賈一瓊 朱光發(fā)

首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京安貞醫(yī)院感染科（北京100029）

淋巴細(xì)胞的過度活化及其引發(fā)的過度炎癥反應(yīng)與許多疾病的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。近年研究發(fā)現(xiàn)調(diào)節(jié)性B細(xì)胞（regulatory B cells，Bregs）在維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境免疫穩(wěn)態(tài)及調(diào)節(jié)免疫耐受中起到極其重要的作用［1］，并與自身免疫性疾病發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)［2］。本文就Bregs的發(fā)現(xiàn)與表型、生物學(xué)功能及其與自身免疫性疾病的關(guān)系作一簡(jiǎn)要闡述。

1 Bregs的發(fā)現(xiàn)與表型

1974年有學(xué)者發(fā)現(xiàn)將去除B細(xì)胞的脾細(xì)胞過繼轉(zhuǎn)移給豚鼠后，不能抑制其遲發(fā)型超敏反應(yīng)，首次證明了B細(xì)胞的負(fù)向免疫調(diào)控作用，該研究表明B細(xì)胞中存在一群具有免疫調(diào)節(jié)功能的B細(xì)胞亞群，但其具體分子生物學(xué)機(jī)制并未深入闡述。直到1996年，WOLF等［3］在實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎（experimental autoimmune encephalomyelitis，EAE）的小鼠模型中發(fā)現(xiàn)，與有自愈傾向的野生型小鼠相比，EAE可使B細(xì)胞缺陷的C57BL/6小鼠疾病進(jìn)一步進(jìn)展，表明小鼠體內(nèi)可能存在抑制炎癥反應(yīng)的B細(xì)胞亞群。此后，該群B細(xì)胞亞群引起研究者的廣泛關(guān)注。

目前對(duì)Bregs的特異性表型仍沒有統(tǒng)一定論。大量研究發(fā)現(xiàn)，多種B細(xì)胞亞群，如CD24hiCD38hiB細(xì)胞、CD24hiCD27+B細(xì)胞、CD38+CD1d+IgM+CD147+GrB+B細(xì)胞、CD27intCD38hi漿細(xì)胞和CD19+TIM1+B細(xì)胞等均可抑制炎癥反應(yīng)［4-8］，但這些B細(xì)胞亞群中僅有數(shù)量不到20%的B細(xì)胞可分泌白介素?10（interleukin?10，IL?10）并發(fā)揮抑制免疫應(yīng)答的作用，因此，我們將這些起到抑制免疫應(yīng)答并可分泌IL?10的B細(xì)胞亞群統(tǒng)稱為Bregs。

2 Bregs的生物學(xué)功能

Bregs是一類具有負(fù)性免疫調(diào)節(jié)功能的B細(xì)胞亞群，它對(duì)維持機(jī)體的免疫耐受有重要作用。Bregs可通過直接接觸（FasL、穿孔素、PD?L1）和間接接觸（分泌IL?10、TGF?β、IL?35等）來發(fā)揮其免疫效應(yīng)。

Bregs通過分泌IL?10可抑制CD4+T細(xì)胞向Th1、Th17細(xì)胞分化，同時(shí)可抑制Th1、Th17細(xì)胞的活化和分化，并促使CD4+T細(xì)胞向Treg細(xì)胞和Tr1細(xì)胞轉(zhuǎn)化［9］。除CD4+T細(xì)胞外，IL?10+Bregs還可以通過抑制CD8+T細(xì)胞而減少INF?γ的分泌［10］，進(jìn)而抑制抗腫瘤免疫應(yīng)答。對(duì)B細(xì)胞方面，BOONPIYATHAD等［11］在對(duì)過敏患者的研究中發(fā)現(xiàn)，在對(duì)過敏患者進(jìn)行過敏原免疫治療后，患者血漿中CD73-CD71+CD25+IL?10+Bregs及磷脂酶A2特異性的IgG4明顯增多，推測(cè)Bregs能夠調(diào)控B細(xì)胞免疫球蛋白的類別轉(zhuǎn)換。對(duì)固有免疫細(xì)胞方面，Bregs通過分泌IL?10可抑制單核細(xì)胞的活化而減少TNF?α的分泌［12］，還可抑制漿細(xì)胞樣樹突狀細(xì)胞（plasmacytoid dendritic cell，pDC）而使IFN?α分泌減少［13］。

