張文泉，鄧 潔，羅國(guó)濤，張 雕

（ 凱里學(xué)院，貴州 凱里 556011）

青錢(qián)柳Cyclocarya paliurus( Batal) Iljinskaja為中國(guó)特有的珍稀瀕危植物，屬胡桃科Juglandaceae青錢(qián)柳屬Cyclocarya[1]，現(xiàn)有研究表明：青錢(qián)柳富含鉀、鈣、鎂、鋅、硒、等多種對(duì)人體有益的中、微量元素及三萜、甾體類(lèi)化合物和黃酮等有機(jī)成分，全株均能入藥，干制葉片為治療II型糖尿病的天然良藥，青錢(qián)柳的水提物還具有降血壓、降血糖、降血脂的作用，其藥用價(jià)值及保健功效顯著，具有廣闊的開(kāi)發(fā)利用前景[2-5]。

青錢(qián)柳為落葉速生喬木，樹(shù)木高大挺拔，枝葉美麗多姿，其果實(shí)從10月至次年5月掛在樹(shù)上像一串串的銅錢(qián)迎風(fēng)搖曳，別具一格，因此又名搖錢(qián)樹(shù)，頗具觀賞性，具有極高的庭院栽培價(jià)值，可作為園林綠化觀賞樹(shù)種。青錢(qián)柳木材輕軟，細(xì)致，有光澤，紋理交錯(cuò)，結(jié)構(gòu)略細(xì)，加工容易，膠粘性和油漆性能好，可作家具及工業(yè)上的優(yōu)良用材；其樹(shù)皮含鞣質(zhì)及纖維，為橡膠及造紙?jiān)?，?shù)皮含鞣質(zhì)，可提制栲膠，亦可做纖維原料。

青錢(qián)柳的自然資源極其匱乏，種子具有深度休眠特性，自然條件下，次年或是多年后才能萌發(fā)，且發(fā)芽率最高僅在0.2%，扦插成活率最高僅45.6%[6-8]，使得青錢(qián)柳的種苗匱乏，嚴(yán)重阻礙其開(kāi)發(fā)利用。植物組織培養(yǎng)為高效可行的無(wú)性繁殖方式，具有繁殖系數(shù)高，周期短，且不受外界環(huán)境條件限制等優(yōu)點(diǎn)，國(guó)內(nèi)外雖然已有對(duì)青錢(qián)柳組織培養(yǎng)的研究，但外植體多采用種胚，外植體來(lái)源有限，操作難度較大，而且通過(guò)胚培養(yǎng)所建立的快繁體系難以保持母樹(shù)的優(yōu)良性狀，或者由于愈傷分化率、生根率低等原因尚未建立青錢(qián)柳的完整組培體系[9-10]等。筆者利用青錢(qián)柳幼嫩葉片為外植體，探討了基本培養(yǎng)基和生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)對(duì)青錢(qián)柳愈傷組織及不定芽發(fā)生的影響，以期為青錢(qián)柳的工廠化育苗提供技術(shù)支持，從而解決青錢(qián)柳開(kāi)發(fā)過(guò)程中資源匱乏問(wèn)題。

1 材料與方法

1.1 材料來(lái)源與處理

試驗(yàn)材料為貴州省雷公山自然保護(hù)區(qū)內(nèi)自然狀況下生長(zhǎng)的青錢(qián)柳當(dāng)年生嫩葉（顏色為淡紅色到嫩綠色）為外植體，首先用洗滌液擦拭表面后，流水沖洗6 h，于超凈工作臺(tái)上，75%酒精消毒30 s，無(wú)菌水洗3次； 0.1% 氯化汞消毒10 min，無(wú)菌水沖洗3～5次，無(wú)菌濾紙吸干，將葉片分割成約1.0 cm2的小方塊，用手術(shù)刀在背面劃4～5條劃痕，接種于已預(yù)備的愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，每瓶接種3個(gè)外植體，每處理3次重復(fù)。以嫩葉為外植體誘導(dǎo)所獲得的愈傷組織為材料，接種于分化培養(yǎng)基上，進(jìn)行愈傷組織不定芽分化試驗(yàn)。以誘導(dǎo)獲得的不定芽為材料，接種于生根培養(yǎng)基上，進(jìn)行根系誘導(dǎo)。

