9）。

1.2 高效液相色譜法

高效液相色譜法具有分離效能高、分析速度快、檢測靈敏度高等優(yōu)點，是目前中藥材含量測定中最常用的分析方法。

方麗等采用高效液相色譜法測定甜菜堿的含量，色譜柱選用Nucleodur Hilic（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動相為乙腈-0.1%三乙胺（82‥18，用磷酸調(diào)pH至7），流速0.6 mL/min，檢測波長196 nm。測定結(jié)果表明：甜菜堿在1.737～34.744 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，r=0.999 9，平均回收率為99.5%，RSD為1.5%。

劉增根等采用反相高效液相色譜法測定柴達(dá)木枸杞和黑果枸杞中甜菜堿的含量，色譜柱選用Hypersil NH2（250 mm×4.6 mm，5 μm），以乙腈∶水（83‥17，V/V）為流動相，流速0.7 mL/min，檢測波長195 nm，柱溫30 ℃，外標(biāo)法定量。測定結(jié)果表明：甜菜堿線性范圍為2.94～29.40 μg（r=0.998 7），枸杞和黑果枸杞的平均回收率（n=5）分別為98.57%和99.07%。

1.3 比色法

比色法通過比較或測量有色物質(zhì)溶液顏色深度來確定待測組分含量，具有簡單、快速、靈敏等優(yōu)點。

吳燕等建立比色法測定枸杞中甜菜堿含量的分析方法，采用活性炭脫色、雷氏鹽沉淀、無水乙醚淋洗、70%丙酮溶解沉淀后，在525 nm波長處檢測。分析結(jié)果表明，甜菜堿的線性范圍為0.1～1.0 mg/mL，在0.1，0.2，0.5 mg/mL添加水平的回收率為108%～112%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.3%～3.7%。

1.4 液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法

液相色譜與質(zhì)譜聯(lián)機技術(shù)結(jié)合了色譜的高分離效能和質(zhì)譜的高選擇性、高靈敏度特點，廣泛應(yīng)用于中藥材含量測定研究。

李元元等采用LC-MS-MS法測定寧夏枸杞子提取物中甜菜堿的含量，色譜柱選用氨基柱（2.1 mm×150 mm，3 μm），柱溫35 ℃，流動相為乙腈-水（80‥20），流速為0.3 mL/min1，進樣量5 μl。質(zhì)譜條件為電噴霧離子源（ESI），正離子模式（Positive），多反應(yīng)監(jiān)測（MRM），干燥氣350 ℃，霧化器壓力50 psi，干燥氣流速12 L/min，毛細(xì)管電壓4 000 V，Agilent UV檢測器，Agilent三重四級桿質(zhì)子檢測器。試驗結(jié)果表明：甜菜堿線性范圍為20～700 ng/mL，平均回收率為99.77%，RSD為2.1%（n=6）。

1.5 離子色譜法

離子色譜法是把離子交換色譜與高效液相色譜技術(shù)相結(jié)合，將改進后的電導(dǎo)檢測器安裝在離子交換樹脂柱后面，以連續(xù)檢測色譜分離的方法，主要用于測定各種離子含量，具有迅速、連續(xù)、高效、靈敏、重現(xiàn)性好等優(yōu)點。

莊紅艷等采用Thermofisher Ion Pac CS19（250 mm×4 mm）陽離子交換色譜柱和CG19（50 mm×4 mm）陽離子保護柱，以甲基磺酸（MSA）為流動相，等度洗脫，流速1.0 mL/min。測定結(jié)果表明：10 min內(nèi)可完成枸杞中甜菜堿的分離檢測；甜菜堿質(zhì)量濃度為10～500 mg/L時，標(biāo)準(zhǔn)曲線具有良好的線性關(guān)系；最低檢出限為1.8 mg/L；精密度良好，保留時間和峰面積的RSD（n=6）分別為0.15%和1.7%；枸杞和大棗的加樣回收率在85.1%～93.4%之間（n=6），平均加樣回收率分別為88.8%和89.7%；樣品在室溫下放置12 h仍穩(wěn)定。endprint

1.6 高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測器法

高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測器測定方法（HPLC-ELSD）適用于無紫外吸收或紫外末端吸收的樣品檢測。該法具有極大的優(yōu)越性：響應(yīng)值不依賴于樣品的光學(xué)性質(zhì)，不論具有何種官能團，所有樣品檢測幾乎具有相同的響應(yīng)分子，未知物和純度測定比紫外檢測更容易更準(zhǔn)確。目前，該檢測方法廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、食品、化工等行業(yè)。

劉靈卓等建立枸杞子中甜菜堿含量的HPLC-ELSD測定方法，采用Hypersil NH2色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動相為甲醇-四氫呋喃-0.2%三氟乙酸（30‥60‥10），流速1.0 mL/min，柱溫25 ℃。試驗結(jié)果表明：甜菜堿進樣量為1.28～12.80 μg時，色譜峰面積具有良好的線性關(guān)系（r=0.999 2）；平均加樣回收率為98.60%，RSD為2.8%（n=6）；樣品中甜菜堿的含量為0.528 1～1.205 4 mg/g。

梁景輝采用HPLC-ELSD測定枸杞子中甜菜堿的含量，色譜柱選用Venusil HILIC 丙基酰胺鍵合硅膠色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動相為乙腈-0.2%冰醋酸溶液（87‥13）。測定結(jié)果表明：甜菜堿在0.403 6～5.045 μg范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系，Y=

1.542 5X+4.072 4，r=0.999 9，平均回收率101.57%，RSD=1.05%（n=6）。

2 結(jié)語

近年來，對枸杞子中甜菜堿含量測定的研究取得了較大進展，包括薄層掃描法、高效液相色譜法、比色法、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法等。然而，還需要通過大量試驗進行深入研究，探索更為精準(zhǔn)、快速的檢測方法，為枸杞子資源的進一步開發(fā)利用提供理論基礎(chǔ)。

參考文獻

[1] 譚亮，冀恬，曹靜亞，等.雙波長薄層掃描法測定不同來源枸杞子中甜菜堿的含量[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2014，26（3）：388-391.

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[3] 劉增根，陶燕鐸，邵赟，等.柴達(dá)木枸杞和黑果枸杞中甜菜堿的測定[J].光譜實驗室，2012， 29（2）：694-697.

[4] 莊紅艷，姜振邦，潘廣文，等.離子色譜法測定枸杞子和大棗中甜菜堿含量[J].中華中醫(yī)藥雜志，2017（9）：65-70.

[5] 梁景輝，賈芙蓉，時璐.HPLC-ELSD測定枸杞子中甜菜堿的含量[J].中國處方藥，2016（2）：32-33.

Abstract： The articlesummarized the research progress on the method fordeterminating betaine in lycium， and introduced analysis and determinating condition， precision and recovery by the methods including TLCS， HPLC， Colorimetryand LC-MSn.The purpose is to provide a theoretical reference for carrying out further correlation study of betaine.

Key words： lycium；betaine； content determination； precision； recoveryendprint