雖然IL?10是Bregs參與抑制免疫應(yīng)答的主要細(xì)胞因子，但仍有一些其他因子，如TGF?β、IL?35、CD1d、CD80、CD86、PD?L1、CTLA?4、IDO、IgG4等參與輔助Bregs與其他免疫細(xì)胞相互作用，進(jìn)而使Bregs發(fā)揮抑制免疫應(yīng)答的功能。由此可見，Bregs在免疫網(wǎng)絡(luò)中具有極其重要作用，明確Bregs在免疫系統(tǒng)中的作用機(jī)制可為采用Bregs治療多種疾病提供理論基礎(chǔ)。

3 自身免疫性疾病

免疫反應(yīng)調(diào)節(jié)異常及免疫耐受的丟失是自身免疫性疾病的重要發(fā)病機(jī)制。目前，在多發(fā)性硬化癥（multiple sclerosis，MS）、系統(tǒng)性紅斑狼瘡（systemic lupus erythemay?ous，SLE）、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（rheumatoid arthritis，RA）、自身免疫性甲狀腺?。╝utoimmune thyroid disease，AITD）、炎癥性腸病、系統(tǒng)性硬化癥、干燥綜合征、1型糖尿病、自身免疫性肝病如原發(fā)硬化性膽管炎等疾病中，均有學(xué)者研究Bregs與疾病發(fā)生發(fā)展、治療及預(yù)后的關(guān)系。一般來說，自身免疫性疾病發(fā)病初期的患者，外周血Bregs含量低于正常水平，但伴隨疾病進(jìn)展、經(jīng)過藥物治療或癥狀緩解之后，其外周血Bregs水平較健康個(gè)體組顯著升高。一定程度上反映了疾病的發(fā)生及發(fā)展，并可指導(dǎo)疾病預(yù)后。

3.1 MSMS是一種慢性進(jìn)行性中樞神經(jīng)系統(tǒng)脫髓鞘的炎癥性自身免疫病，主要由自身反應(yīng)性CD4+T細(xì)胞對(duì)髓鞘自身抗原發(fā)生免疫應(yīng)答所致，自身反應(yīng)性CD8+T細(xì)胞和B細(xì)胞等也參與免疫損傷作用。有研究表明，最早是在MS患者體內(nèi)發(fā)現(xiàn)了抑制性B細(xì)胞。該研究發(fā)現(xiàn)被蠕蟲感染的MS患者外周血中分泌IL?10的CD19+CD1dhiB細(xì)胞數(shù)量明顯增加，且分離出的B細(xì)胞可抑制T細(xì)胞的增殖和IFN?γ生成，同時(shí)與其他幾組患者相比，被蠕蟲感染的MS患者獲得了更好的臨床預(yù)后［14］。在該研究中，雖然很難確定確切的作用機(jī)制，但推測(cè)可能是由于分泌IL?10的Bregs增多而使被蠕蟲感染的MS患者病情改善。在復(fù)發(fā)緩解型多發(fā)性硬化癥（relapsing remitting multiple sclerosis，RRMS）患者中，與健康人和緩解型MS患者相比，復(fù)發(fā)型MS患者外周血中分泌IL?10的Bregs明顯減少［15］。之后SCHUBERT等［16］發(fā)現(xiàn)，經(jīng)過IFN?β治療后，RRMS患者外周血中調(diào)節(jié)性CD19+CD24++CD38++過渡型B細(xì)胞明顯增多，IL?10分泌量也隨之增多。同時(shí)GRUTZKE等［17］發(fā)現(xiàn)，經(jīng)過芬戈莫德治療后，MS患者外周血中的CD38+CD27-CD24+CD5+Breg細(xì)胞數(shù)量明顯增多、分泌IL?10的功能也明顯增強(qiáng)。