1.2 培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件

誘導(dǎo)愈傷組織的培養(yǎng)基：以WPM，MS，B5為基本培養(yǎng)基，附加不同濃度2,4-D（1.0、2.0、3.0 mg/L），6-BA（0.5、1.0、1.5 mg/L）激素組合；愈傷組織分化培養(yǎng)基：以WPM基本培養(yǎng)基，附加不同濃度激素及外源物，進(jìn)行正交試驗(yàn)，分析不同條件對(duì)青錢(qián)柳葉片誘導(dǎo)愈傷組織分化的影響，各因素水平見(jiàn)表1，以不添加任何激素及外源物質(zhì)的WPM培養(yǎng)基為CK；生根培養(yǎng)基：1/2MS為基本培養(yǎng)基, 附加IBA（0.5、1.0、1.5、2.0 mg/L），以上所有培養(yǎng)基均附加3%蔗糖，6.0 g/L瓊脂，pH值調(diào)至5.8～6.0，培養(yǎng)條件：愈傷組織誘導(dǎo)時(shí)采用暗培養(yǎng)，愈傷組織分化及生根誘導(dǎo)采用光照培養(yǎng)，光照強(qiáng)度為1 500～2 000 lx，光照時(shí)長(zhǎng)為12 h/d，全程培養(yǎng)溫度23～26 ℃。

培養(yǎng)過(guò)程中，定期觀察生長(zhǎng)情況，接種25 d后，統(tǒng)計(jì)不同培養(yǎng)基組合的愈傷組織誘導(dǎo)率。愈傷組織接種于分化培養(yǎng)基后，定期觀察，并統(tǒng)計(jì)各處理的愈傷組織分化率。當(dāng)愈傷組織分化的不定芽生長(zhǎng)至1.5 cm接種于生根培養(yǎng)基后，每一處理接種20個(gè)不定芽，重復(fù)3次，定期觀察根系誘導(dǎo)情況，統(tǒng)計(jì)不定根誘導(dǎo)率及生根數(shù)，測(cè)量根長(zhǎng)。

表1 青錢(qián)柳葉片愈傷組織分化試驗(yàn)各因素水平Table 1 Levels of different factors in leaf segments tissue culture test of Cyclocarya paliurus

其中：愈傷組織誘導(dǎo)率=形成愈傷組織的外植體數(shù)/接種外植體數(shù)×100%；愈傷組織分化率=產(chǎn)生不定芽的愈傷組織數(shù)/接種的愈傷組織數(shù)×100%；不定根誘導(dǎo)率=產(chǎn)生不定根的芽數(shù)/接種芽總數(shù)×100 %。

本試驗(yàn)所得數(shù)據(jù)采用Excel 2010 及SPSS 19.0進(jìn)行分析處理。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同處理對(duì)青錢(qián)柳愈傷組織誘導(dǎo)的影響

采用WPM、MS、B5 3種基本培養(yǎng)基，附加不同濃度的外源激素（2,4-D，6-BA）組合，以青錢(qián)柳葉片為外植體，研究不同培養(yǎng)基及激素組合對(duì)青錢(qián)柳愈傷組織誘導(dǎo)的影響。培養(yǎng)過(guò)程中觀察：8 d時(shí)，葉片切口及劃痕處膨大，14 d時(shí)于膨大處開(kāi)始產(chǎn)生愈傷組織，但不同處理?xiàng)l件下誘導(dǎo)得到的愈傷組織具有顯著差異。筆者將其分為2種類(lèi)型：I型（見(jiàn)圖1）：乳白色，如小米粒狀，質(zhì)地光滑、疏松，體積較大；II型（見(jiàn)圖2）：淡黃色、如水漬狀，質(zhì)地粗糙、致密，體積較小；統(tǒng)計(jì)愈傷組織誘導(dǎo)率并分析后（見(jiàn)表2）得出：相同培養(yǎng)基條件下，不同外源激素組合條件下青錢(qián)柳葉片愈傷組織誘導(dǎo)率均存在極顯著差異（P＜0.05），相同激素組合條件下，WPM培養(yǎng)基上青錢(qián)柳葉片的愈傷組織誘導(dǎo)率最高，愈傷組織誘導(dǎo)率為58.3%～97.6%，愈傷組織90%左右為I型，MS培養(yǎng)基上愈傷組織誘導(dǎo)率為54.2%～87.5%，愈傷組織50%左右為I型， B5培養(yǎng)基上愈傷組織誘導(dǎo)率為37.5%～66.7%，愈傷組織僅有10%左右為I型，由此可知青錢(qián)柳葉片誘導(dǎo)愈傷組織最佳的基本培養(yǎng)基為WPM培養(yǎng)基。

圖1 青錢(qián)柳愈傷組織類(lèi)型IFig.1 Callus types I of C.paliurus

圖2 青錢(qián)柳愈傷組織類(lèi)型IIFig.2 Callus types II of C.paliurus

表2 不同處理對(duì)青錢(qián)柳葉片愈傷組織誘導(dǎo)結(jié)果?Table 2 Result of different treatments on lamina callus induction of Cyclocarya paliurus

采用SPSS19.0進(jìn)行方差分析及多重比較表明：相同培養(yǎng)基條件下，兩類(lèi)激素2,4-D，6-BA的濃度對(duì)青錢(qián)柳葉片愈傷組織誘導(dǎo)率均呈極顯著差異，相同質(zhì)量濃度的 6-BA水平下，愈傷組織誘導(dǎo)率隨2,4-D 質(zhì)量濃度的遞增而呈拋物線狀變化，2,4-D 為2.0 mg/L時(shí)，愈傷組織的誘導(dǎo)最高，當(dāng)2,4-D增加至3.0 mg/L時(shí)，愈傷組織的誘導(dǎo)反而下降，相同質(zhì)量濃度的2,4-D水平下，愈傷組織誘導(dǎo)率與6-BA質(zhì)量濃度的變化關(guān)系與2,4-D一致，均表現(xiàn)為低濃度條件下的激素促進(jìn)愈傷組織的誘導(dǎo)，高濃度的激素抑制愈傷組織的誘導(dǎo)，綜上所述：青錢(qián)柳葉片愈傷組織誘導(dǎo)的最佳培養(yǎng)基組合為：WPM+2.0 mg/L 2,4-D+1.0 mg/L 6-BA，愈傷組織誘導(dǎo)率為97.6%。

2.2 不同處理對(duì)青錢(qián)柳愈傷組織分化的影響

將乳白色，如小米粒狀，質(zhì)地光滑、疏松的愈傷組織置于超凈工作臺(tái)無(wú)菌培養(yǎng)皿上，去除已老化的部分，取中部質(zhì)地疏松的愈傷組織接種于分化培養(yǎng)基上，光照培養(yǎng)14～16 d，空白對(duì)照中的愈傷組織逐漸褐化，失去生活力，其他組合的愈傷組織表面的光澤度明顯增加，17～20 d，愈傷組織表面逐漸出現(xiàn)球形突起（見(jiàn)圖3），隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，愈傷組織表面出現(xiàn)芽點(diǎn)并開(kāi)始萌發(fā)，35～40 d形成不定芽（見(jiàn)圖4）。45 d后統(tǒng)計(jì)愈傷組織分化率，得表3，所得數(shù)據(jù)采用SPSS19.0軟件，采進(jìn)行方差分析及多重比較，比較各因素對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)率的效應(yīng)（見(jiàn)表4）。

圖3 分化的青錢(qián)柳愈傷組織Fig.3 Differentiated callus of C.paliurus

圖4 分化出不定芽的青錢(qián)柳愈傷組織Fig.4 Adventitious buds differentiated from callus of C.paliurus

采用單變量多因素方差分析可知：6-BA、ZT、椰乳3個(gè)因素的伴隨概率P分別為0.043，0.048，0.012， 均 小 于 0.05， 而 2,4-D 的P為0.053，由此可知，6-BA 、ZT、椰乳3因素對(duì)青錢(qián)柳葉片愈傷組織的分化率存在顯著影響，2,4-D對(duì)青錢(qián)柳葉片愈傷組織的分化率無(wú)顯著影響。其中ZT的影響最大，其次是6-BA，影響最小的是椰乳。

表3 不同處理組合對(duì)青錢(qián)柳葉片愈傷組織分化率的影響Table 3 Effects of different treatments on callus differentiation rate of Cyclocarya paliurus

表4 因素間效應(yīng)檢驗(yàn)Table 4 Tests of between-subjects effects

2.2.1 植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)青錢(qián)柳葉片愈傷組織分化的影響