3.2 SLESLE是一種非器官特異性的自身免疫性結(jié)締組織病，表現(xiàn)為B細(xì)胞異常增殖、活化，并產(chǎn)生以抗雙鏈DNA抗體為主的多種自身抗體，從而導(dǎo)致的皮膚、關(guān)節(jié)、腎臟、神經(jīng)系統(tǒng)的漿膜、肝臟等多臟器和系統(tǒng)的損傷。有研究發(fā)現(xiàn)，活動(dòng)期的SLE患者外周血中Bregs數(shù)量少且存在功能缺陷，推測(cè)該現(xiàn)象與未成熟的CD19+CD24hiCD38hiB細(xì)胞無法向Bregs分化有關(guān)［18］。與健康個(gè)體的B細(xì)胞相比，SLE患者的CD19+FSChi多克隆活化B細(xì)胞抑制Th細(xì)胞免疫應(yīng)答的能力顯著降低［18］。SLE是一種以IFN?α水平增多及IFN?α誘導(dǎo)的特征基因?yàn)樘攸c(diǎn)的自身免疫性疾病，MENON等［13］研究發(fā)現(xiàn)，低濃度的INF?α可使未成熟的B細(xì)胞向Bregs、漿母細(xì)胞分化，而高濃度的INF?α僅使未成熟B細(xì)胞向漿母細(xì)胞分化，卻不增加Bregs數(shù)量。因此，SLE患者體內(nèi)INF?α表達(dá)增加可引起B(yǎng)regs功能缺乏而漿母細(xì)胞表達(dá)增多，進(jìn)而產(chǎn)生自身抗體的漿細(xì)胞增多，最終引起SLE疾病發(fā)生［13］。此外，從SLE患者體內(nèi)分離出的CD24hiCD38hiBregs不能抑制由超活化的pDCs產(chǎn)生的 IFN?α［13］。這表明免疫調(diào)節(jié)性pDC?Breg反饋回路的功能在SLE患者體內(nèi)是受損的。

不少研究發(fā)現(xiàn)SLE患者體內(nèi)B細(xì)胞存在多種異常狀態(tài)，因此常使用利妥昔單抗（B細(xì)胞消耗劑）治療SLE患者［19］。利妥昔單抗治療SLE患者后發(fā)現(xiàn)，重生的B細(xì)胞中，未成熟B細(xì)胞與記憶性B細(xì)胞數(shù)量的比值越高越容易達(dá)到長(zhǎng)期緩解［20］，推測(cè)該現(xiàn)象與更多的未成熟B細(xì)胞向Bregs分化有關(guān)，進(jìn)而可改善 SLE 患者的臨床預(yù)后［13，21］。同時(shí)發(fā)現(xiàn)，Bregs通過其表面表達(dá)的CD1d分子，可維持iNKT細(xì)胞的穩(wěn)態(tài)［21］。這些體外研究表明，SLE患者中新生的Bregs可增強(qiáng)其他免疫抑制細(xì)胞的抑制能力。