在青錢(qián)柳葉片愈傷組織分化試驗(yàn)中，6-BA這一因素的設(shè)置3水平，水平1（1.0 mg/L）愈傷分化率的均值為54.11%，水平2（2.0 mg/L）愈傷分化率的均值為59.78%，水平3（3.0 mg/L）分化率的均值為55%，基于這些均值采用LSD進(jìn)行成對(duì)比較，得表5。

表5 6-BA各水平成對(duì)比較Table 5 Pairwise comparisons of 6-BA concentrations

由表5可得出，6-BA水平1 與水平2，3 之間的愈傷組織分化率在p≤0.05水平上存在顯著性差異，而水平2與水平3差異不顯著，所以低濃度條件下，提高激素濃度，可明顯提高青錢(qián)柳葉片愈傷組織的分化率，而高濃度的激素則抑制愈傷組織的分化。

在青錢(qián)柳葉片愈傷組織分化試驗(yàn)中，ZT這一因素的設(shè)置3水平，水平1（1.0 mg/L）愈傷分化率的均值為53.44%，水平2（1.5 mg/L）愈傷分化率的均值為54.89%，水平3（2.0 mg/L）愈傷分化率的均值為60.55%，基于這些均值采用LSD進(jìn)行成對(duì)比較，得表6。

表6 ZT各水平成對(duì)比較Table 6 Pairwise comparisons of ZT concentrations

由表6可得出，ZT水平3與水平1，2 之間的愈傷組織分化率在0.05 水平上存在顯著性差異，而水平2與水平1，3差異不顯著，由此可知，青錢(qián)柳愈傷組織分化試驗(yàn)中，提高ZT的濃度能促進(jìn)青錢(qián)柳葉片愈傷組織的分化。

生長(zhǎng)素2,4-D在各因素中對(duì)青錢(qián)柳葉片愈傷組織分化率的影響不顯著，則不對(duì)生長(zhǎng)素2,4-D的各水平做成對(duì)比較， 2,4-D 各水平的愈傷組織分化率均值為：水平1（0.5 mg/L）愈傷組織誘導(dǎo)率為59.67%；水平2（1.0 mg/L）為54.67%；水平3（1.5 mg/L）為54.55%，體現(xiàn)出低濃度的激素促進(jìn)愈傷分化的規(guī)律，由此可知：青錢(qián)柳葉片愈傷組織分化最佳的激素組合為1.0 mg/L 6-BA+2.0 mg/L ZT+ 0.5 mg/L 2,4-D。

2.2.2 外源物質(zhì)對(duì)青錢(qián)柳葉片愈傷組織分化的影響

諸多研究表明：在培養(yǎng)基中加入外源物質(zhì)如：椰乳，香蕉汁，水解蛋白等天然物質(zhì)能促進(jìn)愈傷組織的分化。在青錢(qián)柳葉片愈傷組織分化試驗(yàn)中，椰乳這一因素的設(shè)置3水平，水平1（10%）愈傷分化率的均值為59.67%，水平2（15%）愈傷分化率的均值為55.22%，水平3（20%）分化率的均值為54.11%，基于這些均值采用LSD進(jìn)行成對(duì)比較，得表7。

表7 椰乳各水平成對(duì)比較Table 7 Pairwise comparisons of coconut milk concentrations

由表7可得出，椰乳水平1與水平2，3之間的愈傷組織分化率在0.05 水平上存在顯著性差異，而水平2與水平3差異不顯著，由此可知，青錢(qián)柳愈傷組織分化試驗(yàn)中，椰乳濃度的增加對(duì)青錢(qián)柳葉片愈傷組織的分化率不存在促進(jìn)作用，因此采用較低濃度的椰乳。

2.3 不同激素濃度對(duì)青錢(qián)柳不定芽生根誘導(dǎo)的影響

選取生長(zhǎng)情況一致的不定芽，在超凈工作臺(tái)截取不定芽（1.5 cm）接種于附加不同濃度IBA的1/2MS培養(yǎng)基上，誘導(dǎo)根系，25 d后觀察，在不定芽的基部產(chǎn)生白色的不定根，隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，根系顏色加深，逐步轉(zhuǎn)化為深褐色（見(jiàn)圖5），50d后統(tǒng)計(jì)生根率及根系生長(zhǎng)情況得表8，由表8分析可知：低濃度條件下IBA能促進(jìn)青錢(qián)柳根系的誘導(dǎo)，高濃度的IBA反而抑制根系的誘導(dǎo)，當(dāng)IBA為1.5 mg/L，青錢(qián)柳不定芽根系誘導(dǎo)率為27%，平均根條數(shù)為4.12，平均根長(zhǎng)為1.81 cm，生根效果優(yōu)于其他激素濃度，試驗(yàn)結(jié)果表明：青錢(qián)柳不定芽生根誘導(dǎo)最適的培養(yǎng)基組合為1/2MS+1.5 mg/L IBA。

圖5 根系誘導(dǎo)Fig.5 Roots induced

表8 不同IBA濃度對(duì)不定根誘導(dǎo)的影響Table 8 Adventitious root inductions in different IBA

3 結(jié)論與討論

不少學(xué)者對(duì)青錢(qián)柳器官發(fā)生的直接發(fā)生方式進(jìn)行了研究，如：張志敏、吳群英、胡冬南等[11-13]均采用青錢(qián)柳莖段對(duì)其不定芽的誘導(dǎo)進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)外植體的取材時(shí)間，位置均影響顯著，最適時(shí)間為春季取材，5月份是最佳的取樣時(shí)期，頂芽下1、2節(jié)的幼嫩莖段分化效果較好；尚旭嵐[14]等對(duì)青錢(qián)柳離體胚進(jìn)行快速繁殖研究，結(jié)果表明：采用離體胚為外植體進(jìn)行組織培養(yǎng)時(shí)，污染率低、成苗數(shù)高，為獲得青錢(qián)柳無(wú)菌小植株的有效途徑，但青錢(qián)柳種子空殼率較高，外有堅(jiān)硬的種殼，外植體來(lái)源缺乏。而關(guān)于從幼胚、葉片或莖段為外植體采用間接發(fā)生方式對(duì)青錢(qián)柳組培進(jìn)行研究，大部分僅獲得愈傷組織[15-17]。

本試驗(yàn)采用青錢(qián)柳的幼嫩葉片為外植體誘導(dǎo)得到愈傷組織，愈傷組織再分化出不定芽，不定芽根系誘導(dǎo)獲得完整植株的方式建立青錢(qián)柳的植株再生體系。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，葉片在切口處先脫分化誘導(dǎo)得到愈傷組織形成愈傷組織，愈傷組織再分化形成不定芽，在此過(guò)程中，植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑起到至關(guān)重要的作用，最常用的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑為2,4-D與6-BA組合，常用于葉片、莖段、子葉、胚等不同類(lèi)型外植體愈傷組織的誘導(dǎo)及生長(zhǎng)，但濃度過(guò)高則會(huì)抑制愈傷組織的生長(zhǎng)，易導(dǎo)致玻璃化。愈傷組織誘導(dǎo)過(guò)程中，添加較高濃度的生長(zhǎng)素和較低濃度的細(xì)胞分裂素可以提高愈傷組織的誘導(dǎo)率及愈傷組織的質(zhì)量，大量實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明：濃度比為2：1～10：1之間則能誘導(dǎo)得到愈傷組織，如莫竹承等[18]對(duì)膝柄木葉片組織培養(yǎng)時(shí)采用1.0 mg/L 2,4-D+0.5 mg/L 6-BA組合，愈傷誘導(dǎo)率高為70%；張彥妮[19]等對(duì)‘普瑞頭’百合的組培過(guò)程中采用2.5 mg/L 2,4-D+0.5 mg/L 6-BA愈傷誘導(dǎo)率為85%；丁植磊[20]等對(duì)油茶 12 個(gè)物種花藥愈傷組織誘導(dǎo)過(guò)程中采用2,4-D與6-BA組合，愈傷誘導(dǎo)率均達(dá)到100%，本試驗(yàn)中對(duì)青錢(qián)柳葉片為外植體進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)2.0 mg/L 2,4-D +1.0 mg/L 6-BA 誘導(dǎo)率最高的結(jié)果與以上研究結(jié)果一致。