3.3 RARA是一種慢性、對(duì)稱性多滑膜關(guān)節(jié)炎和關(guān)節(jié)外病變?yōu)橹鞯募膊?，與CD4+T細(xì)胞、B細(xì)胞及漿細(xì)胞浸潤(rùn)滑膜、漿細(xì)胞分泌自身抗體有關(guān)，伴隨軟骨和骨組織的進(jìn)行性破壞。RA患者外周血中CD24hiCD38hiBregs數(shù)量明顯減少，對(duì)其功能進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn)，它不能抑制Th17應(yīng)答且不能促使CD4+T細(xì)胞向Treg分化［9］。同時(shí)發(fā)現(xiàn)，RA患者的Bregs頻率與疾病活動(dòng)程度呈負(fù)相關(guān)［9］。最近有學(xué)者發(fā)現(xiàn)，RA患者外周血中CD24hiCD27+B細(xì)胞、IL?10+TIM1+B細(xì)胞和 IL?10+CD5+CD1dhiB細(xì)胞的頻率顯著降低［8，22-23］。而另一項(xiàng)研究中卻發(fā)現(xiàn)，RA患者外周血中IL?10+Bregs數(shù)量是增加的［24］，推測(cè)導(dǎo)致上述研究結(jié)果相悖的原因可能是體外誘導(dǎo)IL?10分泌的刺激物不同造成的。

3.4 AITDAITD主要包括彌漫性毒性甲狀腺腫（Graves'disease，GD）病和橋本甲狀腺炎（hashimoto thyroiditis，HT），其共同特點(diǎn)是對(duì)自身甲狀腺組織的免疫耐受缺陷，從而引起多種抗體和淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)。最早KRISTENSEN等［25］發(fā)現(xiàn)，雖然經(jīng)甲狀腺球蛋白刺激后，GD患者的IL?10+Bregs分泌明顯增多，且游離T3的水平與IL?10+Bregs頻率呈正相關(guān)。但研究提示不能排除AITD患者體內(nèi)存在B細(xì)胞的功能缺陷。此后另一項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)，HT患者外周血中CD24+CD38+B細(xì)胞數(shù)量雖然明顯增多，但能分泌IL?10的CD24+CD38+Bregs數(shù)量卻明顯減少。對(duì)其功能進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn)，HT患者的CD24+CD38+B細(xì)胞與T細(xì)胞共培養(yǎng)液中，T細(xì)胞增殖及分泌TNF和IFN?γ能力增強(qiáng)，而向共培養(yǎng)液中加入重組人IL?10后，T細(xì)胞增殖及分泌IFN?γ、TNF能力又明顯減弱，表明Bregs主要通過分泌IL?10發(fā)揮抑制免疫應(yīng)答的作用［26］。

3.5 其他天皰瘡患者體內(nèi)CD24hiCD38hiB細(xì)胞分泌的IL?10明顯減少，同時(shí)其抑制Th1應(yīng)答的能力明顯減弱［27］。COLLIOU 等［28］觀察了一組經(jīng)利妥昔單抗治療天皰瘡患者前后外周血Bregs的變化，發(fā)現(xiàn)對(duì)治療敏感的患者血中CD24hiCD38hiB細(xì)胞數(shù)量和IL?10分泌量較治療前明顯增加，而與未經(jīng)治療和對(duì)治療不敏感的患者2次檢測(cè)變化不大。此外，炎癥性腸病、1型糖尿病、銀屑病、系統(tǒng)性硬化癥患者中均發(fā)現(xiàn)，Bregs頻率明顯降低，IL?10分泌減少，且Bregs數(shù)量的降低與疾病的進(jìn)展程度相關(guān)。

4 結(jié)語(yǔ)

在過去的十多年中，大量的研究表明，Bregs在維持免疫耐受和抑制炎癥反應(yīng)中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用，因此有不少學(xué)者提出通過消除Bregs或體內(nèi)、體外擴(kuò)增Bregs等方法用于改善疾病的預(yù)后。但仍存在治療風(fēng)險(xiǎn)和一些尚未解決的問題，體外擴(kuò)增的Bregs過繼轉(zhuǎn)移至體內(nèi)后如何維持其表型和功能？體內(nèi)擴(kuò)增Bregs時(shí)是否存在同時(shí)誘發(fā)其他各型細(xì)胞發(fā)生促炎反應(yīng)的潛在風(fēng)險(xiǎn)？如何確保Bregs可轉(zhuǎn)移至治療的靶位點(diǎn)？這些都需要進(jìn)一步的基礎(chǔ)及臨床實(shí)驗(yàn)來闡明。