愈傷組織的分化過(guò)程中，則需要較高濃度的細(xì)胞分裂素和較低濃度的生長(zhǎng)素，這與其他木本植物離體培養(yǎng)在植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)使用的原則上是相同的，不僅取決于生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)的種類(lèi)及其絕對(duì)量，還取決于它們之間的相對(duì)比例，但離體培養(yǎng)成功是否成功，尤其是再分化階段，外源物質(zhì)的存在也起到了一定的作用，諸多研究報(bào)道：在培養(yǎng)基中加入外源物質(zhì)如：椰乳，香蕉汁，水解蛋白等等，能促進(jìn)愈傷組織的分化[21,22]，本實(shí)驗(yàn)中添加椰乳能促進(jìn)青錢(qián)柳愈傷組織的分化，這與前期研究也是相符的。但青錢(qián)柳的離體培養(yǎng)也有不同之處，尤其是愈傷組織分化過(guò)程中，由本實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知：6-BA、ZT兩種分裂素均能對(duì)青錢(qián)柳葉片愈傷組織的分化起到促進(jìn)作用，影響顯著，ZT較6-BA作用更明顯，而2,4-D對(duì)青錢(qián)柳葉片愈傷組織的分化率無(wú)顯著影響。但同為胡桃科核桃屬的諸多核桃品種在離體胚培養(yǎng)時(shí)，添6-BA反而抑制芽苗的增殖[23-25]。在青錢(qián)柳愈傷組織誘導(dǎo)過(guò)程中，采用WPM、MS、B5 3種不同的培養(yǎng)基進(jìn)行篩選，WPM、MS、B5 3種培養(yǎng)基均能夠誘導(dǎo)得到愈傷組織，但培養(yǎng)基的種類(lèi)對(duì)愈傷組織的誘導(dǎo)率及愈傷組織的質(zhì)量存在顯著影響，在植物組織培養(yǎng)中，MS為應(yīng)用最廣泛的基本培養(yǎng)基，但對(duì)諸多針葉樹(shù)種的組織培養(yǎng)中不適應(yīng)[26]，究其原因可能是由于MS培養(yǎng)基中的鹽含量過(guò)高及NH4+和NO3

－含量過(guò)高所致。本試驗(yàn)得出：以青錢(qián)柳幼嫩葉片為外植體誘導(dǎo)愈傷時(shí)，最適的培養(yǎng)基組合為WPM+2.0 mg/L 2,4-D+1.0 mg/L 6-BA，愈傷組織分化WPM+1.0 mg/L 6-BA+2.0 mg/L ZT+0.5 mg/L 2,4-D +10%椰乳的組合處理效果最優(yōu)。青錢(qián)柳愈傷組織分化出不定芽與愈傷組織的狀態(tài)有密切聯(lián)系，只有適宜的的愈傷組織才能誘導(dǎo)出不定芽，在本試驗(yàn)中，只有小米粒狀，質(zhì)地光滑、疏松的愈傷組織能分化出不定芽，而水漬狀的愈傷組織褐化嚴(yán)重，不能進(jìn)一步分化。在生根誘導(dǎo)階段，青錢(qián)柳根系誘導(dǎo)采用1/2MS培養(yǎng)基，降低MS培養(yǎng)基中大量元素的量，低鹽條件下更有利于根系的生長(zhǎng)。

綜上所述，青錢(qián)柳愈傷組織分化的頻率還不是很高，分化率最高只能達(dá)到60%左右，不定芽發(fā)生和發(fā)育不能同步進(jìn)行。誘導(dǎo)形成的不定芽，成苗還存在一定的困難，不定芽雖然誘導(dǎo)得到不定根，形成完整植株，但生根率僅為20%左右，而且側(cè)根較少，難以形成完整的根系，如果大量應(yīng)用于生產(chǎn)中會(huì)受到限制。這也是本試驗(yàn)的局限所在。在青錢(qián)柳的愈傷組織分化實(shí)驗(yàn)中是否還能有其他的激素組合，或是添加其他外源物質(zhì)能更進(jìn)一步的促進(jìn)青錢(qián)柳愈傷組織的分化？有研究表明生根誘導(dǎo)培養(yǎng)基中加入活性炭等物質(zhì)形成黑暗條件有利于根系形成，在青錢(qián)柳根系誘導(dǎo)過(guò)程中采用此方法更有利于生根？后續(xù)的實(shí)驗(yàn)及研究過(guò)程還需對(duì)愈傷組織分化、不定芽生根機(jī)理和調(diào)控的方法進(jìn)行探索，打破愈傷組織分化難、組培苗難以生根的瓶頸，建立更加有效的青錢(qián)柳組培快繁體系。

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